莊金秋 梅建國 張穎 苗立中 王玉茂

摘? 要：H7N9亞型禽流感病毒是我國于2013年3月首次從人群中發(fā)現(xiàn)的一種新亞型禽流感病毒。該病毒在家禽中無明顯致病性，卻能感染人類并引起較高的病死率。因此，H7N9病毒的早期的快速檢測對于疫情的控制至關重要。本文對H7N9病毒實驗室最新研究進展進行了綜述，以期為科研工作者和廣大養(yǎng)殖場戶更好地研究和防治本病提供參考。

關鍵詞：禽流感病毒;H7N9;檢測;研究進展

中圖分類號：S858.31? ? ?文獻標識碼：A? ? ?文章編號：1673-1085（2019）06-0053-07

禽流感是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的一種急性呼吸道傳染病，具有傳染性強、傳播速度快、抗原易變異等特點。禽流感病毒是甲型流感病毒的一種，依據(jù)流感病毒表面血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）蛋白抗原性不同，理論上HA與NA的不同組合可形成多達144種不同亞型的禽流感病毒。H7N9亞型禽流感病毒是我國于2013年3月首次從人群中發(fā)現(xiàn)的一種新亞型禽流感病毒[1]。H7N9病毒最顯著的特征之一是在家禽中無明顯致病性，卻能感染人類并引起較高的病死率。雖然H7N9病毒在禽類身上呈現(xiàn)弱毒性，但攜帶病毒[2]。因此，H7N9病毒早期的快速檢測對于疫情的控制至關重要。本文對H7N9病毒的實驗室最新研究進展進行了綜述，以期為科研工作者和廣大養(yǎng)殖場戶更好地研究和防治本病提供參考：

1? 病毒分離與鑒定

病毒分離鑒定是禽流感病毒H7N9亞型病原學診斷的“金標準”。采集新鮮標本接種到SPF雞胚、MDCK或LLC～MKZ細胞中進行培養(yǎng)，根據(jù)細胞病變效應（CPE）、血凝和血凝抑制試驗（HA&HI）來判定培養(yǎng)液中是否含有流感病毒。楊式芹等[3]（2013）利用SPF雞胚從H7N9流感病毒患者的咽拭子標本中分離出該病毒。病毒分離鑒定由于培養(yǎng)耗時長，操作繁瑣，不利于快速診斷，而且H7N9病毒分離需在經(jīng)過批準的BSL-3級實驗室開展，一般基層實驗室不具備這種試驗條件，不易實施。

2? 血清學方法

2.1? 血凝抑制試驗（HI）? HI試驗是測定禽流感病毒血清抗體最常用的方法。H7N9亞型禽流感病毒血清學檢測對于雞群H7N9亞型禽流感病毒的感染情況和免疫水平的監(jiān)測具有重要意義。在我國，高致病性禽流感病毒的免疫防控策略是通過滅活疫苗的免疫維持雞群中高抗體水平，國家規(guī)定雞群個體H7N9亞型禽流感HI抗體效價≥4log2、群體免疫合格個體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上的標準[4]。HI對檢驗者專業(yè)要求高且工作量大，不利于開展大規(guī)?？贵w水平監(jiān)測。

2.2? 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）? ELISA方法具有靈敏、快速、高效、簡便、高通量等優(yōu)點，并且待檢血清不需要進行前處理，因此更加適合實驗室和田間大批樣本抗體水平監(jiān)測，對雞群及時、精準的免疫提供指導。王洋等[5]（2017）建立了一種基于H7N9流感病毒H7-53TM HA蛋白為抗原的間接ELISA方法，能夠檢測不同分支疫苗株免疫的H7N9亞型禽流感病毒抗體，檢測結果與HI試驗結果具有強相關性。范俊青等[6]（2019）用H7N9標準抗原包被ELISA板，將HRP標記的單克隆抗體作為競爭抗體，建立了檢測禽流感病毒H7N9亞型抗體的競爭ELISA方法并制成試劑盒。應用該方法對150份血清樣品進行檢測，結果與HI試驗有99.3%的符合率。

