朱慧霞，方 楨，魯旭峰，汪水玲，馬曉靜，姚日生，2*

（1.合肥工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，安徽 合肥 230009；2.農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽 合肥 230009）

木聚糖酶是一種重要的半纖維素水解酶系，能將木聚糖降解為木寡糖和木糖[1]，已被用于生物燃料乙醇、食品、醫(yī)藥以及動(dòng)物飼料等領(lǐng)域[2-3]。PARAB P等[4]利用芽孢桿菌（Bacillussp.）產(chǎn)生的木聚糖酶酶解海藻，得到可發(fā)酵的還原糖；DHIMAN S S等[5]利用嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）所產(chǎn)木聚糖酶處理柑橘果汁，通過(guò)降解其中果膠、淀粉和半纖維素等大分子多糖，獲得了高度澄清的柑橘果汁；KHAMBHATY Y等[6]將木聚糖酶用于紙漿預(yù)處理，能有效提高紙漿的白度。

木聚糖酶來(lái)源廣泛，有微生物、甲殼動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)、種子等。其中微生物主要包括真菌（如黑曲霉、煙曲霉、米曲霉、木霉、青霉等）、細(xì)菌（如地衣芽孢桿菌、黃熱芽孢桿菌、嗜熱雙胞菌、枯草芽孢桿菌、雙歧桿菌等）和放線菌[7-9]。一般認(rèn)為微生物是生產(chǎn)商品木聚糖酶的最佳來(lái)源之一[10]。鄭麗麗等[11]從土壤中篩得一株黑曲霉，其所產(chǎn)木聚糖酶酶活為78.34 U/mL；KUMAR V等[12]從廢棄木材中篩得野生菌疏棉狀嗜熱霉菌，其所產(chǎn)木聚糖酶酶活為61.09 U/mL；吳仁智等[13]從土壤中篩得野生日本曲霉菌，其所產(chǎn)木聚糖酶酶活為26.26U/mL。由于野生菌所產(chǎn)木聚糖酶酶活較低，而對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)而言，木聚糖酶酶活高不僅能提高生產(chǎn)效率、亦能有效節(jié)約能源[14]，因此可采用一些方法提高野生菌的產(chǎn)酶能力，誘變育種是其中一種有效方法。

常壓室溫等離子體（atmospheric and room temperature plasma，ARTP）技術(shù)是近些年發(fā)展起來(lái)的一種新型微生物誘變育種方法，ARTP富含的活性粒子可以改變細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的物理化學(xué)性質(zhì)，并造成組織損傷和遺傳物質(zhì)損傷，微生物細(xì)胞被迫啟動(dòng)容錯(cuò)水平高的“SOS修復(fù)機(jī)制”、出現(xiàn)較多錯(cuò)誤傾向修復(fù)，引起微生物的基因突變[15-16]。ARTP誘變技術(shù)具有突變率高、成本低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)[17]，已成為誘變領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

本研究以黑曲霉（Aspergillus niger）FXY為出發(fā)菌株，通過(guò)ARTP技術(shù)進(jìn)行誘變處理，旨在找到一株木聚糖酶高產(chǎn)突變株，并對(duì)突變菌株的酶活提高原因、所產(chǎn)木聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，為木聚糖酶的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用范圍擴(kuò)大提供依據(jù)，對(duì)促進(jìn)我國(guó)酶制劑工業(yè)的發(fā)展具有現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌株與試劑

黑曲霉（Aspergillus niger）FXY：本實(shí)驗(yàn)室保藏。

木聚糖（純度為99%）：美國(guó)Sigma-Aldrich公司；3,5-二硝基水楊酸（3,5-dinitrosalicylic acid，DNS）（分析純）：廈門(mén)海標(biāo)科技有限公司；葡萄糖、MgSO4·7H2O、KH2PO4（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蛋白胨、酵母粉（均為生化試劑）：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potatodextroseagar，PDA）培養(yǎng)基：稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛（煮沸20～30min，能被玻璃棒戳破即可），用8層紗布過(guò)濾，加入15～20g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖20g，攪拌均勻，稍冷卻后再補(bǔ)足水分至1000mL，121℃高壓滅菌20min。

