范瑞娟，劉雅琴，張 琇

（北方民族大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，寧夏特殊生境微生物資源開發(fā)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家民委發(fā)酵釀造工程生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，銀川 750021）

石油對土壤造成的污染一直是國內(nèi)外所關(guān)注的環(huán)境問題，由于石油化工行業(yè)往往產(chǎn)生大量高鹽度廢水，因而石油污染土壤常伴有鹽堿化的發(fā)生。作為石油中的一類重要成分，多環(huán)芳烴（Polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）具有低水溶性、高毒性、生物蓄積性、半揮發(fā)性和難降解性，有些成分有“三致”效應(yīng)，其中16種PAHs被美國環(huán)保局（US EPA）列為“優(yōu)先控制污染物”[1]。一些具有4個及4個以上苯環(huán)數(shù)的高分子量的PAHs在土壤中的半衰期達(dá)數(shù)十年甚至更長[2]。PAHs在高鹽度環(huán)境中的疏水性更強(qiáng)，從而延長了在環(huán)境中的半衰期，對生態(tài)環(huán)境會造成更大的危害[3]。

微生物修復(fù)在PAHs去除中起著重要作用。微生物作為生物修復(fù)的功能主體，其種類、群落組成、活性、數(shù)量等對有機(jī)物的降解效率和生物利用途徑起著決定性作用[4]?？山到釶AHs的微生物包括細(xì)菌、真菌和藻類，其中細(xì)菌在大多數(shù)環(huán)境中發(fā)揮主要作用。此外，PAHs的生物降解很大程度上還取決于其自身分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性[5]。對于低環(huán)PAHs，即一些2、3環(huán)的PAHs，如萘、蒽、菲、芴等，此類PAHs分子結(jié)構(gòu)簡單，具有較高的水溶性，因此容易從自然界分離得到適用的降解菌株[6]。對于4環(huán)及4環(huán)以上的PAHs，由于其分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜、電子云密度高、很難被氧化，而且水溶性差、熱穩(wěn)定性強(qiáng)、固-水分配系數(shù)高，較難分離得到適用的降解菌[7]。在實(shí)際應(yīng)用中，由于污染物性質(zhì)、土壤成分不同，導(dǎo)致外源微生物對PAHs的降解率偏低。如非嗜鹽微生物不適合于高鹽環(huán)境中的PAHs生物降解，這是因?yàn)楦啕}度可能會引起非嗜鹽微生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)構(gòu)象變形，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的活性，抑制一些重要的生物反應(yīng)；高鹽度也可能使環(huán)境中氧濃度減少，從而降低微生物代謝活性[8]。一般根據(jù)適宜生長的鹽度范圍，可將嗜鹽菌分為輕度嗜鹽菌、中度嗜鹽菌和極端嗜鹽菌。其中，適宜鹽度為1%～3%的菌株為輕度嗜鹽菌，3%～15%為中度嗜鹽菌，大于15%為極端嗜鹽菌[9]。目前，從石油污染土壤、工業(yè)含鹽廢水、海水和海洋沉積物中已分離出了一些PAHs嗜鹽菌，但大部分嗜鹽菌只能以低環(huán)PAHs為唯一碳源和氮源生長。Hedlund等[10]從海灣沉積物中篩選出兩株能以萘為唯一碳源和能源生長的嗜鹽菌NAG-2N-113和NAG-2N-26，經(jīng)生態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性及16S rDNA比對表明其屬于Neptunomonas naphthovorans，兩株菌可在 pH 6.5～8.5以及鹽度1.75%～7.0%的范圍內(nèi)生長。Cui等[11]以高鹽培養(yǎng)基馴化、分離獲得一株嗜鹽菌AD-3，經(jīng)16Sr DNA比對鑒定為Martelella，該菌能在3%的鹽度下，6 d內(nèi)將200 mg·L-1的菲完全降解，但其不能利用熒蒽、芘及苯并芘等高環(huán)PAHs。厲闐等[12]研究表明擬香味菌Y6（Myroides odoratimimus strain）能以硝基苯為單一碳源和氮源進(jìn)行代謝，在硝基苯初始含量200 mg·L-1和NaCl含量7%的條件下，最佳降解溫度28℃，pH值6.0，D600=1，168 h硝基苯降解率達(dá)到67.5%。Wang等[13]從石油污染鹽土中分離出一個在10%的鹽度條件下能以菲為唯一碳源生長的菌團(tuán)CY-1，其主要以中度嗜鹽菌Marinobacter為主。已分離到的能夠在鹽環(huán)境中降解高環(huán)PAHs的菌株還比較少，主要集中在Bacillus、Halomonas、Cycloclasticus、Mycobacterium、Pseudoalteromonas、Thalassospirasp等菌屬[14-16]。因此，針對PAHs污染鹽堿土壤，必須開發(fā)嗜鹽堿微生物資源以保證高鹽堿環(huán)境中PAHs的降解效果。

