閆志強(qiáng) 徐登峰 付文貴 陳春林 唐紅梅 朱買勛 翟少欽

摘要：【目的】篩選出對雞球蟲病具有良好治療效果的中獸藥處方，以確保養(yǎng)雞業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展?！痉椒ā繉?4羽患有球蟲病且每克糞便球蟲卵囊數(shù)（OPG）超過105個的病雞隨機(jī)分為7組（處方①～處方⑥及感染對照組），每組12羽，另取12羽同日齡的健康仔雞作為空白對照組。各處方處理組均按2.4 mL/kg的劑量給藥，每天1次，連用7 d，感染對照組及空白對照組不投喂任何藥物。試驗期間觀察球蟲病雞的臨床表現(xiàn)，測定其生長性能、存活率、血便和盲腸病變計分、卵囊值及抗球蟲指數(shù)（ACI），并采集盲腸組織制作病理切片，綜合評價中獸藥處方對雞球蟲病的臨床治療效果。【結(jié)果】給藥后，各處方處理組球蟲病雞精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，采食量增加，血便減少，尤其以處方①和處方③的恢復(fù)效果較好;在6個抗球蟲中獸藥處方中以處方③的平均日增重最高、料重比最低，除處方③外，其他處方處理組均有病雞死亡;處方③的ACI為170.41，依據(jù)藥物效果判定標(biāo)準(zhǔn)可知，處方③對球蟲病雞的治療效果良好;病雞盲腸組織病理切片觀察結(jié)果顯示，處方①和處方③的盲腸組織結(jié)構(gòu)正常，上皮細(xì)胞排列有序，未見有明顯的組織病理損傷，與空白對照組相比無明顯差異?！窘Y(jié)論】處方③（青蒿∶常山∶仙鶴草∶地榆=5∶2∶2∶1）對雞球蟲病的治療效果良好，其ACI為170.41，且能有效改善球蟲病雞受損的盲腸組織，加快其腸道功能恢復(fù)。

關(guān)鍵詞： 雞球蟲病;中獸藥處方;血便;盲腸病變;抗球蟲指數(shù)（ACI）;組織病理學(xué)

中圖分類號： S858.31? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）10-2322-07

Screening of traditional Chinese medicine prescription against chicken coccidiosis and its pathological effects on cecal

tissue of sick chicken

YAN Zhi-qiang， XU Deng-feng， FU Wen-gui， CHEN Chun-lin， TANG Hong-mei，

ZHU Mai-xun， ZHAI Shao-qin*

（Chongqing Academy of Animal Sciences， Chongqing? 402460， China）

Abstract：【Objective】To ensure the sustainable and healthy development of the chicken industry， this test screened out traditional Chinese medicine compounds with good therapeutic effects on chicken coccidiosis. 【Method】Eighty-four chickens with coccidiosis and more than 105 oocysts per gram of feces were randomly divided into seven groups（prescription ① to ⑥ and infected control group），with 12 chickens in each group. Another 12 healthy chickens of the same age were used as the blank group. Each prescription group was administered at a dose of 2.4 mL/kg once a day for 7 consecutive days. The infected control group and the blank group were not treated with any drugs. During the test， the clinical mani-festations of chickens were observed. Meanwhile， the relative weight gain rate， survival rate， bloody stool and cecal lesion score， oocyst value and anticoccidial index（ACI） were determined. At the same time， intestinal pathological sections were made and observed which were used to evaluate the clinical treatment effect of drug prescription on chicken coccidiosis comprehensively. 【Result】After administration， the mental state of coccidiosis chickens recovered varying degrees in each drug group， the feed intake increased， and the blood stool decreased， especially prescription ① and ③. In six drug groups， the prescription ③ had the highest average daily gain and the lowest feed-to-weight ratio.Chickens died in other prescription treatment groups except for prescription ③， and the anticoccidial index （ACI） of prescription ③ was 170.41. According to the judgment standard of drug efficacy， the prescription ③ had a good therapeutic effect on coccidiosis chickens， the cecal histopathological section observation showed that the cecal tissue structure of prescription ① and ③ were normal， the epithelial cells were arranged in order， and no obvious tissue damage was observed. There was no significant difference in pathological damage compared with the blank control group. 【Conclusion】Prescription ③（Artemisia annua∶Changshan∶agrimony∶sanguisorba=5∶2∶2∶1） have a good therapeutic effect on chicken coccidiosis， the ACI is 170.41 and it can improve the intestinal damage caused by coccidia infection of the cecum and accelerate the recovery of intestinal function.