2.3? 免疫膠體金技術? 免疫膠體金技術具有簡便快速、特異性高、實用性強等特點，非常適于基層和現(xiàn)場檢測使用，為H7N9亞型禽流感病毒的快速檢測提供了一個極好的檢測方法，也為生物安全工作提供了極大便利。Chan等[7]（2013）利用7種不同試劑廠家的免疫膠體金試劑與兩種分子生物學檢測試劑對H7N9流感病毒安徽株和浙江株進行檢測，發(fā)現(xiàn)免疫膠體金技術與分子生物學檢測技術靈敏度相似。Jin等[8]（2014）通過對35例H7N9流感病毒感染患者的140份咽拭子、唾液和糞便標本進行檢測，分析發(fā)現(xiàn)新型的膠體金快速免疫層析技術比RT-PCR具有高特異性。鄭騰等[9]（2017）以熒光納米顆粒為標記物，采用免疫層析法制備H7N9熒光納米顆粒試紙條。應用該熒光試紙條與國家標準禽流感RT-PCR方法同時對200份樣品進行檢測，符合率達到93.5%。

3? 分子生物學方法

3.1? RT-PCR? RT-PCR具有特異、敏感、快速等優(yōu)點，現(xiàn)已廣泛應用于H7N9亞型禽流感病毒核酸檢測。莫秋華等[10]（2013）針對H7N9亞型禽流感病毒的HA和NA基因設計特異性引物，建立一步法四重RT-PCR方法，對30份核酸樣品經(jīng)盲法試驗評價與實時熒光定量RT-PCR檢測結果符合率為100%。王云鶴等[11]（2015）也根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列，設計并合成2對引物，建立了快速檢測H7N9亞型禽流感病毒的一步法RT-PCR方法，可以從陽性棉拭子浸出液中擴增出目的基因片段。蔣文明等[12]（2015）也針對H7N9亞型禽流感病毒的HA基因和NA基因保守序列，在建立H7亞型和N9亞型單項RT-PCR的基礎上，建立了同時檢測H7亞型和N9亞型的雙重RT-PCR。利用該方法對30份臨床樣品進行H7N9病毒檢測，與病毒分離的符合率為100%。劉根梅等[13]（2018）根椐H7亞型禽流感病毒的HA基因、N9亞型禽流感病毒的NA基因和所有亞型禽流感病毒M基因的保守序列，分別設計了3對特異性引物，建立了檢測H7N9亞型禽流感病毒的三重RT-PCR方法。該方法為快速鑒別和監(jiān)測H7N9亞型禽流感病毒提供了技術手段，特別是對于尚不具備熒光定量RT-PCR檢測條件的實驗室，該方法是一種鑒別H7N9病毒的重要檢測方法。

3.2? 熒光定量RT-PCR? 實時熒光定量RT-PCR比常規(guī)RT-PCR具有更高的敏感性和特異性，而且可以對樣品進行定量分析，已大規(guī)模應用于禽流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室。Zhu等[14]（2013）針對1例安徽株和2例上海株H7N9亞型禽流感病毒的HA、NA基因序列設計特異性引物和探針，建立了SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR方法，其最低檢測限為10拷貝。Wong等[15]（2013）設計的一步法實時熒光定量RT-PCR對H7N9亞型禽流感病毒檢測，整個檢測過程只需要3h，檢出限達到0.04 TCID50。羅思思等[16]（2013）、羅寶正等[17]（2014）、周其偉等[18]（2015）先后根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA和NA的基因序列，設計兩套特異性的引物和探針，建立了基于TaqMan探針的熒光定量RT-PCR。其方法不但能夠將流感病毒H7亞型與其他亞型區(qū)分開，而且可將新型N9亞型流感病毒與原有的N9亞型區(qū)分開。葉惠儀等[19]（2015）建立的熒光定量RT-PCR方法檢測H7N9亞型禽流感抗原，H7體系可以檢測到10-10抗原稀釋度，N9體系能檢測到10-9抗原稀釋度，且對H9亞型禽流感抗原、H5亞型禽流感抗原及新城疫抗原無交叉反應。王國政[20]（2014）根據(jù)H7N9亞型禽流感保守區(qū)M基因、H7基因、N9基因、W及內參RP基因分別設計高度特異性的引物與TaqMan探針，建立了四重熒光定量RT-PCR方法，采用一步法可同時檢測上述各基因。張杰等[21]（2018）根據(jù)禽流感病毒H7N9亞型HA保守基因、HA裂解位點和NA基因為檢測靶標，設計特異性引物和MGB-TaqMan探針，建立了三重熒光定量RT-PCR方法，能夠同時檢測禽流感病毒H7N9經(jīng)典毒株和新型變異毒株。由于熒光定量RT-PCR需要特殊的儀器擴增儀，無法滿足基層和現(xiàn)場檢測的需求。

