李飛

微生物技術(shù)是21世紀(jì)人類(lèi)三大科技革命之一，微生物技術(shù)的誕生以及實(shí)際應(yīng)用對(duì)于食品領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域以及材料領(lǐng)域的發(fā)展都會(huì)產(chǎn)生極為明顯的影響。微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)是微生物技術(shù)的應(yīng)用基礎(chǔ)，其重要性不言而喻。微生物檢測(cè)的主要對(duì)象包括細(xì)菌以及病毒，所檢測(cè)的指標(biāo)包括數(shù)量以及鑒定等，如果檢驗(yàn)要求相對(duì)較高，還會(huì)加入細(xì)胞的活性狀態(tài)檢驗(yàn)等。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，各個(gè)領(lǐng)域以及相關(guān)部門(mén)對(duì)于微生物檢測(cè)的時(shí)效性、準(zhǔn)確性等都提出了很高的要求。食藥部門(mén)需要對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，而生化行業(yè)等需要對(duì)特殊菌種進(jìn)行更為精準(zhǔn)的檢測(cè)。因此，微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的更新與發(fā)展十分關(guān)鍵。

一、快速測(cè)試卡

在微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)當(dāng)中，快速測(cè)試卡最為常見(jiàn)，這是一種對(duì)涂布方法進(jìn)行簡(jiǎn)化處理，達(dá)到檢測(cè)速度提高的一種微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)。目前，快速測(cè)試卡的應(yīng)用相對(duì)較為成熟，且其應(yīng)用的成本很低，日常攜帶也很方便，對(duì)于需要進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的相關(guān)指標(biāo)而言應(yīng)用情況較好。這種技術(shù)可以將實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基用帶有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的預(yù)制壓片等進(jìn)行替代，檢驗(yàn)人員可以在進(jìn)行取樣與涂布的同時(shí)，將取樣后的預(yù)制載體直接用于培養(yǎng)處理，無(wú)需進(jìn)行稀釋?zhuān)瑥亩苊猬F(xiàn)場(chǎng)采樣與實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作較為繁瑣的環(huán)節(jié)。這種方法可以對(duì)培養(yǎng)物質(zhì)成分進(jìn)行相應(yīng)的改良，并且縮短一些指標(biāo)的實(shí)際培養(yǎng)時(shí)間，但是一般來(lái)講，其培養(yǎng)時(shí)間仍然需要在12小時(shí)以上。

與此同時(shí)，也可以按照相關(guān)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者特定需求選擇試紙型器材試劑。這類(lèi)試劑可以利用指示劑顯色反應(yīng)原理對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行定性檢測(cè)。這種技術(shù)的應(yīng)用與涂布法有一些差異，主要是利用特征菌與相應(yīng)的特定物質(zhì)成分進(jìn)行反應(yīng)顯色處理，而不是進(jìn)行涂布計(jì)數(shù)處理，所以無(wú)法避免培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)這一問(wèn)題。

二、PCR檢測(cè)技術(shù)

PCR技術(shù)的原理是對(duì)人體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程進(jìn)行模擬的一種技術(shù)，屬于體外擴(kuò)增DNA技術(shù)領(lǐng)域，在兩段已知序列間DNA擴(kuò)增中應(yīng)用廣泛。該疾病在需要進(jìn)行擴(kuò)增的DNA片段雙側(cè)，與其進(jìn)行互補(bǔ)的寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個(gè)循環(huán)后，DNA擴(kuò)增2n倍。PCR的每個(gè)循環(huán)過(guò)程包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三個(gè)不同的階段：（①變性：通過(guò)94℃高溫加熱方式促使模板DNA雙鏈之間存在的氫鍵斷裂，從而形成兩條單鏈;②退火;將溶液進(jìn)行降溫處理，一般在50℃左右，使模板DNA能夠和引物按堿基按照配對(duì)原則進(jìn)行互補(bǔ);③延伸：加熱溶液反應(yīng)溫度，一般在72℃左右，將單鏈DNA設(shè)置為耐熱DNA聚合酶的基礎(chǔ)模板，基于引物的引導(dǎo)作用，通過(guò)反應(yīng)混合物中出現(xiàn)的四種脫氧核苷三磷酸（dNTP），以（5'—3）進(jìn)行互補(bǔ)DNA復(fù)制。

PCR技術(shù)進(jìn)行微生物檢驗(yàn)是一種新型的檢驗(yàn)技術(shù)，也被稱(chēng)為體外基因擴(kuò)增技術(shù)。PCR技術(shù)檢驗(yàn)可以對(duì)各類(lèi)型病變患者身體當(dāng)中存在的病毒DNA進(jìn)行相應(yīng)的熒光標(biāo)記處理，也能對(duì)病毒DNA的轉(zhuǎn)錄以及翻譯情況進(jìn)行相應(yīng)的檢驗(yàn)，這樣就可以避免病毒DNA在低水平復(fù)制當(dāng)中出現(xiàn)病毒抗體的假陰性情況，以免各類(lèi)型病變患者出現(xiàn)誤診或者漏診等，從而提高臨床中患者檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度。此外，與常規(guī)的檢驗(yàn)方式相比，PCR技術(shù)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度更高，且成本不會(huì)過(guò)高，檢驗(yàn)人員的操作較為方便，應(yīng)用難度不會(huì)太大，所以在臨床中得到了較為廣泛的應(yīng)用。