Key words： chicken coccidiosis; Chinese veterinary drug prescription; bloody stool; cecal lesions; anticoccidial index（ACI）; histopathology

0 引言

【研究意義】雞球蟲病是由艾美耳屬（Eimeria）多種球蟲混合感染引起的一種腸道寄生蟲病，以15～45日齡的雛雞最易感，發(fā)病率一般高達(dá)50%～70%，死亡率為20%～30%，嚴(yán)重者可達(dá)80%（李超等，2018）。艾美耳球蟲主要侵染腸道上皮細(xì)胞，導(dǎo)致病雞生長緩慢，飼料轉(zhuǎn)化率低，產(chǎn)蛋量下降。全球每年因雞球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)30億美元，在波蘭每年因球蟲病造成的直接和間接經(jīng)濟(jì)損失約5100萬歐元（林雨鑫等，2014;Zhang et al.，2019），而我國每年支出的抗球蟲藥物成本在6億～8億元，約占雞病防治總費用的1/3，隨著我國集約化養(yǎng)雞業(yè)的迅速發(fā)展，這一數(shù)據(jù)還將急劇上升（郭志廷等，2015）。目前，雞球蟲病的防治主要使用疫苗和抗球蟲藥物，但由于雞球蟲基因組龐大、種類繁多，致使雞球蟲疫苗在應(yīng)用過程中存在諸多問題，尚未得到大面積推廣應(yīng)用（Lehman et al.，2009）?；瘜W(xué)藥物在控制雞球蟲病暴發(fā)和流行中發(fā)揮了重要作用，但養(yǎng)殖場大規(guī)模、長時間使用極易產(chǎn)生球蟲耐藥性和藥物殘留等問題（Chapman and Jeffers，2014;畢菲菲等，2018;李超等，2018）。因此，尋找不易產(chǎn)生耐藥性且無藥物殘留的化學(xué)藥物替代品用于雞球蟲病防治已迫在眉睫?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】大量研究表明，單味中藥或復(fù)方制劑對雞球蟲病有較好的治療效果。王偉偉等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方口服液對雞柔嫩艾美爾球蟲病有一定的防治效果，抗球蟲指數(shù)（ACI）為178.22;楊峰昆（2010）研究表明白頭翁、血見愁和仙鶴草提取物的抗球蟲效果評價為中效;林青等（2011）研究證實由常山、黃連和大黃組成的中藥復(fù)方制劑具有一定的抗球蟲效果;郭志廷等（2013）研究表明，常山提取物具有良好的抗球蟲效果，主要是減輕病雞盲腸和十二指腸的病理癥狀，具有綠色環(huán)保、低毒低殘留的特點;阮祥春等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，2%中藥添加劑對雞球蟲病有一定的預(yù)防效果;宋萍等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素與柳氮磺胺吡啶聯(lián)用后能在減少磺胺類藥物劑量的前提下提高抗球蟲療效，且無明顯毒副作用;鄭寅等（2014）研究表明，中藥腸血平顆粒對人工感染雞球蟲病有一定防治效果，其抗球蟲效果評價為中效;藍(lán)麗華（2016）研究發(fā)現(xiàn)，鴉膽子提取物具有明顯的抗雞球蟲病作用，抗球蟲效果可達(dá)中等或良好;黃鑫（2017）研究表明，青蒿粉能減輕柔嫩艾美耳球蟲侵染雞盲腸所致的病理癥狀和組織病變，減少卵囊排出，具有較好的抗球蟲效果，且存在劑量依賴關(guān)系?！颈狙芯壳腥朦c】目前，已有大量研究根據(jù)中獸醫(yī)藥理論及臨床辨證論治原則，以中藥為組分針對雞球蟲病進(jìn)行組方，但其治療效果尚未明確?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以患球蟲病的自然病例雞為研究對象，進(jìn)行中藥處方臨床治療效果篩選，旨在篩選出對雞球蟲病具有良好治療效果的中獸藥處方，確保養(yǎng)雞業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

