藥學(xué)院，山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)，山東 泰安 271016

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的一項(xiàng)調(diào)查報(bào)告，目前世界上處于亞健康狀態(tài)的人數(shù)約占世界人口的75%[1]。亞健康的表現(xiàn)多樣，疲勞是最常見(jiàn)的一種，主要表現(xiàn)為身心疲憊且困倦，工作能力與注意力下降，是人體腦力或體力活動(dòng)到一定階段時(shí)必然出現(xiàn)的一種正常生理現(xiàn)象，涉及多種生理生化因素。因此，提高機(jī)體的抗疲勞能力，改善亞健康狀態(tài)成為保健品的重要開(kāi)發(fā)方向之一。泰山四葉參(CodonopsLanceolataBenth．et.Hook．F．)是泰山“四大名藥”之一，為桔梗科黨參屬植物，又名羊乳、羊奶參、輪葉黨參等，為藥食兼用的經(jīng)濟(jì)植物。近年來(lái)有研究表明，泰山四葉參中多糖含量高達(dá)10%以上，具有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、體外抗氧化等多種作用[2-6]。但有關(guān)四葉參多糖的保健品市場(chǎng)還未得到很好的開(kāi)發(fā)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)濕法制粒制備泰山四葉參多糖保健顆粒劑，通過(guò)設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化制粒處方，為泰山四葉參多糖保健顆粒劑的制備提供技術(shù)參數(shù)，并通過(guò)《中國(guó)藥典》顆粒劑檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及小鼠負(fù)重游泳的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)初步評(píng)價(jià)顆粒劑的性狀質(zhì)量及抗疲勞作用，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)泰山四葉參多糖保健顆粒劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

泰山四葉參(采自山東第一醫(yī)科大學(xué)中藥植物園，經(jīng)中藥教研室鑒定為桔?？泣h參屬泰山四葉參)；昆明種小鼠(北京維通利華)；小鼠恒溫游泳池(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)；離心機(jī)(鹽城凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；UV-2550型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津)。

1.2 方法

1.2.1泰山四葉參多糖的提取 參照文獻(xiàn)，稱取干燥四葉參，加2倍量石油醚回流脫脂4次，1 h /次。經(jīng)石油醚脫脂后，濾渣在50℃下烘干。用1000 mL蒸餾瓶以4倍量蒸餾水裝入適量四葉參干燥藥材粉末，在沸水浴中回流提取3次，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至150 mL。以每100 mL濃縮液加20 mL氯仿正丁醇(4︰1)液，劇烈振蕩30 min，以4000 r/min離心15 min，去除下層氯仿及中層變性蛋白，取上部水層再重復(fù)去蛋白操作，至無(wú)明顯中層為止。收集去蛋白后的上部水層，加無(wú)水乙醇，靜置過(guò)夜，以4000 r/min離心10 min，收集沉淀物，再依次用95%乙醇、無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌各2次，得多糖粗品。再以水-乙醇重結(jié)晶純化2次，50℃烘干，得白色末狀泰山四葉參多糖。

1.2.2多糖的含量測(cè)定 通過(guò)苯酚-硫酸法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測(cè)定所提取藥物粉末中泰山四葉參中多糖含量[7]。測(cè)定所提取藥物粉末中泰山四葉參多糖含量為62.8%。

1.2.3泰山四葉參多糖保健顆粒輔料的篩選及顆粒劑制備 選取輔料種類、物料比例、潤(rùn)濕劑乙醇濃度3個(gè)因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)(表1)。以多糖顆粒劑的成型率(成型率=過(guò)篩后顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100%)及外觀為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，確定泰山四葉參多糖保健顆粒制粒處方。

表1 因素與水平表

1.2.4泰山四葉參保健顆粒抗疲勞效果評(píng)價(jià) 取正常小鼠24只，雌雄各半，平均分為3組。分別為泰山四葉參多糖提取物組(多糖含量為400 mg/kg)，泰山四葉參保健顆粒劑組(多糖含量為400 mg/kg)，空白對(duì)照組(給予等量生理鹽水)。每日1次，連續(xù)給藥21 d[6]。末次給予小鼠受試物30 min后，置于恒溫游泳池中游泳，水深為35 cm，水溫為(25±0.5)℃，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的夾子。負(fù)重游泳力竭時(shí)間指小鼠開(kāi)始游泳至頭沉入水下20 s的時(shí)間[8-9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 泰山四葉參多糖保健顆粒輔料篩選結(jié)果

影響四葉參多糖顆粒劑制備的因素依次是輔料種類、乙醇濃度和物料比例；獲得的最佳組合為A1B2C2，即選擇可用性淀粉作為輔料，物料比采用1∶3，潤(rùn)濕劑用80%的乙醇制粒。具體見(jiàn)表2。

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 保健顆粒的質(zhì)量檢查結(jié)果

2.2.1粒度 取5 g按正交實(shí)驗(yàn)篩選的最優(yōu)處方制備的四葉參顆粒劑，置藥篩內(nèi)過(guò)篩，過(guò)篩時(shí)，目篩保持水平狀態(tài)，左右水平搖晃1 min，稱量不能通過(guò)一號(hào)篩和能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒及粉末的總重量。不能通過(guò)一號(hào)篩和能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒和粉末總重為0.1 g，故符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2.2溶化性 取5 g按正交實(shí)驗(yàn)篩選的最優(yōu)處方制備的四葉參顆粒劑，加熱水(50℃)100 mL，攪拌5 min，顆粒劑完全溶化，故符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 泰山四葉參保健顆粒抗疲勞效應(yīng)評(píng)價(jià)結(jié)果

小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在多糖含量相同的情況下，四葉參多糖保健顆粒劑和四葉參多糖提取物均能明顯延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，二者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 四葉參多糖抗疲勞實(shí)驗(yàn)

注：與空白對(duì)照組相比，*P<0.05。

3 討 論

本研究設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，考察了輔料種類、乙醇濃度和物料比例3個(gè)因素，優(yōu)化制粒處方，通過(guò)濕法制粒制備泰山四葉參多糖保健顆粒劑，進(jìn)一步觀察各水平下多糖顆粒劑的成型率及外觀是否符合要求。結(jié)果確定了最佳輔料及物料比例，即以可溶性淀粉作為輔料，物料比采用1︰3，80%的乙醇為潤(rùn)濕劑，同時(shí)以該條件制得的四葉參多糖顆粒劑符合《中國(guó)藥典》對(duì)顆粒劑粒度及溶化性的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。最后通過(guò)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步評(píng)價(jià)泰山四葉參多糖保健顆粒劑抗疲勞的保健作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)方法制備的泰山四葉參多糖顆粒劑(400 mg/kg)與相同藥量的泰山四葉參多糖提取物均可提高小鼠的抗疲勞能力，而二者之間無(wú)明顯差異，顆粒劑的輔料對(duì)于四葉參多糖提取物的抗疲勞作用無(wú)影響。該研究結(jié)果可為泰山四葉參多糖顆粒劑作為抗疲勞保健品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。