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        西藏林芝散養(yǎng)藏雞新城疫抗體ELISA檢測分析

        2019-08-20 12:06:42陳家露蔡重振扎西卓瑪甘富斌索朗斯珠羅潤波
        甘肅畜牧獸醫(yī) 2019年7期
        關鍵詞:孔中林芝新城疫

        陳家露,蔡重振,扎西卓瑪,甘富斌,索朗斯珠,羅潤波*

        (1.西藏農牧學院 動物科學學院,西藏 林芝 860000;2.西藏林芝市農業(yè)農村局畜牧獸醫(yī)總站,西藏 林芝 860000;3.西藏林芝市巴宜區(qū)農業(yè)農村局,西藏 林芝 860000)

        雞新城疫(Newcastle disease,ND),俗稱亞洲雞瘟,是由新城疫病毒(NDV)強毒所引起的雞和多種禽類的高度接觸性傳染病,易感禽類常呈現敗血經過。其傳播速度快、四季皆發(fā)、死亡率高,對禽類養(yǎng)殖戶造成嚴重的威脅與損失。20世紀80年代以來,由于疫苗的廣泛使用和各種生物安全措施的不斷提高,我國新城疫的流行得到了一定的控制,但無法做到全面免疫,同時免疫失敗的現象屢有發(fā)生[1-2],導致該病在我國也有流行。藏雞作為高原特有品種,具有普遍散養(yǎng)、活動性強、抵抗力強等特點,雖然未見發(fā)病的報道,但仍然是新城疫的易感動物。為了解西藏林芝市散養(yǎng)藏雞群新城疫的流行情況,課題組于2018年10月在西藏林芝市巴宜區(qū)藏雞散養(yǎng)戶中隨機采集藏雞血液并提取血清,定性檢測新城疫抗體。以期對藏雞新城疫的防控提出合理建議。

        1 試驗材料

        1.1 儀器與試劑

        無菌采血針、真空采血管、離心機(型號HD2-4)購自鴻科科技、高精度加樣槍:0.5~ 10μl、10~ 100μl、200~ 1 000μl高精度加樣排槍:10~100μl均購自德國艾本德股份公司、恒溫培養(yǎng)箱、酶標儀(型號RT-2100C)購自深圳雷杜生命科學股份有限公司、雞新城疫抗體ELISA試劑檢測盒(批號HLE60097)由上海哈靈生物技術有限公司生產。

        1.2 血樣的采集

        在西藏林芝市周邊散養(yǎng)藏雞戶中隨機抽樣,采取翅下靜脈血液,每羽3~4 ml,冷藏并于2 h內送回實驗室[3]。

        1.3 血樣的處理

        將所取全血在有血清析出時置于離心機中以3 000r/min,離心10 min,取上清液置于1.5 ml無菌EP管并進行編號,放置4℃冰箱備用。

        2 試驗方法與判斷

        2.1 試驗方法

        將冷藏試劑盒取出置于室溫平衡20 min后,在 H9、H10孔中加入陽性對照50μl;H11、H12孔中加入陰性對照50μl;其余孔中依次加入待檢血清,各10μl;再加入樣本稀釋液各40μl。在所有樣本孔與陰、陽性對照孔中加入辣根過氧化酶 (HRP)標記的檢測抗體100μl,用封板膜封住反應孔,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱溫育1 h。在吸水紙上拍干廢液后加入洗滌液,靜置1 min后再拍干,如此反復5次洗滌過程。每孔加入底物TMB各50μl,37℃避光溫育15 min;最后加入終止液50μl,15 min測定其OD450nm值。

        2.2 結果判斷

        在陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15時判定試驗結果有效。當待檢血清OD值<臨界OD值(臨界OD值=陰性對照孔OD值平均值+0.15)時判定為陰性;反之為陽性。

        3 試驗結果與討論

        本次共計分離得到藏雞血清92份,根據酶標儀顯示陽性對照孔的平均OD值為1.1785(>1.00);陰性對照孔的平均OD值為0.0955(<0.15);表明本次試驗結果有效。計算得出臨界OD值為0.2455(臨界OD值=陰性對照孔OD值平均值+0.15),92份藏雞血清OD值均小于臨界OD值,表明本次所檢測的藏雞血清中均無新城疫抗體陽性。具體試驗結果見表1。

        表1 92份藏雞血清新城疫抗體ELISA檢測試驗結果

        酶聯免疫吸附試驗檢測新城疫抗體是目前應用最廣泛的一種方法,在ND的檢測中體現了操作簡便、檢測量大、敏感性好的優(yōu)點[4]。課題組通過ELISA試劑盒的運用,對散養(yǎng)藏雞的新城疫抗體檢測發(fā)現92份散養(yǎng)藏雞血清中并未檢測出新城疫抗體,這可能是由于西藏林芝市散養(yǎng)藏雞并未感染新城疫或未接種新城疫疫苗,同時也可能是免疫維持期已過。通過課題組走訪調查西藏林芝市巴宜區(qū)藏雞散養(yǎng)戶,發(fā)現散養(yǎng)藏雞并未接種新城疫疫苗。表明在此地區(qū)散養(yǎng)藏雞中無新城疫的流行。

        有學者對西藏林芝市某雞場新城疫抗體檢測發(fā)現,圈養(yǎng)雞免疫合格[5]。課題組通過檢測發(fā)現散養(yǎng)藏雞中無新城疫的流行。因此建議林市散養(yǎng)藏雞戶,建立嚴格的衛(wèi)生管理制度,防止外來雞帶入病毒感染本地藏雞,同時防止人員、來訪客、飼養(yǎng)用具等雜物的間接傳播,要嚴格執(zhí)行衛(wèi)生消毒管理制度。

        散養(yǎng)藏雞新城疫免疫應結合實際制定科學的免疫措施,并根據林芝當地疫病流行情況、飼養(yǎng)類型、母源抗體效價等具體情況來確定免疫時機與次數;一般以6~10日齡首次接種為宜,15天后進行二次免疫[6-7];同時,要按照要求進行監(jiān)測,建立和完善新城疫監(jiān)測系統(tǒng)。

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