種子培養(yǎng)基：葡萄糖20.0 g/L，蛋白胨20.0 g/L，酵母粉10.0 g/L，pH自然，121℃高壓滅菌20 min。

初篩培養(yǎng)基：木聚糖10.0 g/L，酵母粉3.0 g/L，KH2PO42.0 g/L，MgSO4·7H2O 2.0 g/L，瓊脂 20.0 g/L，pH自然，121 ℃高壓滅菌20 min。

發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基：麩皮20.0 g/L，葡萄糖5.0 g/L，酵母粉5.0 g/L，MgSO4·7H2O 1.0 g/L，KH2PO41.0 g/L，pH自然，121℃高壓滅菌20 min。

1.2 儀器與設(shè)備

ARTP-Ⅱ型誘變育種儀：無(wú)錫源清天木生物科技有限公司；DHP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；LDZX-40SC型電熱壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠；SW-CJ-2FD型雙人單面超凈工作臺(tái)：蘇州凈化設(shè)備有限公司；HQL-300A型柜式恒溫冷凍搖床：中國(guó)科學(xué)院武漢科學(xué)儀器廠；WFI800-D3B型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京瑞利分析儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 木聚糖酶酶活的測(cè)定

木聚糖酶的酶活用DNS法[18]測(cè)定。木聚糖酶酶活定義：在一定條件下（50.0℃、pH 5.0），每分鐘酶解木聚糖產(chǎn)生1.0 μmol木糖所需的酶量為1個(gè)酶活單位（U）。發(fā)酵所產(chǎn)木聚糖酶的酶活是以每毫升發(fā)酵液所含酶活單位表示，即為U/mL。

1.3.2 孢子懸浮液的制備

將保藏的黑曲霉FXY接入種子培養(yǎng)基，于30.0℃、180r/min活化48.0 h后轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基，之后于30.0℃培養(yǎng)96.0 h。用生理鹽水將不同培養(yǎng)時(shí)間的黑曲霉孢子洗脫至盛有玻璃珠的三角瓶中，于220 r/min充分振蕩使其活化并分散。之后經(jīng)無(wú)菌孢子過(guò)濾器過(guò)濾后用生理鹽水將孢子懸浮液稀釋至106～108個(gè)/mL。

1.3.3 ARTP誘變

將10.0 μL不同培養(yǎng)時(shí)間的黑曲霉FXY孢子懸浮液均勻涂布于無(wú)菌金屬載片上，并分別暴露于ARTP噴射器下1.0～12.0 min。每次處理后，將載片轉(zhuǎn)移至裝有1.0 mL無(wú)菌水的無(wú)菌管中，振蕩洗脫后進(jìn)行稀釋涂布，用未經(jīng)ARTP處理的菌株作為對(duì)照，于30.0℃培養(yǎng)72.0h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，分別用公式（1）、（2）計(jì)算致死率、正突變率，并繪制致死率曲線、正突變率曲線。將酶活提高超過(guò)對(duì)照菌株20.0%及以上的菌株定義為正突變菌株。

1.3.4 初篩

根據(jù)誘變的致死率曲線，選取適當(dāng)?shù)恼T變條件進(jìn)行誘變處理，將處理后的孢子懸浮液稀釋涂布至初篩培養(yǎng)基上，于30.0℃、180 r/min培養(yǎng)72.0 h。產(chǎn)酶菌株會(huì)在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈，測(cè)定透明圈與菌落直徑的大小，選取透明圈直徑（H）與菌落直徑（C）比值（即H/C值）較大的菌落進(jìn)行后續(xù)的復(fù)篩實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 復(fù)篩

