林顯湛　盧偉全　陳世文　彭志超　黃自立

摘 要 農(nóng)村散養(yǎng)家禽雖然在整個家禽飼養(yǎng)行業(yè)所占份量很小，但依然普遍存在。飼養(yǎng)散養(yǎng)家禽的多為老年人以及他們在家?guī)蛶У膶W(xué)齡前兒童，是散養(yǎng)家禽容易傳播的禽流感包括H5亞型、H7N9的易感人群。為切合農(nóng)村實(shí)際，加強(qiáng)散養(yǎng)家禽H5+H7N9以及新城疫免疫工作，對35羽試驗(yàn)雞進(jìn)行了禽流感（H5 Re-8+H7N9 Re1）+新城疫同時免疫，抗體水平合格率分別達(dá)到97.14%、97.14%和94.29%，證明對農(nóng)村散養(yǎng)家禽禽流感和新城疫同時免疫效果理想。

關(guān)鍵詞 H5;H7N9;重組疫苗;免疫抗體水平

中圖分類號：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.12.078

禽流感（Avianinfluenza，AI）是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類高度接觸性、急性傳染病。禽流感病毒屬于正黏病毒科流感病毒屬A型禽流感病毒[1]。禽流感病毒由很多亞型，其中認(rèn)為H5和H7亞型多為高致病性強(qiáng)毒株[2]。東莞市一直以來重視高致病性禽流感免疫工作，但在散養(yǎng)家禽方面，經(jīng)常遇到的是散養(yǎng)戶認(rèn)為免疫滅活苗后容易出現(xiàn)不良反應(yīng)，甚至影響產(chǎn)蛋、個別出現(xiàn)死亡等，拒不履行強(qiáng)制免疫主體責(zé)任。為了探索更切合農(nóng)村基層、更便于操作的免疫程序，對5個家禽散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的家禽進(jìn)行了禽流感+新城疫同時免疫，并與單純免疫禽流感的方法進(jìn)行比對，其中H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗體水平均為97.14%，遠(yuǎn)高于單純免疫組的60.00%和55.00%，證明在農(nóng)村基層應(yīng)可完善免疫程序。

1 材料與方法

1.1 家禽血清

在2019年3月采自東莞市農(nóng)村雞散養(yǎng)戶，日齡均在120～150 d，一組為同時免疫1次禽流感滅活苗+新城疫弱毒苗，劑量為0.5 mL和1羽份，一組為單純免疫1次禽流感滅活苗，劑量為0.5 mL。以翅靜脈采血，以3 500 r·min-1離心15 min 分離獲得待檢血清，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.2 試劑

1.2.1 1%雞紅細(xì)胞懸液

采集實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公雞的血液與阿氏液等體積混合，用pH值7.2的0.01 mol·L-1 PBS液洗滌3次，每次以1 000 r·min-1離心10 min，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)1%雞紅細(xì)胞懸液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 抗原和陽性血清

H5亞型禽流感抗原（Re-8株）、H7N9（Re1株）、ND（La Sota株）及相對應(yīng)毒株的陽性血清。

1.2.3 主要耗材和儀器

96孔“V”型反應(yīng)板，離心機(jī)，8道移液器，微量震蕩器。

1.3 方法

按照高致病性禽流感診斷技術(shù)、新城疫診斷技術(shù)規(guī)定的血凝與血凝抑制方法操作。根據(jù)東莞市動物疫病監(jiān)測方案規(guī)定，家禽免疫后21天進(jìn)行免疫效果監(jiān)測，以完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI的滴度，H7N9、ND以HI效價大于或等于41og2判陽性、H5以大于或等于5log2判陽性，判定為抗體合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 同時免疫禽流感+新城疫的免疫抗體水平

共檢測35份血清樣品，H5 Re-8株和H7N9 Re1株免疫抗體水平均為97.14%，ND為94.29%，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)，詳細(xì)結(jié)果見表1。