3.3? PCR-ELISA? PCR-ELISA通過普通PCR擴增，以ELISA作為最終結果判定手段。章倩云等[22]（2016）針對禽流感病毒M基因、H7基因、N9基因3個基因片段的保守序列，設計特異性引物，通過生物素與地高辛的特異性標記，建立了PCR-ELISA聯(lián)合檢測禽流感病毒的方法。其敏感度比普通PCR提高了100倍。相比于實時熒光定量PCR，此方法不需要昂貴的儀器，操作也更加簡單，更易于普及使用，為禽流感病毒的流行病學調查和早期診斷提供了新的方法。

3.4? 等溫核酸擴增技術? 近年來新型等溫核酸擴增技術極大縮短了核酸擴增檢測時間，得到了快速的發(fā)展，逆轉錄-環(huán)介導等溫擴增技術（RT-LAMP）、依賴核酸序列的等溫擴增技術（NASBA）、重組酶聚合酶介導的等溫擴增技術（RPA）、解旋酶依賴性等溫擴增技術（HDA）等已被成功應用于禽流感病毒的檢測。

3.4.1? 逆轉錄-環(huán)介導等溫擴增技術（RT-LAMP）? ?RT-LAMP技術具有特異性強、靈敏度高、簡便快速、檢測結果可視化，無需特殊設備等優(yōu)點，非常適合基層H7N9亞型禽流感病毒的早期快速檢測，在禽流感病原監(jiān)測上具有較好的應用前景。董志珍等[23]（2013）利用RT-LAMP檢測H7N9亞型禽流感病毒安徽株，其靈敏度達到10個拷貝，靈敏度與實時熒光定量RT-PCR一致，但從檢測時間上看RT-LAMP完成1次檢測可在1.5h內，而實時熒光定量RT-PCR則需要3h。Zhang等[24]（2013）利用RT-LAMP對135份H7N9亞型流感病毒臨床樣本進行檢測，H7亞型基因的檢出限度為10拷貝，N9基因檢測限度為5拷貝，靈敏度是實時熒光定量RT-PCR的100倍。張錦海等[25]（2015）成功建立了檢測H7N9亞型禽流感病毒的HA基因、NA基因的RT-LAMP方法。對142份臨床標本進行檢測，檢測HA基因、NA基因的敏感性分別達到10拷貝/反應、5拷貝/反應。崔淑娟等[26]（2015）針對H7N9亞型禽流感病毒HA基因的7個區(qū)域設計5條特異性引物，建立RT-LAMP方法，最低檢出限為0.01pg。對69份臨床疑似標本利用該RT-LAMP方法和實時熒光定量RT-PCR方法同時進行檢測，其檢測結果的靈敏度、特異度和總符合率均為100%。

3.4.2? 依賴核算序列的擴增技術（NASBA）? ? NASBA技術具有特異性強、靈敏度高、反應迅速和操作簡單等特點，特異性和靈敏性均高于PCR，使用的過程當中不需要PCR儀等特殊的設備，只使用恒溫水浴鍋就可以完成整個擴增反應過程，更適合基層實驗室使用。Collins等[27]（2003）基于M基因和H7亞型禽流感病毒的HA基因已成功開發(fā)出可檢測禽流感群特異性H7亞型（NASBA-H7）的NASBA/ECL檢測試劑盒，比商品化的免疫檢測試劑盒敏感性至少高1000倍，比常規(guī)PCR方法也敏感許多，與現(xiàn)行病毒培養(yǎng)的檢測方法的靈敏度相當，只需6h就可準確無誤地檢測出病毒。該方法的優(yōu)點是RNA分子不易對實驗儀器和環(huán)境造成污染，避免了試驗結果的假陽性，缺點是檢測成本過高。