將初篩得到的菌落接種至種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)48.0 h，再以2.0%的接種量轉(zhuǎn)接入發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，于30.0℃、180r/min培養(yǎng)96.0h后離心收集發(fā)酵液，取上清液適當(dāng)稀釋后測(cè)其木聚糖酶酶活，與菌株FXY在相同條件下發(fā)酵所得粗酶液的酶活進(jìn)行比較。

1.3.6 誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將誘變所得優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，并將各代菌株轉(zhuǎn)接至發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基，測(cè)定酶活，比較各代菌株產(chǎn)酶變化情況，以檢測(cè)誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性。

1.3.7 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

將孢子懸浮液以接種量2.0%接入裝液量為50mL/250mL種子培養(yǎng)基中，于30.0℃、180r/min培養(yǎng)。每隔4.0h取出發(fā)酵液離心，棄去上清液，并將固體放入105.0℃烘箱中干燥至恒質(zhì)量。通過(guò)測(cè)定干細(xì)胞質(zhì)量繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3.8 產(chǎn)酶曲線的測(cè)定

將已培養(yǎng)48.0 h的種子液以2.0%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于30.0℃、180 r/min培養(yǎng)，每隔12.0 h取樣，測(cè)定發(fā)酵液中木聚糖酶酶活，并用考馬斯亮藍(lán)法[19]測(cè)定發(fā)酵液中的蛋白含量。

1.3.9 木聚糖酶酶學(xué)性質(zhì)

最適溫度的確定：將發(fā)酵液于8000r/min離心20.0min，上清液即為粗酶液。將粗酶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，分別于35.0℃、40.0℃、45.0℃、50.0℃、55.0℃、60.0℃進(jìn)行酶解反應(yīng)，測(cè)定酶活。將木聚糖酶酶活的最高值定義為100.0%，以計(jì)算不同溫度條件下的相對(duì)酶活。

熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將粗酶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，分別在上述溫度保溫30.0～180.0 min后測(cè)定酶活。將各溫度未保溫的木聚糖酶酶活最高值定義為100.0%，以計(jì)算在不同溫度條件下保溫不同時(shí)間的相對(duì)酶活。

最適反應(yīng)pH值的確定：將粗酶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，分別在檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（pH值為3.0～4.5）、磷酸鹽緩沖溶液（pH值為5.0～8.0）、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖溶液（pH值為8.5～10.0）、磷酸氫二鈉-氫氧化鈉緩沖溶液（pH值為10.5～11.0）條件下反應(yīng)，測(cè)定酶活。將木聚糖酶酶活的最高值定義為100.0%，以計(jì)算不同pH值條件下的相對(duì)酶活。

pH穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將粗酶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，分別在上述pH值孵育60min后測(cè)定酶活。將各pH值未孵育的木聚糖酶酶活的最高值定義為100.0%，以計(jì)算在不同pH值條件下孵育60 min后的相對(duì)酶活。

2 結(jié)果與分析

2.1 誘變條件的篩選

對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)間的黑曲霉FXY進(jìn)行ARTP誘變，其致死率曲線如圖1所示。由圖1可知，菌株FXY培養(yǎng)時(shí)間越短，ARTP處理相同時(shí)間所對(duì)應(yīng)的致死率越高；培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，ARTP處理相同時(shí)間所對(duì)應(yīng)的致死率越低。這是因?yàn)榫闒XY培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，孢子細(xì)胞壁越厚，等離子體中的活性粒子進(jìn)入細(xì)胞受到的阻力會(huì)變大，致使活性粒子不易穿透細(xì)胞，所以致死率降低。培養(yǎng)4 d的菌株FXY所制備的孢子懸浮液經(jīng)誘變處理后，致死曲線出現(xiàn)了“馬鞍形”，即致死率呈現(xiàn)先升高、后下降、再升高的趨勢(shì)，是因?yàn)锳RTP誘變過(guò)程中產(chǎn)生了“質(zhì)量沉積效應(yīng)”和“電荷交換效應(yīng)”，在這兩種效應(yīng)的刺激下，可激活菌株體內(nèi)的應(yīng)急反應(yīng)機(jī)制（SOS修復(fù)）[20-21]，該機(jī)制是一種自我修復(fù)方式、能夠降低菌株的致死率，而隨著ARTP處理時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)，受損的菌株細(xì)胞不能完全進(jìn)行自我修復(fù)，所以菌株的致死率又會(huì)升高[22]。

