沈學懷,張丹俊,劉 磊,潘曉成,趙瑞宏,胡曉苗,戴 銀,朱 林

(1.安徽省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所,安徽 合肥 230031;2.安徽省霍邱縣畜牧獸醫(yī)技術推廣站,安徽 霍邱 237400)

禽類疫病中絕大部分都存在原發(fā)或繼發(fā)的細菌感染,如果細菌性感染控制不良,可能引發(fā)機體的菌血癥或敗血癥,增加禽群的死淘率[1]。長期以來,由于畜牧業(yè)中抗生素的無序使用,使很多病原菌對抗生素的敏感性降低,耐藥甚至多重耐藥菌株的出現(xiàn),嚴重影響了獸醫(yī)臨床治療效果[2]。藥敏試驗是篩選敏感抗生素的有效方法,常規(guī)藥敏試驗需要把病原菌進行分離純化后再進行藥敏檢測,不但所需要的時間長,操作復雜,而且很多病禽可能同時感染兩種或兩種以上病原菌,在分離純化過程中容易發(fā)生漏檢,造成所選用抗生素不能同時控制多種病原菌。因此,在實際臨床病例中使用臨床樣品直接藥敏試驗能夠達到快速篩選出有效抗生素,達到減少盲目用藥,提高治療效果的目的[3]。本文對2015-2017年安徽地區(qū)送檢至安徽省獸醫(yī)臨床診斷中心的臨床樣品進行直接藥敏試驗,并對藥敏結果進行統(tǒng)計分析,旨在為安徽地區(qū)禽病防治過程中抗生素的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 禽源臨床病料 病料來源于2015-2017年安徽不同地區(qū)送檢至安徽省獸醫(yī)臨床診斷中心的365份病禽或病死禽(包括雞、鴨、鵝、鴿和孔雀等)樣品。

1.2 主要試劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和一次性培養(yǎng)皿,購自北京奧博星生物科技責任有限公司;阿莫西林(AMX)、氟苯尼考(FLO)、阿米卡星(AMK)、新霉素(NTL)、多西環(huán)素(DOX)、阿奇霉素(AZM)、慶大霉素(GEN)、左氧氟沙星(LEV)、頭孢噻肟(CTX)、磷霉素(FOS)等10種K-B藥敏紙片,均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 方法

1.3.1 臨床樣品的處理 對送檢的病禽或病死禽進行剖檢,無菌條件下采集具有明顯病變的部分肝臟、脾臟、氣囊、肺臟等組織器官。

1.3.2 臨床樣品的細菌培養(yǎng)和藥敏試驗 在超凈工作臺中直接用采集病變組織剖面在營養(yǎng)瓊脂板上進行涂板,并用玻璃棒涂布均勻,藥敏試驗按WHO提供的Kirby-Bauer紙片擴散方法操作。

1.3.3 結果判定 貼有藥敏紙片的營養(yǎng)瓊脂板在37℃條件下培養(yǎng)16～18 h后取出,以抑菌圈的大小作為評定臨床推薦用藥的依據(jù)。本文中“推薦用藥”和“首選藥物”是依據(jù)抗生素是否產生抑菌圈和抑菌圈的大小來判定,推薦用藥為可以產生抑菌圈的抗生素,首選藥物為產生抑菌圈最大的抗生素,并不是通常意義上按WHO標準所判定的敏感、中介或不敏。

2 結果

2.1 禽源臨床樣品的種屬來源分布如表1所示,2015-2017年送檢至診斷中心的365份禽病病例中,2015年有206例,2016年有103例,2017年為56例。種屬來源分布為雞源的占61.37%(224例),其次是鵝源和鴨源,分別為19.72%(72例)和15.34%(56例),其他禽種(鴿子、孔雀)占3.56%(共13例)。病例種屬的分布與安徽地區(qū)不同禽種養(yǎng)殖估摸有直接關系,其中水禽(鴨、鵝)所占的也較大(35.06%),這可能與水禽普遍采用散養(yǎng)模式,環(huán)境控制難度相對較大有關。

表1 2015-2017年送檢禽源臨床病料的種屬來源分布

2.2 禽源臨床樣品的藥敏結果

2.2.1 不同年份藥敏結果可用抗生素的種類數(shù)如圖1所示,2015-2017年送檢的禽病樣品藥敏結果以2種和3種可推薦抗生素為主,4種或4種以上可推薦抗生素的樣品比例明顯下降,最多只有6種可推薦藥物,并且只有1種可推薦抗生素樣品比例達到14.45%,說明禽源臨床樣品中的病原菌對多種抗生素具有耐藥性,實際臨床治療中可供選擇的抗生素種類有限,這可能也是很多臨床病例在沒有做藥敏試驗的情況下治療效果不理想的主要原因。

圖1 不同年份藥敏結果推薦抗生素的種類數(shù)

