朱淼　侯怡鈴　唐賢　宋志強　丁祥

摘要本研究以從竹蓀中分離純化并經(jīng)不同截留分子量的透析袋透析所得到的DI-1和DI-2為研究對象，借助傅里葉變換紅外光譜技術(shù)（FTIR）和核磁共振波譜法（NMR）對其結(jié)構(gòu)進行研究。結(jié)果表明，F(xiàn)IIR光譜顯示，不同截留分子量的透析袋所得DI-1和DI-2的多糖結(jié)構(gòu)明顯，無其他結(jié)構(gòu)，為多糖純品，其單糖是以吡喃糖苷鍵的形式存在，但DI-1和DI-2具有不同的空間結(jié)構(gòu);HNMR譜結(jié)果顯示，DI-1由4種單糖構(gòu)成，DI-2由3種單糖組成。上述結(jié)果表明，不同截留分子量的透析袋會得到結(jié)構(gòu)不同的多糖。

關(guān)鍵詞 竹蓀多糖;透析袋;傅里葉變換紅外光譜技術(shù)（FTIR）;核磁共振波譜法（NMR）

中圖分類號 TS255.1

文獻標識碼 A

文章編號 1007-5739（2019）07-0206-02

竹蓀（Dictyophora?indusiata）是擔子菌亞門（Basidiomycotina）鬼筆科（Phallaceae）竹蓀屬（Dictyophora）的一種食藥用真菌，又稱竹笙、竹參，有“菌中皇后”之稱，其味道鮮美、營養(yǎng)豐富，具有降血壓降血脂降膽固醇的功效"，是一種珍貴的素食材料。

真菌多糖主要是從真菌的子實體、菌絲體發(fā)酵液中分離出來的一種活性多糖，在抗菌抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等方面有重要作用B。王憲偉研究表明，竹蓀多糖能夠抑制枯草芽孢桿菌、黑曲霉等細菌和真菌的生長，并且對細菌的抑制效果低于對真菌的抑制效果。鞏貴麗5研究表明，竹蓀多糖具有較好的抗氧化活性，能夠較好地清除DPPH.和O一自由基。葉建方等0研究表明，竹蓀多糖能夠誘導小鼠S180腹水瘤細胞凋亡。胡婷等17-8研究表明，竹蓀多糖可以減輕砷對大鼠肝臟的影響。

以上研究主要集中于竹蓀多糖的抑菌作用抗氧化抗腫瘤等方面，但對于不同截留分子量的透析袋對竹蓀多糖結(jié)構(gòu)的影響研究仍較少，因而本研究就不同截留分子量的透析袋透析所得到的多糖結(jié)構(gòu)進行比較，從而為竹蓀多糖的提取提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

竹蓀（Dictyophora?indusiata）子實體由西華師范大學生命科學學院西南野生動植物資源保護教育部重點實驗室提供。試驗主要試劑及儀器為DEAE-52纖維素柱（生興生物技術(shù)（南京）有限公司），透析袋SephadexG-200（Mw≥7kDa）（biosharp公司），透析袋SephadexG-200（Mw≥3.5kDa）（biosharp公司），NaOH、NaCl和苯酚（生工科技（四川）有限公司），無水乙醇、濃硫酸、濃鹽酸（上緯精細化工（上海）有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000A（上海亞榮生化儀器廠），電熱恒溫水浴鍋WBK-3B（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司），落地式大容量冷凍離心機LYNX6000centrifuge（Thermo?Scientific），臺式離心機Centrifuge5418R（eppendorf），冷凍干燥機（博鑫儀器。

1.2試驗方法

1.2.1竹蓀多糖的提取。竹蓀粗多糖的提取參考DINGX[9]的方法，提取后的粗多糖經(jīng)DEAE-52纖維素柱純化后分別用截留分子量3500Da透析袋和7000Da透析袋進行透析，冷凍干燥，得到的物質(zhì)分別為DI-1和DI-2。

1.2.2，傅里葉紅外光譜分析。稱取DI-1和DI-2各2mg與200mg干燥后的KBr在白熾燈下混合研磨壓片，用FT一IR在400～4000cm-1區(qū)間內(nèi)掃描得到DI-1和DI-2的紅外光譜10-1。1.2.3核磁共振法（NMR）分析。稱取干燥后的DI-1和DI-2各10mg分別溶于0.5mL重水（D2O），離心取上清液于核磁管中，BrukerDRX-600（300）型核磁共振波譜儀檢測HNMR信號，得到DI-1和DI-2的HNMR譜2），借助軟件MestReNova分析HNMR譜結(jié)果。