3.4.3? 重組酶聚合酶介導的等溫擴增技術（RPA）? RPA被稱為是可以替代PCR的新型核酸檢測技術，具有操作簡便、反應快速、特異性好、靈敏度高等特點，為H7N9亞型禽流感病毒的現(xiàn)場快速檢測提供了新的分子工具。趙康辰等[28]（2016）根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因和NA基因的保守區(qū)序列，分別設計引物及探針，建立RT-RPA方法。結果顯示，H7反應體系和N9反應體系的最低檢出限分別為10拷貝/μl和100拷貝/μl，與實時熒光定量RT-PCR一致性較高。王瀟等[29]（2018）根據(jù)禽流感病毒H7亞型的HA保守序列，并按照RPA引物探針的要求，設計多對引物及探針，建立RT-RPA方法。該方法與實時熒光定量RT-PCR方法相比，靈敏性稍差，但該方法的檢測快速，僅需要20min。

3.4.4? 解旋酶依賴性等溫擴增技術（HDA）? HDA技術是模擬體內DNA復制機制的體外等溫擴增技術，原理簡單、操作方便、適用范圍廣，特別適合診斷產品開發(fā)，在H7N9亞型禽流感病毒現(xiàn)場快速檢測方面也具有很大的應用空間。方斌等[30]（2018）根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因作為靶標區(qū)域設計引物，采用FITC和Biotin標記上下游引物，通過RT-HDA技術擴增病毒RNA，輔以膠體金免疫層析試紙檢測核酸擴增產物，建立了檢測H7N9亞型禽流感病毒的等溫擴增方法。該方法病毒最低檢測限20個拷貝數(shù)/μl，具有較好的靈敏度、特異性和重復性，無需大型PCR儀設備和凝膠電泳檢測，便于現(xiàn)場和基層簡單快速檢測H7N9亞型禽流感病毒。

3.5? 測序技術

3.5.1? 高通量測序技術（HTS）? HTS技術又名下一代測序，該方法不需要進行PCR擴增，具有準確性高、周期短、可同時對多個樣本進行檢測且成本相對較低等優(yōu)點，使大規(guī)模H7N9流感病毒基因組檢測變?yōu)楝F(xiàn)實。趙康辰等[31]（2013）、裴廣倩等[32]（2014）先后以U12引物反轉錄cDNA，通用流感病毒全基因擴增引物混合物生成雙鏈cDNA制備高通量測序模板對H7N9流感病毒樣本進行檢測。結果顯示不同CT值的樣本用高通道測序都能檢測到流感病毒，從模板制備、文庫構建到序列及數(shù)據(jù)分析等在2d內可完成。王楷宬等[33]（2016）研究顯示在一次測序中完成了H7N9禽流感病毒全部8個基因的序列，能夠滿足對H7N9亞型流感監(jiān)測、全基因分析和溯源研究的要求。

3.5.2? 焦磷酸測序技術（Pyrosequencing）? 焦磷酸測序技術是一種新型的酶聯(lián)級聯(lián)測序技術。以H7N9流感病毒NA焦磷酸測序檢測方法，可用于H7N9禽流感病毒的檢測和鑒定。趙永剛等[34]（2014）建立H7N9流感病毒NA基因分子標簽的焦磷酸測序檢測方法，對3株H7N9流感病毒分離株的檢測，結果表明3株H7N9流感病毒的NA基因均存在15個核苷酸缺失的分子標簽。