圖1 黑曲霉FXY進(jìn)行常壓室溫等離子體誘變的致死率曲線Fig.1 Lethality curve ofAspergillus nigerFXY mutated by atmospheric and room temperature plasma

根據(jù)現(xiàn)代誘變理論，誘變致死率在95.0%時(shí)有較高的正突變率[23]，因此對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)間致死率最接近95.0%的菌株進(jìn)行產(chǎn)酶篩選，其正突變率結(jié)果如圖2所示，培養(yǎng)4 d的菌株所對(duì)應(yīng)的正突變率最高，達(dá)到了45.6%，因此確定ARTP誘變處理時(shí)菌株FXY的培養(yǎng)時(shí)間為4 d，誘變處理時(shí)間為5.0 min。

圖2 黑曲霉FXY進(jìn)行常壓室溫等離子體誘變的正突變率結(jié)果Fig.2 Positive mutation rate results ofAspergillus nigerFXY mutated by atmospheric and room temperature plasma

2.2 誘變菌株的篩選結(jié)果

出發(fā)菌株黑曲霉FXY的H/C值為1.4，通過(guò)比較初篩所得各菌株H/C值大小，從中挑選了49株H/C值超過(guò)3.0的菌株，對(duì)這49株菌進(jìn)行產(chǎn)酶發(fā)酵并測(cè)定酶活，結(jié)果如圖3所示，與出發(fā)菌株（79.42 U/mL）相比，共有42株菌的酶活提高了20.0%及以上，其中編號(hào)為ARTP-19、ARTP-49、ARTP-80、ARTP-82的4株菌的酶活提高了100.0%及以上，故后續(xù)對(duì)這4株優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。

圖3 常壓室溫等離子體誘變菌株所產(chǎn)木聚糖酶酶活Fig.3 Activities of xylanase produced by atmospheric and roomies temperature plasma mutagenized strains

2.3 誘變優(yōu)勢(shì)菌株的遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將編號(hào)為ARTP-19、ARTP-49、ARTP-80、ARTP-82這4株優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，各菌株分別連續(xù)傳代5次，并將各代菌株轉(zhuǎn)接至發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，培養(yǎng)96 h后測(cè)定發(fā)酵液中木聚糖酶酶活，結(jié)果如表1所示。由表1可知，經(jīng)過(guò)5次連續(xù)傳代培養(yǎng)，這4株正突變菌株均能穩(wěn)定遺傳，其中編號(hào)為ARTP-82的菌株所產(chǎn)木聚糖酶酶活最高，達(dá)到了175.33 U/mL，較出發(fā)菌株（79.42 U/mL）提高了120.8%，因此選用菌株ARTP-82進(jìn)行后續(xù)研究。

表1 常壓室溫等離子體誘變優(yōu)勢(shì)菌株的遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Table 1 Hereditary stability experiments of atmospheric and room temperature plasma mutagenic dominant strains