1 材料與方法

1. 1 試驗動物

患球蟲病的自然病例雞為20～25日齡重慶青腳雞，經(jīng)執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師通過臨床癥狀和實驗室檢測每克糞便球蟲卵囊數(shù)（OPG）超過105個，共84羽。健康仔雞由重慶永川一品種雞場提供，體重200～230 g/羽，共12羽。球蟲病雞納入原則：（1）臨床上精神沉郁，羽毛蓬松，頭卷縮，食欲減退，雞冠和可視黏膜貧血、蒼白，逐漸消瘦，病雞常排紅色葫蘿卜樣糞便、咖啡色糞便或血糞;（2）對疑似球蟲病雞逐只進(jìn)行糞便采樣，并參照GB/T 18647—2002《動物球蟲病診斷技術(shù)》進(jìn)行檢測，將確診為球蟲感染且依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)判定為重度感染（OPG>10×104個）的雞納入試驗動物。

1. 2 受試藥物

1. 2. 1 受試藥品 青蒿、茜草、常山、仙鶴草、地榆、黃芪、甘草、白頭翁和肉桂等均購自重慶榮昌區(qū)華森大藥房，按照處方比例配制后進(jìn)行煎煮提取，煎煮3次，每次1 h，合并煎煮液并進(jìn)行濃縮，濃縮至1 mL藥液含原生藥1 g，備用。

1. 2. 2 處方設(shè)計 將上述藥材進(jìn)行合理組方，按以下比例進(jìn)行配伍。處方①：青蒿;處方②：青蒿∶茜草=3∶2;處方③：青蒿∶常山∶仙鶴草∶地榆=5∶2∶2∶1;處方④：常山∶仙鶴草∶黃芪∶白頭翁∶肉桂=20∶10∶10∶6∶5;處方⑤：青蒿∶仙鶴草∶黃芪∶白頭翁∶肉桂=60∶10∶10∶6∶5;處方⑥：青蒿∶常山∶仙鶴草∶白頭翁∶苦參∶茜草∶烏梅∶黃芪∶甘草=8∶5∶5∶4∶4∶4∶4∶4∶2。

1. 3 試驗雞飼養(yǎng)管理

納入的球蟲病雞在相同環(huán)境下飼喂，籠養(yǎng)，每組1籠，每籠12羽，各組間相互隔開;以保溫?zé)艄┡?，環(huán)境溫度23～25 ℃，正常免疫，飼喂不含任何藥物添加劑的飼料，自由飲水和采食。

1. 4 試驗雞分組及處理

將84羽確診為球蟲感染且OPG超過105個的病雞隨機(jī)分為7組，每組12羽，另取12羽同日齡的健康仔雞作為空白對照組。給藥方式采用飲水給藥，即給藥前先斷水4 h，然后將藥液放入飲水器中供試驗雞自由飲取，給藥劑量為2.4 mL/kg。試驗分組及處理方法詳見表1。

1. 5 臨床癥狀觀察

試驗期間分別在上午9：00和下午16：00打掃圈舍衛(wèi)生前觀察試驗雞的精神狀態(tài)、采食、飲水、運動狀況及糞便情況，并詳細(xì)記錄。

1. 6 生長性能測定

試驗雞于試驗前后分別稱重，記錄給料量和剩余料量，計算日采食量、日增重和料重比，綜合評判中獸藥處方對患球蟲病仔雞生長性能的影響。

相對增重率（%）=各組病雞平均增重/空白對照

組的平均增重×100

日均增重=（末重-初重）/試驗天數(shù)

平均增重=（末重-初重）/每組試驗動物數(shù)

料重比=日均采食量/日均增重

存活率（%）=組內(nèi)存活雞數(shù)量/試驗前組內(nèi)總雞

數(shù)×100

1. 7 血便及盲腸病變計分

血便計分：從給藥前1 d至試驗結(jié)束，每天檢查糞便并記錄血便情況。0分：100%糞便不帶血;1分：1%～25%糞便帶血;2分：26%～50%糞便帶血;3分：51%～75%糞便帶血;4分：76%～100%糞便帶血。試驗結(jié)束時解剖所有試驗雞，根據(jù)盲腸病變的嚴(yán)重程度進(jìn)行計分（表2），若兩側(cè)盲腸病變不一致，則以嚴(yán)重一側(cè)為準(zhǔn)進(jìn)行判定，并計算其病變值。病變值=每組平均病變計分×10。