3.6? 芯片技術

3.6.1? 基因芯片（Gene Chip）? 又稱DNA芯片、生物芯片。王秀榮等[35]（2005）依據(jù)M蛋白進行基因型鑒定和HA基因亞型鑒定，用Cy5熒光標記在基因芯片平臺上構建檢測H7亞型禽流感病毒的實驗技術模型，檢測H7亞型的cDNA，雜交達到預期結果。韓雪清等[36]（2008）根據(jù)H7亞型的基因序列，設計特異性引物和探針，制備了H7亞型禽流感病毒鑒定基因芯片，利用收集自49個地區(qū)的2653分標本進行評價，顯示該病毒基因芯片具有良好的特異性和敏感性。王慧煜等[37]（2009）對29份H7亞型陽性標本進行正向雜交基因芯片檢測，結果與病毒分離的結果符合率達100%?；蛐酒夹g具有特異性好、檢測時間短等優(yōu)點，但因其存在檢測成本高、硬件要求高，一般的實驗室無法開展等缺點，在禽流感病毒檢測中的應用還遠低于其他檢測方法。

3.6.2? 液相芯片（MASA）? 液相芯片，也稱為懸浮陣列、流式熒光技術。該技術具有高通量、敏感性高、速度快的特點，已經(jīng)在基因分型、組織分型、感染性疾病的檢測等方面得到了廣泛應用。張曉娜等[38]（2013）針對H7亞型禽流感保守基因，設計特異性引物和探針，將多重不對稱RT-PCR擴增產物與偶聯(lián)熒光微球的探針進行雜交，建立多重液相芯片檢測方法，對50份已知病毒的樣品進行液相芯片方法和禽流感檢測試劑盒雙盲試驗，兩者符合率為100%。袁靜等[39]（2015）建立了一種同時對H5N1和H7N9亞型流感病毒進行快速檢測的液相芯片新方法，可以對含有5個拷貝的樣本進行有效的基因分型，同時檢測速度快，從樣本RNA的提取到最后結果的判斷可在8h內完成。

3.7? 高分辨率熔解曲線（HRM）? HRM高分辨率熔解曲線是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術。該技術具有靈敏度高、特異性好、成本低廉、高通量檢測、閉管操作等優(yōu)點，已廣泛應用于突變掃描、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面。劉志成等[40]（2016）針對H7N9亞型禽流感病毒HA和NA基因的保守區(qū)域，分別設計2對特異性引物，建立了基于HRM分析H7N9亞型禽流感病毒的檢測方法。臨床樣本檢測與某商品化H7N9亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒符合率為100%。表明該方法可用于H7N9亞型禽流感病毒的臨床篩查和監(jiān)測。

4? 結語

綜上所述，由于我國嚴格的生物安全管理規(guī)定，高致病性的流感病毒和禽流感病毒分離等操作被嚴格限定在生物安全三級實驗室進行[41]。因此，一般基層常規(guī)實驗室對疑似標本的病原學鑒定只能進行分子生物學檢測。分子生物學技術具有敏感性高、特異性強、簡便、快速等優(yōu)點，為H7N9亞型禽流感病毒提供了快速準確的檢測，為疫情的有效防控提供了準確的流行病學信息，避免了疫情的大規(guī)模蔓延[42]。但分子生物學技術也各有優(yōu)缺點和實用性。相信隨著現(xiàn)代分子生物學、微生物學及免疫學等學科的發(fā)展，以及同其它學科間的相互滲透，H7N9亞型禽流感病毒的傳統(tǒng)檢測技術將與現(xiàn)代分子生物學技術有機結合，取長補短，推進禽流感病毒分子生物學檢測技術進入新的發(fā)展階段。

參考文獻：

[1]? 劉彩霞.H7N9禽流感病毒分子生物學診斷技術研究概況[J]. 職業(yè)與健康，2018，34（2）：281-284.

[2]? 趙俊杰，王團結，姚文生，等.新型重組H7N9禽流感研究進展[J].中國獸藥雜志，2018，52（9）：61-66.

[3]? 楊式芹，翁育偉，鄭奎城，等.應用雞胚分離法分離人感染H7N9禽流感病毒的研究[J].海峽預防醫(yī)學雜志，2013，19（6）：1-3.

[4]? 朱旭東，王敏，朱宇華.雞群H7N9禽流感疫苗免疫抗體檢測[J].動物醫(yī)學進展，2018，39（7）：128-130.