2.2.2 10種常用抗生素作為可推薦藥物和首選藥物的比例如表2所示,2015-2017年禽源臨床樣品藥敏試驗結果中常用的10種獸用抗生素作為推薦用藥的比例存在很大的差異,總體占比而言,頭孢噻肟在所有臨床樣品中作為可推薦藥物的比例最高,為70.14%,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,分別為60.27%和49.04%。阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素等作為可推薦藥物的比例占比均低于5%,其中阿莫西林的比例最低,僅為3.56%。不同年份間比較發(fā)現(xiàn),氟苯尼考、慶大霉素、左氧氟沙星和頭孢噻肟作為可推薦藥物的比例逐年升高,而阿莫西林、阿米卡星的比例逐年降低,這種規(guī)律性的變化可能與臨床樣品病原菌耐藥性的變化存在密切的聯(lián)系。2015-2017年10種抗生素在臨床樣品藥敏結果中作為首選藥物的比例如圖2所示,其中頭孢噻肟的比例最高,為38.36%,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,為別為30.96%和16.36%。

表2 10種常用抗生素在禽源臨床樣品藥敏試驗結果中作為可推薦藥物的比例/%

圖2 10種常用抗生素在禽源臨床樣品藥敏試驗結果中作為首選藥物的比例

3 討論

抗生素在治療人類感染性疾病、防治動物疫病、提高養(yǎng)殖效益以及保障公共衛(wèi)生安全中,發(fā)揮了重要作用,由于在治療人類和動物疾病中抗生素的長期大劑量使用,導致許多病原菌對常用抗生素的耐藥性逐漸增強,多重耐藥性問題日益嚴重[4-6]。近幾年,陸續(xù)有關于安徽地區(qū)禽源病原菌耐藥性的研究報道。白灝等[7]對江蘇和安徽禽致病性大腸桿菌進行耐藥性檢測,分離株對氨芐青霉素、頭孢噻吩、阿莫西林、洛美沙星、氯霉素、四環(huán)素和卡那霉素,耐藥性達到50%以上,頭孢他啶和頭孢吡肟的耐藥率最低,分別為7.14%和14.29%。賈雪波等[8]對山東、安徽2016年部分地區(qū)禽致病性大腸桿菌進行耐藥性檢測,結果表明,90%以上的菌株對包括紅霉素、新霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、復方新諾明和氨芐西林在內的抗生素耐藥;75%以上的分離菌株對壯觀霉素和頭孢曲松耐藥。査華等[9]報道,江蘇和安徽地區(qū)鵝源沙門菌對羧芐青霉素、氨芐西林、鏈霉素和磺胺異噁唑也具有很高的耐藥性,而對頭孢曲松、頭孢西丁和卡那霉素耐藥性較低。沈學懷等[10]對安徽地區(qū)禽源沙門菌分離菌耐藥性檢測,發(fā)現(xiàn)其對阿米卡星、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率均低于20%,而對氨芐西林、鏈霉素、大觀霉素、復方新諾明和多西環(huán)素耐藥率達50%以上。以上研究報道均顯示,安徽地區(qū)禽源病原菌存在較為嚴重的耐藥率和多重耐藥性,耐藥菌株的產生和耐藥性變化給獸醫(yī)臨床防治過程中抗生素的選擇帶來困擾。

在實際生產中,采用臨床樣品直接進行藥敏試驗是快速篩選有效抗生素的重要手段,其藥敏結果與常規(guī)分離純化病原菌后再進行藥敏試驗的檢測結果并沒有明顯差異[3]。本文就2015-2017年安徽部分地區(qū)禽源臨床樣品的直接藥敏試驗結果進行統(tǒng)計分析,結果顯示,在10種常用抗生素中以2、3種可推薦抗生素為主,最多有6種可推薦抗生素,只有1種可推薦抗生素比例達到14.45%,表明安徽地區(qū)禽源臨床樣品中的致病菌存在嚴重的多重耐藥性,這與已報道的研究結果一致。藥敏結果顯示,頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素在作為可推薦藥物和首選藥物的比例明顯高于其他抗生素,而阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素等作為可推薦藥物的比例占比均低于5%。這一結果與趙素華等[11]在2017年報道的對皖北地區(qū)禽源大腸桿菌的耐藥性分析結果基本一致。研究結果表明,細菌產生耐藥性與細菌本身的生物特性的改變、耐藥基因的產生和抗生素的使用等多種因素有關[5,12-14]。除此之外,本研究發(fā)現(xiàn),氟苯尼考、慶大霉素、左氧氟沙星和頭孢噻肟作為可推薦藥物的比例逐年升高,而阿莫西林、阿米卡星的比例逐年降低,這種規(guī)律性變化趨勢是否有持續(xù)性,又是否與本地區(qū)抗生素的使用、細菌耐藥基因的產生和遷移有關,都值得進一步觀察和分析研究。

4 小結

本研究分析結果表明,安徽地區(qū)禽源臨床樣品中的病原菌具有很強的耐藥率和多重耐藥性,在10種常用抗生素中以2、3種可推薦抗生素為主,推薦和首選的抗生素為頭孢噻肟,其次是阿米卡星和多西環(huán)素,不推薦使用阿莫西林、氟苯尼考和慶大霉素。本分析結果對安徽地區(qū)禽源臨床病原菌防治用藥的選擇具有重要的參考意義。