2.4 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

采用干重法測(cè)定黑曲霉FXY和菌株ARTP-82的生長(zhǎng)曲線，結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，0～12 h這兩株菌生長(zhǎng)均較慢，處于“延滯期”，菌體干質(zhì)量增加少。12 h后，菌株都已適應(yīng)生長(zhǎng)環(huán)境，生長(zhǎng)速率加快、菌體干重值迅速上升，此時(shí)菌株處于“對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期”。從36 h開(kāi)始，這兩株菌的生長(zhǎng)速率幾乎都不變，處于生長(zhǎng)的“平穩(wěn)期”，因此菌體干質(zhì)量都基本保持不變。比較這兩株菌的生長(zhǎng)曲線，發(fā)現(xiàn)這兩株菌在12h后菌體干質(zhì)量就有差異，在24.0h時(shí)，菌株ARTP-82的生物量6.1 g/L比菌株FXY（7.5 g/L）低23.0%，差異達(dá)到最大；在36 h時(shí)，菌株生長(zhǎng)達(dá)到平穩(wěn)期，ARTP-82的生物量9.6 g/L比菌株FXY（10.2 g/L）低5.9%?？梢?jiàn)ARTP誘變確實(shí)改變了黑曲霉的生長(zhǎng)并對(duì)其產(chǎn)木聚糖酶也造成了影響，后續(xù)實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了這一推斷。

圖4 菌株FXY和菌株ARTP-82的生長(zhǎng)曲線Fig.4 Growth curves of strain FXY and strain ARTP-82

2.5 發(fā)酵產(chǎn)酶曲線

菌株FXY和菌株ARTP-82的發(fā)酵產(chǎn)酶曲線如圖5所示，發(fā)酵前期，由于菌株主要利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行生長(zhǎng)，因此產(chǎn)酶較少，蛋白量也較少。當(dāng)發(fā)酵時(shí)間達(dá)到36 h后，菌株開(kāi)始大量產(chǎn)酶，蛋白含量亦隨之增加。當(dāng)發(fā)酵至96 h時(shí)，木聚糖酶酶活達(dá)到最高，分別為79.33 U/mL和174.32 U/mL。隨著發(fā)酵時(shí)間再延長(zhǎng)，酶活有所下降，可能是因?yàn)榫甑拇x產(chǎn)物對(duì)酶有抑制作用，而此時(shí)蛋白含量不變，這是因?yàn)榫晖Ｖ巩a(chǎn)酶，而代謝產(chǎn)物不影響蛋白含量。對(duì)比菌株FXY和菌株ARTP-82，在發(fā)酵108 h后，兩株菌的發(fā)酵液中蛋白含量基本保持不變，菌株ARTP-82蛋白含量維持在6.8 mg/mL，比菌株FXY（5.5 mg/mL）提高了23.6%，結(jié)合菌株的生長(zhǎng)曲線可知，菌株ARTP-82木聚糖酶酶活的增加，與其生物量增加無(wú)關(guān)、與酶比活力增加有關(guān)。

圖5 菌株FXY和菌株ARTP-82的發(fā)酵產(chǎn)酶曲線Fig.5 Enzyme production curves by fermentation of strain FXY andstrain ARTP-82

2.6 木聚糖酶的最適反應(yīng)溫度及熱穩(wěn)定性

圖6 菌株ARTP-82產(chǎn)木聚糖酶的最適反應(yīng)溫度Fig.6 Optimum reaction temperature of xylanase produced by strain ARTP-82

不同溫度條件下木聚糖酶相對(duì)酶活如圖6所示，木聚糖酶在40～55℃時(shí)能保持80%以上的相對(duì)酶活，最適反應(yīng)溫度為45℃，相對(duì)酶活為100%。溫度較低時(shí)，由于酶解反應(yīng)速率較慢、產(chǎn)生的還原糖少，用DNS法測(cè)定酶活，顯示相對(duì)酶活較低；而溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致部分木聚糖酶失活，因此相對(duì)酶活也會(huì)降低。木聚糖酶的熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，該木聚糖酶在35～45℃條件下保溫30～180 min，酶活穩(wěn)定。當(dāng)溫度＞45℃，隨著保溫時(shí)間的延長(zhǎng)，木聚糖酶的相對(duì)酶活會(huì)隨之降低。在50℃、保溫60.0 min后木聚糖酶相對(duì)酶活下降了8.5%，保溫180min后相對(duì)酶活下降了28.8%。在60℃保溫60min后木聚糖酶的相對(duì)酶活就下降了21.5%，而保溫180 min后，相對(duì)酶活只有15.7%。這說(shuō)明溫度越高，保溫時(shí)間越長(zhǎng)，木聚糖酶越容易失活，相對(duì)酶活也就越低，熱穩(wěn)定性越差。