[5]? 王洋，吳芷慧，薛春宜，等.應用跨膜區(qū)置換的血凝素蛋白建立H7N9禽流感病毒抗體間接ELISA檢測方法[J].微生物學通報，2017，44（12）：2812-2821.

[6]? 范俊青，魏燕鳴，鄒忠，等.禽流感病毒H7亞型競爭ELISA抗體檢測方法的建立[J].養(yǎng)殖與飼料，2019，1：32-36.

[7]? Chan KH，To KK，Chan JF，et al. Analytical sensitivity of seven point of care influenza virus detection tests and two molecular tests for detection of avian origin H7N9and swine origin H3N2 variant influenza A viruses[J].J Clin Microbiol，2013，51（9）：3160-3161.

[8]? Jin C，Wu N，Peng X，et al. Comparison of a new gold immunochromatographic assay for the rapid diagnosis of the novel influenza A（H7N9）virus with cell culture and a real time reverse transcription PCR assay[J].Biomed Res Int，2014，425-451.

[9]? 鄭騰，張體銀，朱海，等. H7N9禽流感病毒納米熒光顆粒試紙條的研制[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2017，49（10）：69-73.

[10]? 莫秋華，羅寶正，杜田，等.四重RT-PCR快速檢測2013新型H7N9流感病毒[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2013，36（5）：296-299.

[11]? 王云鶴，包紅梅，孫佳善，等.H7N9亞型禽流感病毒RT-PCR檢測方法建立[J].中國農業(yè)科學，2015，48（15）：3050-3055.

[12]? 蔣文明，李金平，于美芳，等.雙重RT-PCR快速檢測H7N9流感病毒方法的建立[J].中國動物檢疫，2015，32（5）：65-68.

[13]? 劉根梅，簡茗琪，高天.三重PCR快速檢測H7N9亞型流感病毒方法的建立[J].廣東農業(yè)科學， 2018，45（1）：114-119.

[14]? Zhu Z，F(xiàn)an H，Qi X，et al. Development and evaluation of a SYBR green based real time RT-PCR assay for detection of the emerging avian influenza A（H7N9）virus[J]. PLoS One，2013，8（11）：e80028.

[15]? Wong CK，Zhu H，Li OT， et al.Molecular detection of human H7N9 influenza A virus causing outbreaks in China[J].Clin Chem，2013，59（7）：1062-1067.

[16]? 羅思思，謝芝勛，劉加波，等.H7N9亞型AIV雙重實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[J].動物醫(yī)學進展，2013，34（12）：1-5.

[17]? 羅寶正，莫秋華，李儒曙，等.新型H7N9亞型禽流感病毒多重熒光RT-PCR快速檢測方法的建立[J].病毒學報，2014，30（1）：1-5.

[18]? 周其偉，高秀潔，陳華云，等.H7N9禽流感病毒實時熒光RT-PCR檢測方法的建立與評價[J].熱帶醫(yī)學雜志，2015，15（1）：36-39.

[19]? 葉惠儀，丁妙霞，黃江志，等.應用熒光RT-PCR方法檢測H7N9亞型禽流感病毒[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2015，（8）：44-45.

[20]? 王國政，崔大偉，謝國良，等.四重熒光定量RT-PCR檢測人感染新型甲型禽流感H7N9病毒[J].臨床檢驗雜志，2014，32（11）：801-805.

[21]? 張杰，任寶紅，婁亞坤，等.禽流感病毒H7N9亞型三重熒光PCR檢測方法研究[J].畜禽業(yè)，2018，29（9）：1-2.

[22]? 章倩云，焦永軍，劉丹丹，等.甲型H7N9流感病毒多重PCR-酶聯(lián)免疫吸附檢測方法的建立及應用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2016，26（10）：1380-1383.

[23]? 董志珍，鄭文杰，王乃福，等.H7N9禽流感病毒等溫擴增快速檢測方法的建立[J].中國動物檢疫，2013，30（7）：72-77.

[24]? Zhang J，F(xiàn)eng Y，Hu D，et al. Rapid and sensitive detection of H7N9 avian influenza virus by use of reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification[J]. J Clin Microbiol，2013，51（11）：3760-3764.

