陳順琴 楊暉 王愛(ài)民
摘要:利用超聲提取-氣相色譜法測(cè)定高粱中腈菌唑與烯唑醇農(nóng)藥殘留。高粱樣品用不同比例的乙腈-丙酮進(jìn)行提取,弗洛里硅藻土凈化,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,最后采用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器(ECD)進(jìn)行測(cè)定。腈菌唑農(nóng)藥線性范圍為0.012 5~0.400 μg/g,方法檢出限(3S/N)為0.002 μg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)RSD為3.7%;烯唑醇農(nóng)藥線性范圍為0.004 76~0.152 μg/g,方法檢出限(3S/N)為0.000 83 μg/g,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)RSD為1.2%。該方法簡(jiǎn)單、高效、快速、靈敏,能滿(mǎn)足高粱中腈菌唑與烯唑醇農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。
關(guān)鍵詞:氣相色譜法;超聲提取;腈菌唑;烯唑醇;高粱
中圖分類(lèi)號(hào):S132? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):0439-8114(2019)10-0146-04
Abstract: A method of ultrasonic assisted extraction combined with gas chromatography was used to determine pesticide residue of myclobutanil and diniconazole in sorghum.The sample was extracted by a mixture of acetonitrile and acetone,then purified with concentrated flory diatomite acid,concentrated with rotary evaporation,and analyzed with GC-ECD. Linearity range of myclobutanil was found between 0.012 5~0.400 μg/g,and the detection limit(3S/N) was 0.002 μg/g,and the values of RSD(n=6) was 3.7%;Linearity range of diniconazole was found between 0.004 76~0.152 μg/g,and the detection limit(3S/N) was 0.000 83 μg/g,and the values of RSD(n=6) was 1.2%. This developed method is simple,quickness,rapid,sensitive and can therefore be used for the determination of myclobutanil and diniconazole in sorghum.
Key words: gas chromatograph;ultrasonic assisted extraction;myclobutanil;diniconazole;sorghum
腈菌唑、烯唑醇均屬于高效、低毒、廣譜的新型三唑類(lèi)殺菌劑農(nóng)藥,主要對(duì)病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用,對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌均具有較好的防治作用[1,2]。腈菌唑化學(xué)名稱(chēng)為2-(4-氯苯基)-2-(IH-1,2,4三唑甲基)己腈[3];烯唑醇又名病除凈、速保利、特譜唑,化學(xué)名字為(E)-1-(2,4-二氯苯基)-4,4-二甲基-2-(1,2,4-三唑-1-基)-1-戊烯-3-醇[3]。該類(lèi)殺菌劑主要用于防治谷物葉部和穗部病害,如霜霉病、斑枯病、萎凋病、黑粉病、腹黑病、銹病、瘡痂病等;在種子處理中用于預(yù)防治黑粉菌、腥黑粉菌和腔菌導(dǎo)致的病害;也可防治葡萄的霜霉病,玫瑰的霜霉病、銹病和黑斑病,花生的葉斑病,香蕉葉斑病和咖啡銹病;也用于果樹(shù)、蔬菜和其他觀賞植物。這類(lèi)殺菌劑具有極高的殺菌活性、內(nèi)吸性強(qiáng)、持效期長(zhǎng),兼有預(yù)防與治療的作用,是一種高活性的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和殺菌劑。但其對(duì)人體的危害不容忽視,很多國(guó)家已經(jīng)明確限定該農(nóng)藥在食品中的最高殘留量[4]。
目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于烯唑醇的殘留檢測(cè)方法主要有雙標(biāo)記時(shí)間分辨熒光免疫分析[5]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[6-9]、高效液相色譜法-(HPLC)[10,11]、氣相色譜法(GC)[12-15]。在以上對(duì)于腈菌唑、烯唑醇?xì)埩袅繖z測(cè)中液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析較多,但氣相色譜分析較少,且均是單獨(dú)對(duì)其中一種殺菌劑進(jìn)行分析。本研究以貴州省仁懷高粱為研究對(duì)象,因在貴州省高粱主要用于釀酒,在種植過(guò)程中會(huì)用到烯唑醇、腈菌唑等殺菌劑,因此對(duì)于高粱中腈菌唑、烯唑醇檢測(cè)具有重要意義。
1? 材料與方法
1.1? 儀器與試劑
Agilent 6890N型氣相色譜儀(配ECD);GC-2014型氣相色譜儀配氮磷檢測(cè)器(FTD);HB-10250型數(shù)控超聲波清洗器;EYELA OSB-2000型旋轉(zhuǎn)儀蒸發(fā)儀;AL204型電子天平;80-2臺(tái)式低速離心機(jī)。
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備品:腈菌唑、烯唑醇均為色譜純(純度>99.0%),購(gòu)自SIGMA-ALDRICH公司,取適量腈菌唑、烯唑醇分別配制成5 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