三、ATP熒光檢測(cè)

熒光檢測(cè)屬于自然光反應(yīng)，利用ATP和熒光素酶之間的反應(yīng)，能夠?qū)?xì)胞、殘?jiān)⒚咕图?xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)只需15秒便能夠得到結(jié)果，有專(zhuān)門(mén)的儀器測(cè)量光照度。此項(xiàng)技術(shù)在1975年被首次于食品工業(yè)應(yīng)用，1985年在化妝品制造業(yè)中被使用，隨后在更多的行業(yè)中被廣泛使用推廣。

四、細(xì)菌毒素檢測(cè)技術(shù)

衡量細(xì)菌致病的能力強(qiáng)弱的一個(gè)重要因素就是毒力的大小，其毒力基礎(chǔ)物質(zhì)就是毒素，毒素可分為兩種，分別為外毒素和內(nèi)毒素。內(nèi)毒素指的是細(xì)胞壁毒素，在細(xì)菌死亡、自溶和破裂時(shí)才會(huì)釋放，外毒素指的是細(xì)菌生產(chǎn)期間排出的毒素。在臨床微生物檢驗(yàn)中，提取標(biāo)本中毒素予以快速檢測(cè)，比對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)所得結(jié)果更具有可信度。國(guó)外有學(xué)者研制出了PRLA乳膠凝集試劑，能夠在VT-1、VT-2的毒素檢測(cè)中應(yīng)用。在微生物快速檢測(cè)中，菌體利用多黏菌素進(jìn)行裂解，集中釋放VT毒素，將其與乳膠試劑共同置于U形板中進(jìn)行溫育，24小時(shí)后取出，肉眼觀察，可以直接得到菌體凝集反應(yīng)的結(jié)果。也有相關(guān)文獻(xiàn)指出，金黃色葡萄球菌與多種腸道毒素有關(guān)，對(duì)此可以通過(guò)協(xié)同凝集技術(shù)（單克隆抗體）快速檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)食物中毒快速診斷的目標(biāo)。

五、生物傳感器技術(shù)

生物傳感器技術(shù)就是將傳感器技術(shù)和分子診斷進(jìn)行有機(jī)結(jié)合而形成的一種技術(shù)，現(xiàn)階段臨床診斷的主要研究和發(fā)展技術(shù)就是生物傳感器，其主要部分有兩個(gè)，分別為分子識(shí)別器和換能器。此項(xiàng)技術(shù)在分子相互作用、食品檢查、藥物篩選和診斷等多個(gè)行業(yè)領(lǐng)域都得到了大量的關(guān)注，且在近幾年內(nèi)發(fā)展迅速。生物傳感器技術(shù)具有速度快、準(zhǔn)確率高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，也因此在實(shí)驗(yàn)室中被大范圍應(yīng)用。臨床上使用最多的傳感器就是DNA傳感器，用于對(duì)細(xì)菌和病毒等微生物進(jìn)行檢查，效果十分令人滿(mǎn)意。對(duì)比傳統(tǒng)的核酸檢測(cè)，生物傳感器的操作更為簡(jiǎn)便，且準(zhǔn)確率更高，在臨床檢驗(yàn)中的實(shí)用性更高，且具有一定的發(fā)展空間。

六、生物芯片相關(guān)技術(shù)

生物芯片將生物大分子固定在支持物（尼龍膜、玻片）上，構(gòu)成生物分子點(diǎn)陣，待芯片探針與生物分子產(chǎn)生相互作用后，對(duì)探針?lè)肿铀a(chǎn)生的雜交信號(hào)進(jìn)行強(qiáng)度檢測(cè)，能夠得到分子的數(shù)目以及標(biāo)本的序列信號(hào)，進(jìn)而施行高通量快速檢測(cè)的目的。常見(jiàn)的生物大分子有基因片段、多肽和蛋白質(zhì)。根據(jù)所用探針不同可以將生物芯片分為多個(gè)種類(lèi)，如細(xì)胞芯片、蛋白質(zhì)芯片和DNA芯片。DNA芯片就是我們常提到的基因芯片，其具有快速性和高效性，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)獲得準(zhǔn)確率高的遺傳信息，在抗感染藥物、基因序列、耐藥機(jī)制和變異等研究中都可以應(yīng)用。DNA芯片的優(yōu)勢(shì)主要為可處理多個(gè)樣品、污染性小、速度快、用量小等，每一張芯片都可以檢測(cè)一個(gè)混合感染樣品，在最短的時(shí)間內(nèi)盡可能地獲得更多的信息，在實(shí)際的應(yīng)用中此特點(diǎn)具有極大的優(yōu)勢(shì)和實(shí)用性。

需要注意的是，無(wú)論相關(guān)人員選擇何種技術(shù)進(jìn)行微生物快速檢驗(yàn)，都需要按照相應(yīng)的規(guī)程進(jìn)行操作，遵照操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理，避免因?yàn)椴僮鞑划?dāng)而導(dǎo)致微生物快速檢驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)誤差，這可能會(huì)導(dǎo)致微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)錯(cuò)誤。錯(cuò)誤的檢驗(yàn)結(jié)果將會(huì)對(duì)臨床治療帶來(lái)誤導(dǎo)，也會(huì)給患者造成不必要的損失。