[25]? 張錦海，陳文琦，韓一芳，等.逆轉錄環(huán)介導等溫擴增技術檢測H7N9禽流感病毒基因[J].東南國防醫(yī)藥，2019，21（1）：7-11.

[26]? 崔淑娟，嚴燕，任海林，等.H7N9人禽流感病毒RT-LAMP快速檢測方法的建立[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2015，25（15）：2456-2458.

[27]? Collins RA，Ko LS，F(xiàn)ung KY，et al. Rapid and sensitive detection of avian influenza virus subtype H7 using NASBA[J]. Biochem Biophys Res Commun，2003，300（2）：507-515.

[28]? 趙康辰，崔侖標，葛以躍，等.重組酶介導的等溫擴增法檢測H7N9禽流感病毒[J].江蘇預防醫(yī)學，2016，27（5）：524-526.

[29]? 王瀟，曹琛福，黃超華，等.禽流感病毒H7亞型RT-exoRPA檢測方法的建立[J].動物醫(yī)學進展，2018，39（11）：1-7.

[30]? 方斌，劉琳琳，李翔，等.基于RT-HDA等溫擴增技術快捷檢測H7N9禽流感病毒的方法研究[J].病毒學報，2018，34（5）：482-488.

[31]? 趙康辰，郭喜玲，祁賢，等.高通量測序H7N9禽流感病毒基因組模板制備方法的優(yōu)化及應用[J].南京醫(yī)科大學學報（自然科學版），2013，33（7）：1002-1006.

[32]? 裴廣倩，范航，安小平，等.利用高通量測序快速檢測H7N9禽流感病毒及基因組序列分析[J].安徽醫(yī)科大學學報，2014，49（8）：1033-1038.

[33]? 王楷宬，邱源，莊青葉，等.高通量測序分析1株H7N9流感病毒的全基因[J].中國動物檢疫，2016，33（4）：72-76.

[34]? 趙永剛，劉華雷，王靜靜，等.利用焦磷酸測序技術檢測H7N9禽流感病毒NA基因分子標簽[J].病毒學報，2014，30（4）：369-374.

[35]? 王秀榮，鄧國華，于康震，等.在DNA芯片平臺上探測AIV不同亞型cDNA[J].國農業(yè)科學，2005，38（2）：394-398.

[36]? 韓雪清，林祥梅，侯義宏，等.禽流感病毒分型基因芯片的研制[J]. 微生物學報，2008，48（9）：1241-1249.

[37]? 王慧煜，韓雪清，林祥梅，等.檢測禽流感病毒H5、H7和H9亞型的正向基因芯片的制備[J].檢驗檢疫學刊，2009，19（4）：12-16.

[38]? 張曉娜，王慧煜，梅琳，等.H5、H7和H9亞型禽流感病毒液相芯片檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學，2013，43（5）：494-499.

[39]? 袁靜，鮑琳琳，魏強，等.用液相芯片方法同時檢測流感病毒H5N1和H7N9 亞型[J].病毒學報，2015，31（6）：607-613.

[40]? 劉志成，賈偉新，孫敏華，等.H7N9亞型禽流感病毒HRM檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學，2016，46（11）：1388-1393.

[41]? 趙娣偉.新型甲型H7N9禽流感病毒實驗室檢測及防控策略[J].中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生，2015，30（5）：45-47.

[42]? 張賽，陸軍.H7N9禽流感病毒基因檢測技術研究進展[J].檢測醫(yī)學，2015，21（12）：2226-2228.

Abstract：The H7N9 subtype avian influenza virus is a new subtype of avian influenza virus that was first discovered in China from people in March 2013.The virus has no obvious pathogenicity in poultry， but it can infect humans and cause a high mortality rate.Therefore， the early rapid detection of the H7N9 virus is critical for the control of the epidemic.This paper reviews the latest research progress of H7N9 virus laboratory， in order to provide reference for researchers and farmers to better study and prevent this disease.

Key Words：Avian Influenza Virus;H7N9;Detection;Research progress□