圖7 菌株ARTP-82產(chǎn)木聚糖酶的熱穩(wěn)定性Fig.7 Thermal stability of xylanase produced by strain ARTP-82

2.7 木聚糖酶的最適反應(yīng)pH值及pH穩(wěn)定性

不同pH值條件下木聚糖酶相對(duì)酶活如圖8所示，木聚糖酶在pH值為3～8之間能保持85.0%以上的相對(duì)酶活，最適反應(yīng)pH值為7，反應(yīng)環(huán)境偏酸和偏堿都會(huì)使木聚糖酶部分失活，因此在pH值較低和較高的情況下，木聚糖酶的相對(duì)酶活都會(huì)下降。在pH值為3～5時(shí)，木聚糖酶的相對(duì)酶活在85.0%以上，而pH值為9～11時(shí)，木聚糖酶的相對(duì)酶活均＜75.0%，這說(shuō)明該木聚糖酶較適合在酸性環(huán)境中使用。

木聚糖酶的pH穩(wěn)定性結(jié)果如圖9所示，該木聚糖酶在pH值為7時(shí)孵育60 min后，其相對(duì)酶活為98.5%，說(shuō)明，該木聚糖酶在中性環(huán)境中較穩(wěn)定。而在偏酸和偏堿的環(huán)境中，將該木聚糖酶孵育60 min后，相對(duì)酶活均會(huì)下降，并且在堿性環(huán)境中酶活下降幅度比在酸性環(huán)境中大，這也充分說(shuō)明了該木聚糖酶對(duì)酸的耐受性比對(duì)堿的耐受性強(qiáng)。

圖8 菌株ARTP-82產(chǎn)木聚糖酶的最適反應(yīng)pH值Fig.8 Optimum reaction pH of xylanase produced by strain ARTP-82

圖9 菌株ARTP-82產(chǎn)木聚糖酶的pH穩(wěn)定性Fig.9 pH stability of xylanase produced by strain ARTP-82

3 結(jié)論

本研究對(duì)黑曲霉FXY進(jìn)行ARTP誘變，分別對(duì)出發(fā)菌株的培養(yǎng)時(shí)間和誘變處理時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，ARTP誘變的最優(yōu)條件為：菌株培養(yǎng)時(shí)間4 d，誘變處理時(shí)間5.0 min，在該條件下，篩得的優(yōu)勢(shì)且能穩(wěn)定遺傳的菌株ARTP-82所產(chǎn)木聚糖酶的酶活為175.33 U/mL，較出發(fā)菌株提高了120.8%，這表明黑曲霉對(duì)ARTP敏感，誘變效果好。本研究證實(shí)了ARTP誘變技術(shù)的突變率高，對(duì)選育木聚糖酶高產(chǎn)菌的可行性和有效性。為了探究誘變菌株木聚糖酶酶活提高的原因，對(duì)優(yōu)勢(shì)菌株ARTP-82和出發(fā)菌株FXY的生長(zhǎng)和發(fā)酵產(chǎn)酶情況作了對(duì)比研究，并得出結(jié)論，誘變菌株酶活之所以提高，不是因?yàn)榫晟锪康脑黾?，而是與酶比活增加有關(guān)。通過(guò)對(duì)優(yōu)勢(shì)菌株ARTP-82所產(chǎn)木聚糖酶酶學(xué)性質(zhì)的研究得知該木聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為45℃、最適反應(yīng)pH值為7，并且在該溫度和pH值條件下，酶的穩(wěn)定性良好。本研究可為其他菌株的ARTP誘變提供有益的參考，對(duì)木聚糖酶的工業(yè)化生產(chǎn)也具有一定的借鑒意義。