韓赫林　李義強(qiáng)　崔格格　譚添

【摘要】 目的：探討乳腺癌中Ulk1過表達(dá)與患者TNM分期和癌癥復(fù)發(fā)的關(guān)系。方法：選取2013年3月-2015年5月在本院治療的乳腺癌患者196例，根據(jù)TMN分期分為T1期94例、T2期42例、T3期36例、T4期24例，檢測(cè)并觀察不同分期患者的Ulk1蛋白表達(dá)及陽性率，分析Ulk1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系、乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)因素。結(jié)果：T1期Ulk1蛋白表達(dá)均高于T2、T3、T4期，T2期Ulk1蛋白表達(dá)均高于T3、T4期，T3期Ulk1蛋白表達(dá)高于T4期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;T1、T2、T3、T4期患者Ulk1陽性率逐漸降低（P<0.05）;Ulk1蛋白表達(dá)與年齡無關(guān)（P>0.05），分化程度越高、浸潤(rùn)深度越深、有淋巴血管間隙浸潤(rùn)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ulk1蛋白陽性表達(dá)率越低（P<0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有淋巴血管間隙浸潤(rùn)是乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（OR=4.20、5.02，P<0.05），Ulk1蛋白表達(dá)陽性是乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)的保護(hù)因素（OR=0.48，P<0.05）。結(jié)論：Ulk1蛋白在乳腺癌的發(fā)生進(jìn)展過程中起抑制作用，TNM分期越高，Ulk1蛋白陽性率越低，Ulk1蛋白表達(dá)陽性是乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)的保護(hù)因素。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌; Ulk1; TNM分期; 癌癥復(fù)發(fā)

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between Ulk1 overexpression in breast cancer and TNM staging and cancer recurrence.Method：A total of 196 patients with breast cancer in our hospital from March 2013 to May 2015 were selected.According to TMN stage，they were divided into 94 patients with T1 stage，42 patients with T2 stage，36 patients with T3 stage and 24 patients with T4 stage.The expression and positive rate of Ulk1 protein in patients with different stages were detected and observed，the relationship between Ulk1 protein expression and clinicopathological characteristics and the recurrence factors of breast cancer were analyzed.Result：The expression of Ulk1 protein in stage T1 was higher than those of stage T2，T3 and T4，the expression of Ulk1 protein in stage T2 was higher than those of stage T3 and T4，and the expression of Ulk1 protein in stage T3 was higher than that of stage T4，the differences were statistically significant（P<0.05）.The positive rate of Ulk1 in patients with stage T1，T2，T3 and T4 decreased gradually（P<0.05）.The expression of Ulk1 protein was not related to age（P>0.05），the higher the differentiation degree，the deeper the infiltration depth，the infiltration of lymphatic vessel space and lymph node metastasis，the lower the positive expression rate of Ulk1 protein（P<0.05）.Lymph node metastasis and lymphatic interstitial infiltration were risk factors for cancer recurrence in breast cancer patients（OR=4.20，5.02，P<0.05），positive expression of Ulk1 protein was a protective factor for cancer recurrence in breast cancer patients（OR=0.48，P<0.05）.Conclusion：Ulk1 protein inhibits the occurrence and progression of breast cancer，the higher TNM stage，the lower the positive rate of Ulk1 protein，the positive expression of Ulk1 protein is a protective factor for cancer recurrence in breast cancer patients.

【Key words】 Breast cancer; Ulk1; TNM stage; Cancer recurrence

First-authors address：First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.14.038

乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤，在我國(guó)女性惡性腫瘤排名第一[1-2]。2012年全球乳腺癌新發(fā)病例超過120萬，我國(guó)每年新增約21萬乳腺癌患者[3-5]。近年來我國(guó)乳腺癌發(fā)病率正逐年上升，流行趨勢(shì)為城市高于農(nóng)村，沿海地區(qū)高于內(nèi)地。乳腺癌嚴(yán)重影響了患者的生活及生存質(zhì)量，因此，對(duì)乳腺癌發(fā)病機(jī)制及治療藥物的研究顯得尤為重要[6]。不協(xié)調(diào)的51樣激酶1（Unc-51-like kinase 1，Ulk1）是細(xì)胞自噬過程中的正向調(diào)節(jié)因子，在多種外周組織（心臟、大腦）中正常表達(dá)，對(duì)胚胎發(fā)育、免疫系統(tǒng)調(diào)控、血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著重要作用[5-6]，參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖與分化等一系列生理活動(dòng)。研究表明，Ulk1在癌癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，能通過腫瘤細(xì)胞的自噬作用，且Ulk1表達(dá)與腫瘤組織的級(jí)別高低、TNM分期有重要關(guān)系[7-8]。因此本文研究乳腺癌中Ulk1過表達(dá)與患者TNM分期和癌癥復(fù)發(fā)的相關(guān)性，為乳腺癌患者的早期診斷、治療、預(yù)后提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年3月-2015年5月在本院乳腺外科確診的乳腺癌患者196例。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18歲;意識(shí)清晰;患者的預(yù)計(jì)生存期均>12個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重精神病史;合并其他腫瘤;肝腎功能不全;存在其他重大器官疾病。其中患者年齡47～68歲，平均（57.5±10.8）歲，均行乳腺癌病理組織檢查;病理分期采用國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）推薦的TNM分期，其中T1期94例、T2期42例、T3期36例、T4期24例;患者均自愿提供前乳腺癌組織標(biāo)本，用作分析Ulk1蛋白的表達(dá)?；颊撸ɑ蚧颊咧毕涤H屬）均簽署知情同意書。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 ELISA測(cè)定Ulk1蛋白水平 按照無菌條件操作，實(shí)驗(yàn)所有器具在使用前均用高壓滅菌，烘干。將保存在-80 ℃冰箱中的乳腺癌組織取出解凍。稱取0.1 g乳腺癌組織，加入少量液氮，在研缽中迅速將乳腺癌組織碾碎至粉末狀;將組織粉末轉(zhuǎn)入2 mL Eppendorf管中，加入1.2 mL PBS（pH 7.4），充分振蕩混勻，4 ℃下2 000 r/min，離心20 min。仔細(xì)收集上清液。獲取乳腺癌組織勻漿后，采用Elisa法檢（試劑盒購(gòu)于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司）測(cè)乳腺癌組織中的Ulk1蛋白表達(dá)量。

1.2.2 Ulk1在T1～4期中的表達(dá)水平的測(cè)定 免疫組化方法測(cè)定Ulk1在T1～4期中的表達(dá)，制作常規(guī)5 μm乳腺癌組織石蠟切片，3% H2O2溶液常溫阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶活性，微波修復(fù)抗原，PBS常規(guī)沖洗，1% CXCR7抗體工作液（購(gòu)于英國(guó)Abcam公司），4 ℃過夜，加入二抗（IgG），室溫30 min，加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。采用雙盲法統(tǒng)計(jì)結(jié)果，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400）計(jì)數(shù)，無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分，同時(shí)計(jì)數(shù);陽性細(xì)胞>50%為（+++），26%～50%為（++），6%～25%為（+），陽性細(xì)胞≤5%為（-），（-）及（+）歸為陰性表達(dá)組，（++）及（+++）歸為陽性表達(dá)組。

1.3 觀察指標(biāo) 檢測(cè)并觀察患者不同分期患者的Ulk1蛋白表達(dá)及陽性率，分析Ulk1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，對(duì)患者進(jìn)行隨訪，分析乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)的影響因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn);復(fù)發(fā)因素分析采用logistic回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床病理特征組中Ulk1蛋白水平的表達(dá) T1、T2、T3、T4期患者Ulk1蛋白水平分別為（2.67±0.19）、（1.83±0.09）、（1.25±0.25）、（0.75±0.18）ng/mL;T1期Ulk1蛋白表達(dá)高于T2、T3、T4期（t=20.200、24.102、46.121，P=0.000、0.000、0.000），T2期Ulk1蛋白表達(dá)高于T3、T4期（t=14.013、34.335，P=0.000、0.000），T3期Ulk1蛋白表達(dá)高于T4期（t=11.679，P=0.000）。

2.2 不同臨床病理特征組中Ulk1陽性表達(dá)率比較 T1、T2、T3、T4期患者Ulk1陽性率分別為：94.7%（89/94）、85.7%（36/42）、61.1%（22/36）、37.5%（9/24）;T1、T2、T3、T4期患者Ulk1陽性率逐漸降低（字2=26.241，P=0.000），見圖1。

2.3 Ulk1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 Ulk1蛋白表達(dá)與年齡無關(guān)（P>0.05），分化程度越高、浸潤(rùn)深度越深、有淋巴血管間隙浸潤(rùn)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ulk1蛋白陽性表達(dá)率越低（P<0.05），見表1。

2.4 乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)因素分析 對(duì)所有患者均進(jìn)行為期3年的隨訪，截至隨訪結(jié)束，乳腺癌患者癌癥復(fù)發(fā)共64例。單因素分析結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙浸潤(rùn)、Ulk1蛋白陽性與復(fù)發(fā)有關(guān)（P<0.05），見表2;以乳腺癌是否復(fù)發(fā)為因變量（無=0，有=1）進(jìn)行多因素Logistics回歸分析，結(jié)果顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙浸潤(rùn)是乳腺癌患者復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，Ulk1蛋白陽性是乳腺癌患者復(fù)發(fā)的保護(hù)因素（P<0.05），見表3。