董 娜

（沈陽市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊，遼寧 沈陽 110031）

雞新城疫和傳染性支氣管炎是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疫病，每年給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為準(zhǔn)確掌握疫苗免疫效果，制定合理的免疫程序，筆者通過動態(tài)監(jiān)測雞新城疫、傳染性支氣管炎血清抗體水平，測定抗體消長規(guī)律，確定抗體保護(hù)的臨界值與最佳免疫時機，為制定科學(xué)的免疫程序提供了依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗雞群

1日齡海蘭褐蛋雞。

1.2 器材

96孔微量凝集反應(yīng)板、微量移液器、滴頭、微型振蕩器、臺式離心機、一次性注射器、滅菌離心管。

1.3 抗原和疫苗

新城疫陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。血凝試驗抗原，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）M41株疫苗，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。D弱毒克隆苗Clone30、新城疫油苗，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.4 溶液的配制

1%雞紅細(xì)胞懸液制備。采集至少3只SPF公雞或無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞的血液與等體積的阿氏液混合，用pH7.2、0.01摩爾/升PBS液洗滌3次（若上清液不澄清，需要繼續(xù)洗滌），每次均以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)為1%的紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

阿氏液制備(制作方法：檸檬酸鈉8克，檸檬酸0.55克，葡萄糖20.5克，NaCL4.2克，加水至1000毫升，其pH值6.1)。

2 方法

2.1 試驗設(shè)計

海蘭褐蛋雞90只，隨機分成三組，分別為：A（雞新城疫抗體消長規(guī)律測定）組、B（雞傳染性支氣管炎抗體消長規(guī)律測定）組和C（對照）組。每組30只。

A組在7日齡進(jìn)行新城疫Clone30點眼，每只1.2頭份；21日齡ND油苗頸部皮下注射0.3 mL，同時Clone30點眼；42日齡ND油苗頸部皮下注射0.5毫升同時clone30點眼。B組在1日齡進(jìn)行傳染性支氣管炎H120株滴鼻點眼；21日齡M41株滅活疫苗肌肉注射。C（對照）組不免疫。在第二次免疫當(dāng)天和以后的第1至10周分別靜脈采血。

2.2 采血方法

用一次性注射器翅靜脈采血2～3毫升，室溫條件下靜置使血清自然析出，然后用一次性 2毫升 離心管收集血清，做好標(biāo)記后放入 4℃冰箱中保存。

2.3 檢測方法

2.3.1 傳染性支氣管炎抗原的制備與凍干 以l04/0.1ml氣管輪纖毛半數(shù)停止擺動劑量(OCD50) 的M41株經(jīng)尿囊腔接種10日齡非免疫雞胚，37℃孵化30小時， 4℃過夜，無菌收取尿囊液。經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘澄清的尿液，再經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心1小時沉淀病毒。用稀釋液懸浮沉淀至原尿液量的1/100。加入新鮮的磷酸脂酶C，使其終濃度為5單位/毫升， 充分混勻。37℃作用2小時，間隔10分鐘振蕩一次，取出后置4℃48小時。然后加入等容積10%蔗糖脫脂乳做保護(hù)劑，分裝、凍干，于-25℃保存。

2.3.2 采用血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗進(jìn)行抗體檢測先通過血凝試驗測定標(biāo)準(zhǔn)抗原的效價，然后根據(jù)血凝抑制試驗的方法及操作規(guī)范對血清樣品進(jìn)行檢測。能夠完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)為HI滴度，并按常規(guī)方法進(jìn)行陰性和陽性對照。

3 結(jié)果與分析

3.1 雛雞新城疫免疫后抗體消長規(guī)律

雛雞新城疫免疫后在不同免疫次數(shù)和免疫周數(shù)的平均抗體效價見表1。

3.2 雛雞傳染性支氣管炎免疫后抗體消長規(guī)律

雛雞傳染性支氣管炎免疫后在不同免疫次數(shù)和免疫周數(shù)的平

表2 傳染性支氣管炎疫苗免疫雞抗體消長規(guī)律

結(jié)果表明，雞新城疫初免時基礎(chǔ)抗體效價為3.7 log2，免疫后1周達(dá)到保護(hù)線以上（5.4 log2），二周達(dá)6.8 log2，此時進(jìn)行二免，二免后第一周抗體水平略有下降，第二周開始上升，第三周進(jìn)行三免，三免后第四周抗體水平升至高峰的10.2 log2，此后逐漸下降。均抗體效價見表2。

結(jié)果表明，傳染性支氣管炎M41株疫苗二次免疫后抗體水平持續(xù)30周還保持在7log2以上，證明其保護(hù)期至少在二免后30周以上。

4 討論

雛雞首次新城疫免疫后抗體水平不會很高，免疫后7～10天出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，2周免疫抗體達(dá)到高峰，此后抗體開始下降。本實驗在一免后2周抗體達(dá)到最大值6.8 log2，此時進(jìn)行二免，使抗體水平一直保持在保護(hù)值以上。二免后第一周抗體為6.1 log2，由于活疫苗抗體中和作用，抗體略有下降，第二周抗體開始升高達(dá)7.3 log2，第三周達(dá)到8.5 log2，此時三免。至三免后第17周降至保護(hù)線的5.1 log2，此時應(yīng)進(jìn)行加強免疫。

雛雞傳染性支氣管炎免疫抗體平均水平在首免后2周達(dá)到保護(hù)值5.3 log2，此時進(jìn)行加強免疫。二免后抗體持續(xù)升高，到第7周達(dá)到最大值，此后逐漸回落，但到30周時仍保持較高水平，說明傳染性支氣管炎M41株疫苗能提供較好的免疫保護(hù)。