1. 8 糞便球蟲計數(shù)

于給藥后第0、3、5和7 d采集每羽試驗雞的糞便樣品進(jìn)行稱重處理，參照GB/T 18647—2002《動物球蟲病診斷技術(shù)》計算OPG。具體方法：將收集的糞便樣品稱重，加入少量自來水?dāng)噭?，?jīng)60目尼龍網(wǎng)過濾后自來水沖洗濾網(wǎng)。濾液經(jīng)2500 r/min離心10 min，棄上清液，沉淀加入一定量飽和食鹽水?dāng)噭?，然后用麥?zhǔn)嫌嫈?shù)板進(jìn)行計數(shù)，并計算卵囊值。

卵囊值（%）=各組卵囊排出量/感染對照組卵囊

排出量×100

1. 9 抗球蟲指數(shù)測定

通過評估試驗雞的血便情況、OPG、增重率、病變計分和死亡率，以綜合評價各處方的藥物效果（李龍瑞等，2019）。藥物效果判定標(biāo)準(zhǔn)：ACI小于120，治療效果差;ACI為120～160，治療效果中等;ACI為161～180，治療效果良好;ACI大于180，治療效果優(yōu)秀。ACI計算公式：

ACI=（相對增重率+存活率）-（病變值+卵囊值）

1. 10 盲腸組織病理切片制作

試驗結(jié)束時，解剖試驗雞并采集其盲腸組織，采用4%多聚甲醛固定組織樣本，經(jīng)修塊、包埋、切片及HE染色后，于顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化，并以顯微成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照，記錄組織學(xué)損傷情況。

1. 11 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，分別進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s多重比較。

2 結(jié)果與分析

2. 1 臨床癥狀觀察結(jié)果

試驗前，球蟲病雞均表現(xiàn)出精神狀態(tài)不良，運動量減少，羽毛蓬松無光澤，頭卷縮，多聚堆，怕冷，采食量降低，消瘦，排血便。給藥后，除感染對照組外，各處方處理組球蟲病雞精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，采食量增加，運動量增多，血便減少，羽毛開始平整，恢復(fù)光澤，尤其以處方①和處方③的恢復(fù)效果較好。

2. 2 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞生長性能的影響

由表3可知，試驗前各組試驗雞的體重間無顯著差異（P>0.05，下同）;至試驗結(jié)束時，處方①、處方③和處方④球蟲病雞的體重明顯升高，但與感染對照組球蟲病雞相比差異不顯著;處方③的球蟲病雞平均增重顯著高于處方②和處方⑤的球蟲病雞（P<0.05，下同），與空白對照組試驗雞相比差異不顯著;在平均日增重方面，處方③的球蟲病雞顯著高于處方②、處方⑤和處方⑥的球蟲病雞，與空白對照組試驗雞相比差異也不顯著;在6個抗球蟲中獸藥處方中以處方③的料重比最低。

2. 3 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞存活率的影響

由表4可知，除處方③外，其他5個處方組均有球蟲病雞死亡，其中，處方②和處方⑥的球蟲病雞死亡數(shù)最多（4羽），處方①、處方④和處方⑤的球蟲病雞各死亡1羽。處方①～處方⑥的球蟲病雞成活率分別為91.67%、66.67%、100.00%、91.67%、91.67%和66.67%。

2. 4 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞血便計分的影響

由表5可知，各處方試驗組球蟲病雞的血便計分整體上隨給藥天數(shù)的增加呈逐漸降低趨勢，至給藥第7 d球蟲病雞的血便明顯減少;感染對照組球蟲病雞的血便計分雖然降低，但降幅不明顯。

2. 5 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞病變值的影響

由表6可知，各處理組球蟲病雞均有盲腸病變，且感染對照組、處方①、處方②和處方⑥的病變較嚴(yán)重，病變值均在10.00以上，而處方③、處方④和處方⑤的病變較輕微。

2. 6 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞治療效果的影響

由表7可知，處方①～處方⑥的ACI分別為122.40、28.58、170.41、125.16、99.41和48.76，其中以處方③的ACI最高。依據(jù)藥物效果判定標(biāo)準(zhǔn)可知，處方③對球蟲病雞的治療效果良好，處方①和處方④對球蟲病雞的治療效果中等，處方②、處方⑤和處方⑥對球蟲病雞的治療效果差。

