邴國霞,金 萍,劉 偉,董昕欣,吳 迪,王曉英,原 霖,李雁冰,郭建宏

(1.中國動物疫病預防控制中心,北京 朝陽 100125;2.北京市動物疫病預防控制中心,北京 大興 102629;3.中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所,黑龍江 哈爾濱 150001;4.中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所,甘肅 蘭州 730046)

實驗室檢測能力比對是農業(yè)農村部加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理的主要抓手,也是評價和提高實驗室管理水平和檢測能力的重要手段。按照《農業(yè)農村部辦公廳關于開展2018年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知》[1]要求,中國動物疫病預防控制中心組織實施了2018年獸醫(yī)系統(tǒng)省級實驗室能力比對,全國32個省級獸醫(yī)實驗室參加,在規(guī)定時間內完成了比對樣品制備、分發(fā)、檢測和結果回收。通過能力比對,驗證了各實驗室檢測技術水平,發(fā)現(xiàn)了實驗室在質量管理方面和能力建設存在的問題,為農業(yè)農村部今后加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理提供了數(shù)據支撐和政策建議。

1 比對計劃

本次比對依據中國動物疫病預防控制中心有關2018年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對的文件[2]要求,共設置4個比對項目,分別是H7亞型禽流感病毒(AIV Ab)抗體檢測、口蹄疫病毒(FMDV)和塞內卡病毒(SVA)鑒別檢測、布魯菌抗體檢測(BRU Ab)、豬偽狂犬病病毒(PRV)gE抗體檢測。全國共有32個省級獸醫(yī)實驗室(含新疆生產建設兵團)參加此次比對。

2 比對方法

2.1 試驗方法與標準 針對4個檢測能力比對項目,采用國家獸醫(yī)參考實驗室或專業(yè)實驗室推薦的方法和試劑,其中部分試劑由參加比對的省級實驗室自行準備,見表1。

2.2 比對樣品制備

2.2.1 制備方式 各國家獸醫(yī)參考實驗室和專業(yè)實驗室分別完成相應樣品的制備、標定、分裝和編號,并將樣品和標定值送交中國動物疫病預防控制中心統(tǒng)一保存,作為盲樣下發(fā)使用。

表1 比對試驗的方法、標準和主要試劑

2.2.2 H7亞型AIV Ab檢測樣品 雞血清樣品6份,參考值設為 6log2、0log2、3log2,各參考值樣品數(shù)目不確定。

2.2.3 FMDV和SVA鑒別檢測樣品 口蹄疫和塞內卡病毒樣品6份,參考值分別設為FMDV陰性和SVA陰性、FMDV陽性和SVA陽性、FMDV陽性和SVA陰性、FMDV陰性和SVA陽性。

2.2.4 BRU Ab檢測樣品 羊血清樣品6份,樣品參考值分別設為強陽性、陽性、陰性,各參考值樣品數(shù)目為2份。

2.2.5 PRV gE Ab檢測樣品 豬血清樣品6份,樣品參考值分別設為強陽性、弱陽性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不確定。

2.3 比對樣品傳遞 比對樣品為具有生物學活性的血清、細胞液,為保持其良好的生物學活性,樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存,由參加比對的省級實驗室派專人在規(guī)定的時間內統(tǒng)一領取,并在12小時之內送達參加比對的實驗室。

2.4 評判標準

2.4.1 H7亞型 AIV Ab檢測評判標準：6log2、3log2、0log2樣品的檢測結果應分別為“6”、“3” 、“0”。

2.4.2 FMDV和SVA鑒別檢測評判標準：FMDV陰性和SVA陰性、FMDV陽性和SVA陽性、FMDV陽性和SVA陰性、FMDV陰性和SVA陽性的檢測結果應分別為“FMDV(-)和 SVA(-)”、“FMDV(+)和 SVA(+)”、“FMDV(+)和 SVA(-)”、“FMDV(-)和 SVA(+)”。

2.4.3 BRU Ab檢測評判標準：強陽性樣品的檢測結果為“＞200”;弱陽性樣品的檢測結果為“100”;陰性樣品的檢測結果應為“＜25”。

2.4.4 PRV gE Ab檢測評判標準：強陽性和弱陽性樣品的檢測結果為“+”;陰性樣品的檢測結果應為“-”。

3 比對結果

3.1 總體結果 根據比對結果評判標準,在32個參加檢測能力比對省級獸醫(yī)實驗室中,共有26個實驗室的4個比對項目全部符合,有6個實驗室各有1個比對項目存在較大偏差,見表1。

表1 32個實驗室比對結果統(tǒng)計

3.2 H7亞型AIV Ab檢測比對結果 29個實驗室對該項目6份樣品檢測結果全部準確,其中有2個實驗室有1份樣品的檢測結果錯誤,分別將參考值為“6log2”樣本檢測為“4”、將參考值為“3log2”樣本檢測為“0”;有1個實驗室有2份樣品的檢測結果錯誤,分別將參考值為“6log2”樣本檢測為“8”、將參考值為“0log2”樣本檢測為“3”,見中插彩版圖1。

30個實驗室對該項目6份樣品檢測結果全部準確,其中有2個實驗室有1份樣品的檢測結果錯誤,均將 SVA陰性檢測為“SVA(+)”見表2。

表2 各實驗室FMDV和SVA鑒別檢測結果

3.3 PRV gE Ab檢測比對結果 32個實驗室的檢測結果全部正確,見表3。

表3 各實驗室PRV gE Ab檢測結果

3.4 BRU Ab檢測比對結果 31個實驗室對該項目6份樣品檢測結果全部準確,1個實驗室有4份樣品的檢測值與參考值存在較大偏差。結果見中插彩版圖2。

4 討論

4.1 從比對結果來看,共32個省級獸醫(yī)實驗室參加了4個比對項目768樣品的檢測,其中758份樣品檢測結果準確,準確率均為98.7%,同時近3年(2016-2018年)的準確率分別為 98.8%[3]、99.3%[4]、98.7%,保持了較高的檢測水準,這說明各省實驗室檢測質量體系比較穩(wěn)定,同時也說明獸醫(yī)實驗室考核和檢測能力比對在提升實驗室能力建設方面發(fā)揮了重要作用。

4.2 本次實驗室檢測能力比對在H7亞型AIV Ab檢測項目中設置了平行樣品,用以評估實驗室檢測體系的穩(wěn)定性。結果顯示,30個實驗室的檢測結果平行性好,有2個實驗室對于參考值相同的2份樣品檢測結果不一致。這說明檢測過程中存在較多的隨機性誤差,檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性不好。

4.3 半定量檢測項目一直是實驗室檢測的薄弱環(huán)節(jié),今年共有10份樣品的檢測值出現(xiàn)較大偏差,其中有8份樣品在半定量項目上出現(xiàn)偏差,占偏差樣本總數(shù)的80%。這說明各省級實驗室仍需在精細化管理上下功夫,繼續(xù)完善檢測技術體系,提高半定量項目檢測的精確度。

4.4 本次實驗室檢測能力比對緊密結合了《2018年獸醫(yī)工作要點》[5]關于突出抓好幾個重要動物疫病防治的要求,設置了H7亞型禽流感病毒抗體檢測、口蹄疫病毒和塞內卡病毒鑒別檢測、布魯菌抗體檢測、豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測等4個檢測項目,達到了較好的效果。今后應繼續(xù)結合國家動物疫病防治計劃和凈化工作的要求,著重提高各省級獸醫(yī)實驗室在動物疫病防控一線的實戰(zhàn)能力。