甲醇、乙腈、二氯甲烷均為高效液相色譜純;乙酸乙酯、石油醚、無(wú)水硫酸鈉均為分析純;弗洛里硅藻土為農(nóng)殘級(jí)(60~100目),中性氧化鋁,層析柱:30 cm×10 mm。
1.2? 色譜條件
載氣:高純氮?dú)猓?9.999%);進(jìn)樣口溫度(INJ):280 ℃;檢測(cè)器溫度(DET):320 ℃;色譜柱:弱極性SE-54石英毛細(xì)管色譜柱(50 m×0.32 mm×0.32 μm),溫度(COL):260 ℃;分流進(jìn)樣,分流比為45∶1,柱流速:1.5 mL/min;尾吹氣流量60 mL/min。
1.3? 試驗(yàn)方法
1.3.1? 樣品提取? 稱(chēng)取粉碎均勻的高粱樣品5.00 g于250 mL具塞錐形瓶中,加20 mL乙腈-丙酮(3∶1,V∶V,下同)搖勻,超聲20 min,收集提取液;再加入10 mL乙腈-丙酮(1∶1)超聲10 min,合并兩次提取液,提取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉除水過(guò)濾至濃縮瓶中,并于45 ℃的水浴下濃縮至近干后用乙腈定容至2 mL,待過(guò)柱凈化。
1.3.2? 樣品凈化? 層析柱(30 cm×10 mm)自下而上依次填入2 cm無(wú)水硫酸鈉、4 cm弗洛里硅藻土、2 cm無(wú)水硫酸鈉。凈化柱填好后用10 mL乙腈-丙酮(3∶1)預(yù)淋洗柱子,棄去淋洗液,將待凈化試樣轉(zhuǎn)移至柱子并用5 mL乙腈-丙酮(3∶1)洗滌濃縮瓶并倒入凈化柱中,重復(fù)3次,再用5 mL乙腈-丙酮(3∶1)淋洗柱子,收集洗脫液,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干,加5 mL的正己烷置換溶劑再次濃縮至近干,用正己烷定容至2 mL供色譜分析。
2? 結(jié)果與分析
2.1? 色譜行為
腈菌唑、烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖1。
2.2? 色譜檢測(cè)器的選擇
腈菌唑、烯唑醇這兩種化合物均含有特征元素N、Cl,試驗(yàn)分別比較了兩物質(zhì)在氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器(ECD)與火焰熱離子檢測(cè)器(FTD)上的參數(shù)大小,結(jié)果見(jiàn)表1,對(duì)比分析得到腈菌唑、烯唑醇采用ECD檢測(cè)器效果良好,分析靈敏度高。
2.3? 提取溶劑的選擇
腈菌唑、烯唑醇能溶解于不同的有機(jī)溶劑,本研究選取乙腈、丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、乙腈-丙酮(1∶1)、乙腈-丙酮(3∶1)作為提取溶劑對(duì)比回收率,結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明,提取溶劑為純乙腈、乙腈-丙酮(1∶1)濃縮時(shí)間較長(zhǎng),成本較高。因此,本試驗(yàn)采用乙腈-丙酮(3∶1)作為試驗(yàn)提取溶劑。
2.4? 提取方法的選擇
試驗(yàn)分別比較了不同提取方法下的回收率,結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明,多次超聲提取效果較好、回收率較高。
2.5? 凈化方法選擇
試驗(yàn)分別選取弗洛里硅藻土固相萃取柱、氧化鋁固相萃取柱、活性炭柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化,結(jié)果見(jiàn)圖4。結(jié)果表明,活性炭柱對(duì)樣品的吸附能力很強(qiáng),洗脫耗時(shí)較長(zhǎng),不利于樣品凈化分析;氧化鋁柱去除樣品色素效果較差,且干擾大回收率較低;弗洛里硅藻土回收率較高,且除干擾物質(zhì)效果良好,有利于色譜定性與定量。弗洛里硅藻土凈化樣品加標(biāo)回收率見(jiàn)圖4。
2.6? 方法的回收率與精密度
稱(chēng)取粉粹的高粱樣品6份,每份5.00 g,分別添加相同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。前處理方法的回收率、精密度見(jiàn)表2。結(jié)果表明,該方法回收率均在83.2%~118.0%范圍內(nèi),滿(mǎn)足分析要求。方法精密度為8.3%~8.8%,說(shuō)明該方法穩(wěn)定性良好,適用于樣品分析。
2.7? 方法應(yīng)用
在谷物類(lèi)糧食(小麥、大米、玉米、蕎麥)中,各物質(zhì)的色素及脂類(lèi)含量差異較大,為了進(jìn)一步檢驗(yàn)該方法的實(shí)用性,對(duì)以上幾種糧食進(jìn)行了加標(biāo)回收率試驗(yàn)。將小麥、大米、玉米、蕎麥等谷物類(lèi)糧食連皮一起粉碎,稱(chēng)取5.00 g樣品置于錐形瓶進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn),分析條件采用高粱中腈菌唑、烯唑醇的分析條件,設(shè)3個(gè)加標(biāo)梯度,每個(gè)加標(biāo)濃度設(shè)3個(gè)平行,回收率取平均值,加標(biāo)量濃度與回收率見(jiàn)表3。對(duì)表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得到小麥、大米、玉米與蕎麥等樣品中腈菌唑的回收率為70.2%~103.8%,烯唑醇回收率為78.0%~96.5%,滿(mǎn)足分析要求,樣品凈化后無(wú)雜質(zhì)干擾。因此該方法能用于不同種糧食中腈菌唑、烯唑醇?xì)埩袅繖z測(cè)。
運(yùn)用已建立并優(yōu)化的方法,對(duì)貴陽(yáng)市各地區(qū)的谷物(高粱、小麥、大米、玉米、蕎麥)中腈菌唑、烯唑醇?xì)埩袅窟M(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,腈菌唑、烯唑醇檢出率極小、含量少,低于國(guó)家食品安全要求限量值(GB/T 2763-2012)[16],檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。
3? 結(jié)論
本研究建立了高粱中腈菌唑、烯唑醇等農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法,并將該方法應(yīng)用于小麥、大米、玉米、蕎麥等農(nóng)作物中。樣品采用超聲波震蕩提取,弗洛里固相凈化柱凈化,氣相色譜電子捕獲器檢測(cè)檢測(cè)。結(jié)果表明,該方法檢出限高、靈敏度高,同時(shí)回收率也在農(nóng)殘類(lèi)回收率要求范圍之內(nèi)。
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