2.2 單純免疫禽流感的免疫抗體水平

共檢測20份血清樣品，H5 Re-8株免疫抗體水平為60.00%，H7N9 Re1株為55.00%，ND不作比較，有3羽雞出現(xiàn)不良反應(yīng)，其中1例為精神沉郁，1例為食欲不振，1例為下痢。詳細(xì)結(jié)果見表2。

3 討論

農(nóng)村散養(yǎng)家禽免疫難度不僅在免疫密度上，而且在免疫效果上。例如2019年春防期間，東莞市調(diào)查摸底應(yīng)免散養(yǎng)家禽為17.38萬羽，經(jīng)過集中免疫后，免疫密度達(dá)到97.89%，仍有接近0.37萬羽散養(yǎng)家禽由于散養(yǎng)戶認(rèn)為免疫禽流感滅活苗后，容易出現(xiàn)不良反應(yīng)如精神沉郁、食欲不振、下痢以及產(chǎn)蛋下降等，嚴(yán)重者出現(xiàn)死亡，而拒絕履行強(qiáng)制免疫義務(wù)。在已免疫的散養(yǎng)家禽方面，由于難以做到像規(guī)模養(yǎng)殖場一樣多次免疫，滅活苗單靠一次免疫，未必能達(dá)到良好的免疫效果。因此，探索針對農(nóng)村散養(yǎng)家禽的、可操作性強(qiáng)的免疫程序，對防控高致病性禽流感，尤其是保障散養(yǎng)戶以及其家人身體健康尤為重要。本次試驗(yàn)探索同時免疫禽流感+新城疫，一方面降低了不良反應(yīng)的概率和癥狀，另一方面通過一次免疫可以產(chǎn)生較高的免疫抗體水平，適合在農(nóng)村基層進(jìn)一步試驗(yàn)推廣。

本次試驗(yàn)所選取的試驗(yàn)雞，均來自三鳥批發(fā)市場，蓄肥養(yǎng)殖50～70 d，日齡均在120～150 d。由于散養(yǎng)戶拒絕多次采集血清，因此未能在免疫前檢測原有抗體水平以作比較，目前正在物色合適的散養(yǎng)場點(diǎn)作相關(guān)比較。

同時免疫可能和目前規(guī)模養(yǎng)殖場免疫程序不相符，但同時免疫并不是首次使用，目前我國一直在使用的禽流感-新城疫基因工程苗，包括H9亞型+ND、H5亞型+ND，都已在實(shí)際生產(chǎn)中得到廣泛使用，并取得一定效果。以往存在質(zhì)疑的ND抗原血凝素受體位點(diǎn)借助于自身病毒空間結(jié)構(gòu)優(yōu)勢，比AI的血凝素結(jié)合受體位點(diǎn)更具有優(yōu)勢[3]，在本次試驗(yàn)中并未得到明顯體現(xiàn)，相關(guān)機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

我國自2018年12月開始已轉(zhuǎn)換禽流感新毒株，在東莞市家禽規(guī)模養(yǎng)殖場已全部清理的情況下，農(nóng)村散養(yǎng)家禽是防控高致病性禽流感的重點(diǎn)，春防期間正逐步過渡新毒株疫苗進(jìn)行免疫注射，在8—9月秋防集中免疫期間，將進(jìn)一步探索完善針對農(nóng)村散養(yǎng)家禽的免疫程序，爭取達(dá)到一次免疫就可以達(dá)到良好免疫效果的目標(biāo)，降低高致病性禽流感疫情和人感染病例發(fā)生的風(fēng)險。

參考文獻(xiàn)：

[1] Y.M.Saif，H.J.Barnes，J.R.Glisson，等.禽病學(xué)[M].第11版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2] 張進(jìn).高致病性禽流感免疫程序的優(yōu)化及應(yīng)用[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[3] 陸桂麗，汪萍，沙依蘭古麗，等.禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rL-H5株）接種肉雞后免疫抗體水平消長規(guī)律分析[J].中國獸醫(yī)雜志，2010（12）：39-42.

（責(zé)任編輯：劉昀）