景贊，劉超，胡丹，劉曉碧

(樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 樂山 614000)

香菇在全國分布廣泛，以營養(yǎng)豐富、味道鮮美著稱，深受人們喜愛，有很高的食用和藥用價(jià)值[1-4]。除了成為餐桌上的佳肴，近幾年為了豐富大眾的飲食，香菇也被開發(fā)成各種產(chǎn)品，其中香菇醬頗受大家喜愛[5-8]，然而農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題一直困擾著消費(fèi)者和生產(chǎn)者，無論是在出口創(chuàng)匯，還是在日常消費(fèi)中造成的損失都不容忽視。雖然國家在農(nóng)藥殘留方面制定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，但和歐美、日韓等國家比較，由于生產(chǎn)方式和標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)差異等原因，我國食用菌產(chǎn)品在出口中往往遭受貿(mào)易壁壘，另外國內(nèi)生產(chǎn)者濫用、超標(biāo)超范圍使用農(nóng)藥的現(xiàn)象也比較嚴(yán)重[9]。

液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法常被用于農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，提取方法集中在液液萃取、固相萃取、QuEChERS 等方法，其中QuEChERS以高效、簡(jiǎn)便、易操作等優(yōu)勢(shì)應(yīng)用廣泛[10-13]。香菇醬中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)少有報(bào)道，本文基于QuEChERS法開發(fā)了氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)香菇醬中多種農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

五氯硝基苯、馬拉硫磷、毒死蜱、腐霉利、氰戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)品：100 μg/mL，購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；乙腈、丙酮：均為色譜純，購于百靈威科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TQ-8030氣質(zhì)聯(lián)用儀 島津(中國)有限公司；T10均質(zhì)器 IKA儀器設(shè)備有限公司；TGL-16冷凍離心機(jī) 四川蜀科儀器有限公司。

1.3 農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品各1支，用丙酮反復(fù)轉(zhuǎn)移并定容至10 mL混勻，配制成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，冷藏備用。按照樣品制備處理方法，提取空白基質(zhì)溶液，用于不同濃度標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的配制。

1.4 樣品提取液的制備

將樣品混勻后取出部分樣品，用制樣機(jī)打碎，準(zhǔn)確稱取1 g(精確至0.01 g)，加入色譜純乙腈5 mL，高速均質(zhì)1 min，5000 r/min冷凍離心5 min，將乙腈層轉(zhuǎn)移至玻璃試管中，重復(fù)提取1次，移取4 mL提取液加入50 mg C18粉和50 mg PSA粉，漩渦5 min。取1 mL上層溶液經(jīng)氮吹濃縮至近干加入1 mL丙酮，過0.22 μm濾膜上機(jī)分析。

1.5 檢測(cè)條件

進(jìn)樣口：250 ℃,不分流(高壓進(jìn)樣)；毛細(xì)管柱：Rxi-5Sil MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm，柱溫采用梯度升溫：起始溫度50 ℃(1 min)，以15 ℃/min升至280 ℃(10 min)。線速度：40 cm/s。進(jìn)樣體積：1 μL；載氣：高純氦氣。

溶劑延遲：6 min；離子源為電子電離源，溫度200 ℃；MS接口溫度：260 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

樣品前處理選擇了現(xiàn)在廣泛應(yīng)用的QuEChERS方法，香菇醬中一般添加有較高含量的植物油，選用乙腈作為提取溶劑，同時(shí)冷凍高速離心減少了提取液中油脂成分的引入。C18粉和PSA 粉可以吸附提取液中有機(jī)酸、色素、維生素等干擾物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)農(nóng)藥殘留的吸附作用較小，降低了樣品的基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)合質(zhì)譜的高靈敏度、高選擇性，對(duì)幾種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)更為準(zhǔn)確。5種農(nóng)藥的碎片離子質(zhì)譜圖見圖1～圖5，選擇質(zhì)量數(shù)較大，響應(yīng)較高的碎片離子進(jìn)行二級(jí)碎裂，同時(shí)優(yōu)化碰撞電壓，建立質(zhì)譜檢測(cè)條件，見表1。

圖1 五氯硝基苯碎片離子質(zhì)譜圖Fig.1 The mass spectrogram of pentachloronitrobenzene fragmentions

圖2 馬拉硫磷碎片離子質(zhì)譜圖Fig.2 The mass spectrogram of malathion fragmentions

圖3 毒死蜱碎片離子質(zhì)譜圖Fig.3 The mass spectrogram of chlorpyrifos fragmentions

圖4 腐霉利碎片離子質(zhì)譜圖Fig.4 The mass spectrogram of procymidone fragmentions

圖5 氰戊菊酯碎片離子質(zhì)譜圖Fig.5 The mass spectrogram of fenvalerate fragmentions

表1 農(nóng)殘保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Retention time and MRM parameters of pesticide residues

2.2 檢測(cè)方法的線性范圍與檢出限

用空白基質(zhì)將農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成0～1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以農(nóng)殘的質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)的定量離子色譜峰的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以3倍的S/N計(jì)算檢測(cè)方法的檢出限，結(jié)果見表2。

表2 5種農(nóng)殘線性范圍和檢出限Table 2 Linear ranges and detection limits of 5 kinds of pesticide residues

2.3 加標(biāo)回收率

為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，向香菇醬空白樣品中添加5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度為0.02 mg/kg，依照上述樣品提取方法制備提取液，同時(shí)平行測(cè)定 6次，結(jié)果見表3。

表3 5種農(nóng)殘加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Recoveries and relative standard deviations of 5 kinds of pesticide residues (n=6)

加標(biāo)樣品色譜圖見圖6。

圖6 加標(biāo)樣品總離子流色譜圖Fig.6 Total ion current chromatogram of spiked samples

由表3可知，5種農(nóng)殘回收率在76.5%～99.6%之間，滿足國家標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)要求。

2.4 精密度

采用濃度為0.1 μg/mL的混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行測(cè)定6次，用于驗(yàn)證方法的精密度，結(jié)果見表4。

表4 精密度(n=6)Table 4 The precision (n=6)

由表4可知，該方法測(cè)定的5種農(nóng)殘的精密度范圍為0.9%～2.2%，精密度滿足要求。

3 討論

我國是農(nóng)藥的生產(chǎn)消費(fèi)大國，農(nóng)藥的使用范圍和品種都有相關(guān)規(guī)定進(jìn)行了嚴(yán)格的限制，但農(nóng)藥殘留問題還是較為突出，一方面部分農(nóng)藥的分解周期比較長，另一方面濫用、超范圍使用的現(xiàn)象也時(shí)有發(fā)生，目前國內(nèi)外農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易越發(fā)頻繁，對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求也越來越高。香菇醬的主要原料是香菇，本文針對(duì)該產(chǎn)品建立了5種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，并進(jìn)行了方法學(xué)論證，結(jié)果表明該方法測(cè)定準(zhǔn)確，檢測(cè)周期短，為香菇醬的安全生產(chǎn)提供了技術(shù)支撐。