2. 7 抗球蟲中獸藥處方對球蟲病雞盲腸組織形態(tài)的影響

由圖1可看出，空白對照組、處方①和處方③試驗雞盲腸組織結(jié)構(gòu)正常，上皮細(xì)胞排列有序，未見有明顯的組織病理損傷;感染對照組和處方⑥試驗雞盲腸組織有大量黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落、黏膜固有層和黏膜下層有大量炎性細(xì)胞浸潤;處方②試驗雞盲腸黏膜上皮有少量細(xì)胞壞死脫落;處方④試驗雞盲腸黏膜固有層中有少量炎性細(xì)胞浸潤;處方⑤試驗雞盲腸黏膜固有層中有較多炎性細(xì)胞浸潤。

3 討論

目前，雞球蟲病的防治主要使用磺胺類及地克珠利等抗球蟲藥物，但大規(guī)模、長時間添加使用極易帶來雞球蟲耐藥性和藥物殘留等安全隱患。大量研究表明，中藥對雞球蟲病具有良好的治療效果（王偉偉等，2009;藍(lán)麗華，2016;黃鑫，2017）。del Cacho等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素能顯著抑制卵囊壁形成及降低卵囊孢子化率，進(jìn)而起到抗球蟲的作用。郭志廷等（2013）研究表明常山提取物對人工感染雞柔嫩艾美耳球蟲病的療效顯著。本研究依據(jù)中獸醫(yī)理論對雞球蟲病進(jìn)行臨床辨證論治，發(fā)現(xiàn)雞球蟲病初期表現(xiàn)為食少神怠，便溏帶血，口渴喜飲，證見實熱入侵胃腸，藥物選擇時宜用苦寒瀉下、殺蟲除積類中藥，因此選用抗蟲中藥、抗蟲中藥+涼血止血中藥、抗蟲中藥+補(bǔ)益中藥進(jìn)行組方。

本研究選用OPG超過105個的球蟲病雞為研究對象，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)判定均屬于重度感染（OPG>10×104個），經(jīng)過7 d的自由飲水給藥，結(jié)果顯示，處方③球蟲病雞的相對增重率和存活率相對較高，而病變值及卵囊值相對較低，抗球蟲效果明顯;處方①和處方④有一定的抗球蟲作用但效果不明顯，處方②、處方⑤和處方⑥的ACI較低，無明顯抗球蟲效果。依據(jù)雞球蟲病治療原則，應(yīng)以清熱燥濕、涼血止痢為主（郭志廷等，2015）。處方③中，青蒿、常山和仙鶴草等均性味苦寒以清熱，而配合地榆酸澀以斂血止血又止瀉，可能是其治療效果良好的主要原因;而在處方④和處方⑤中黃芪性微溫，肉桂大熱，降低抗球蟲藥的寒性，清熱效果降低，因此治療效果不明顯;此外，本研究選用重度感染的球蟲病雞，血便明顯且次數(shù)多，此時病雞津液流失嚴(yán)重，性寒類中藥多起瀉下作用，進(jìn)而加重其腹瀉程度。

盲腸是雞的重要消化器官之一，其組織結(jié)構(gòu)完整是行使消化吸收功能的前提條件。艾美耳球蟲主要侵染雞盲腸，使盲腸黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，損傷盲腸組織，從而導(dǎo)致雞增重緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率低，嚴(yán)重者甚至死亡（Blake and Tomley，2014）。本研究的盲腸病理切片觀察結(jié)果顯示，雞感染球蟲后其盲腸組織損傷嚴(yán)重，上皮細(xì)胞脫落，黏膜層有大量炎性細(xì)胞浸潤;給藥7 d后，除處方⑥球蟲病雞的盲腸組織無好轉(zhuǎn)外，其他處方藥物組均有好轉(zhuǎn)趨勢，尤其以處方①和處方③的恢復(fù)效果較好，與空白對照組相比無明顯差異，說明處方①和處方③可有效改善球蟲病雞受損的盲腸組織，加快腸道功能恢復(fù)。

4 結(jié)論

綜合各項評價指標(biāo)，以處方③對雞球蟲病的治療效果良好，其抗球蟲指數(shù)為170.41，且能有效改善球蟲病雞受損的盲腸組織，加快其腸道功能恢復(fù)。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）