2結(jié)果與分析

2.1DI-1和DI-2的傅里葉變換紅外光譜（FTIR）分析

從圖1和圖2可以看出，DI-1和DI-2的FTIR光譜在1600～4000cm范圍內(nèi)具有多糖的特征吸收峰。波數(shù)在3430cm-1附近出現(xiàn)的較強且寬的吸收峰，可歸屬為-OH伸縮振動1s;波數(shù)為2850～3010cm區(qū)域出現(xiàn)的吸收峰分別歸屬為-CH2，-CH3的反對稱伸縮振動和對稱伸縮振動6;波數(shù)為1630～1730cm-1區(qū)域的吸收峰歸屬為醛羰基C=O伸縮振動7];波數(shù)1400～1399cm-1區(qū)域的吸收峰歸屬為醛基-CHO的C-H面內(nèi)彎曲振動峰7波數(shù)在1100cm-1附近的吸收峰為D-吡喃糖環(huán)非對稱伸縮振動，是吡喃糖環(huán)內(nèi)酯和羥基的吸收產(chǎn)生的吸收峰，由糖環(huán)上的C-0-C環(huán)內(nèi)醚C-O的伸縮振動和C-O-H中的0-H變角振動所引起，為葡聚糖典型的紅外光譜信號108-19比較DI-1和DI-2的紅外光吸收光譜發(fā)現(xiàn)，它們的光譜總體比較相似，但峰形和峰的吸收強度有差別。在特征峰區(qū)域（1600～4000em），DI-1在3426.80em一l處出現(xiàn)了一個寬化了的0-H伸縮振動吸收譜帶，這是由于DI-1中的0-H形成了分子內(nèi)或分子間氫鍵叨;DI-2在3430.76em-1出現(xiàn)了一個較尖銳的0-H伸縮振動吸收峰，這是由于DI-2中的O-H由于空間位阻不能形成氫鍵或形成的氫鍵較弱導致的7，說明DI-1和DI-2具有不同的空間結(jié)構(gòu)。DI-1和DI-2在波數(shù)為2850～3010cm-1的區(qū)域都各自出現(xiàn)了2個吸收峰，且DI-1的吸收強度較DI-2的減弱，表明其-CH2的含量有一定的差異0;而在波數(shù)1630～1730cm-1區(qū)域內(nèi)，DI-1出現(xiàn)的吸收峰為肩縫，DI-2出現(xiàn)的吸收峰為對稱峰[7，根據(jù)峰形狀的不同可推測出兩者所含的醛羰基C=0不同，可能是由于其單糖組成的數(shù)量和種類不同導致的。

在指紋峰區(qū)域（500～1600cm-1），DI-1和DI-2在波數(shù)為1400em-1和1100em-1附近都出現(xiàn)了吸收峰，并且吸收峰的吸收強度和峰形基本一致;DI-1和DI-2在波數(shù)1100cm-1附近出現(xiàn)的吸收峰表明其中含有吡喃糖環(huán)18此外，特別值得注意的是，DI-1在559.81cm-1還具有1個吸收峰，，而DI-2在此附近并未出峰，該峰是C-H搖擺振動引起的2，推測DI-1分支較多，為多分支的分型結(jié)構(gòu)，DI-2分支少，有密集緊實的聚集行為20。

2.2DI-1和DI-2的'HNMR譜分析

圖3為DI-1的'HNMR譜圖。圖譜結(jié)果顯示，在4.5～5.5ppm范圍內(nèi)，DI-1有4處異頭氫質(zhì)子H-1的化學位移，分別為δ4.99、δ4.95.δ4.88、δ4.67，這表明DI-1由4種單糖組成;δ4.99，δ4.95處的異頭氫質(zhì)子化學位移指示為a型吡喃糖13，δ4.88，δ4.67處的異頭氫指示為β型吡喃糖3。由此可說明，組成DI-1的單糖中既有a構(gòu)型的吡喃糖，也有β構(gòu)型的吡喃糖;δ3.40～84.20之間的化學位移是DI-1糖苷環(huán)碳原子C-2到C-6的質(zhì)子重疊信號叫。

圖4為DI-2的'HNMR譜圖，在4.5～5.5ppm范圍內(nèi)，DI-2有3處異頭氫質(zhì)子H-1的化學位移，分別為δ5.04、δ4.93、δ4.67，這表明DI-2由3種單糖組成，且δ5.04處的異頭氫質(zhì)子化學位移指示為a型吡喃糖13），δ4.93、δ4.67的異頭氫質(zhì)子化學位移指示為β型吡喃糖;表明組成DI-2的單糖中既有a型吡喃糖，也有β型吡喃糖13]δ3.60～84.40之間的質(zhì)子化學位移是DI-2糖苷環(huán)碳原子C-2到C-6的質(zhì)子重疊信號21。

HNMR譜圖結(jié)果顯示，DI-1有4種異頭氫，表明DI-1由4種單糖組成;DI-2有3種異頭氫，表明DI-2由3種單糖組成。在3.4～4.4ppm范圍內(nèi)，DI-1的質(zhì)子重疊信號主要出峰區(qū)和DI-2類似，如在δ3.60δ3.70δ3.80δ3.90、δ4.00、δ4.10附近都有信號峰;但此范圍內(nèi)出現(xiàn)的峰也有差別，例如DI-1在δ4.36和δ4.26未出峰，而DI-2在δ4.36和δ4.26有較弱的信號峰，推測DI-1與DI-2可能具有相同的主鏈結(jié)構(gòu)，但具有不同的分支。

3結(jié)論與討論

本試驗利用傅里葉紅外光譜技術(shù)和核磁共振技術(shù)測定DI-1和DI-2的結(jié)構(gòu)，紅外光譜圖顯示，DI-1和DI-2為糖類化合物，其多糖結(jié)構(gòu)明顯，無其他結(jié)構(gòu)，為多糖純品，組成其多糖的單糖為吡喃糖;DI-1分支較多，為多分支的分型結(jié)構(gòu);DI-2分支少，有密集緊實的聚集行為。

HNMR譜圖結(jié)果顯示，DI-1和DI-2都由a構(gòu)型的吡喃糖和β構(gòu)型的吡喃糖組成;DI-1有4種異頭氫，表明DI-1由4種單糖組成;DI-2的'HNMR譜圖顯示其有3種異頭氫，表明DI-2由3種單糖組成，并且DI-1和DI-2在C-2和C-6質(zhì)子信號重疊區(qū)域除具有相似的主要出峰信號外，還具有不同的質(zhì)子信號。

綜上所述，不同截留分子量的透析袋會得到結(jié)構(gòu)不同的竹蓀多糖，2種竹蓀多糖的生物活性還有待于進一步的研究。

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