本研究以芘為唯一碳源和能源，從長期受石油污染的油田土壤中篩選出可利用高環(huán)PAHs的嗜鹽堿菌，并從降解能力、耐鹽堿特性、不同鹽堿條件對降解效率的影響等方面對其進(jìn)行了初步研究，對豐富降解高環(huán)PAHs的微生物資源和指導(dǎo)鹽堿環(huán)境中PAHs污染土壤的微生物修復(fù)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 石油污染土壤

石油污染土壤采自延長油田子北采油廠。

1.1.2 污染物

以芘和苯并[a]芘分別作為4環(huán)和5環(huán)PAHs的代表性污染物。純度均＞98%，購自上海笛柏生物科技有限公司。

芘和苯并[a]芘母液的配制:以丙酮為溶劑，分別配制 5 g·L-1和 0.5 g·L-1的芘的丙酮溶液和苯并[a]芘的丙酮溶液，并用已滅菌（121℃，20 min）的0.22μm有機(jī)濾膜過濾除菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 培養(yǎng)基

鹽度為5%的各培養(yǎng)基的配制方法如下:

無機(jī)鹽培養(yǎng)液:（NH4）2SO41 g、K2HPO40.8 g、KH2PO40.2 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、CaCl2·2H2O 0.1 g、葡萄糖 0.05 g、NaCl 43.5 g、MgCl2·6H2O 6.5 g和微量元素 FeSO4·7H2O 0.012 g、MnSO4·7H2O 0.003 g、ZnSO4·7H2O 0.003 g、CoSO4· 7H2O 0.001 g、（NH4）6Mo7O24·4H2O 0.001 g，蒸餾水定容至1 L，調(diào)節(jié)pH為8.6，121℃滅菌20 min。

無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基:上述無機(jī)鹽培養(yǎng)液中加入2%的瓊脂，pH 8.6，121℃滅菌20 min，制作培養(yǎng)基平板，待其凝固后取0.5 mL已過濾除菌的芘母液（5 g·L-1）涂于表面，待丙酮揮發(fā)后形成一層芘的固體膜。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 43.5 g，MgCl2·6H2O 6.5 g，蒸餾水定容至1 L，pH 8.6。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 嗜鹽堿高環(huán)PAHs降解菌的富集、純化

以芘為唯一碳源，采用定時定量轉(zhuǎn)接、逐步提高碳源濃度的方法對PAHs降解菌進(jìn)行富集。稱取5 g石油污染土壤，加入到45 mL無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，加入0.25 mL芘母液使芘的終濃度為25 mg·L-1，30℃恒溫?fù)u床避光富集培養(yǎng)5 d；取菌液5 mL，加入到45 mL新鮮的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，加入0.5 mL芘母液，使芘的終濃度為50 mg·L-1，30℃恒溫?fù)u床避光富集培養(yǎng)5 d。采用同樣的方法，將芘的濃度依次提高至75、100 mg·L-1，并分別在30℃恒溫?fù)u床避光富集培養(yǎng)5 d。

將最后一次富集培養(yǎng)的菌液用無機(jī)鹽培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，取10-1、10-2、10-3稀釋液各100 μL涂布于無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)至有肉眼可見的明顯菌落，根據(jù)菌落外部形態(tài)，挑取其中生長旺盛的單菌落進(jìn)一步于無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基平板中純化，如此反復(fù)多次，直至分離出純菌。再將該菌落接種于含芘的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中培養(yǎng)以驗(yàn)證其是否能以芘為唯一碳源生長。純化后的菌種保存于鹽度為5%的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面中。

1.2.2 菌株耐鹽堿特性分析

通過分析各菌株在pH為8.6時不同鹽度條件以及鹽度為5%時不同pH環(huán)境中的生長特性，研究其耐鹽堿特性。在無機(jī)鹽培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上調(diào)整鹽濃度（0、1%、5%、8%、10%、15%、20%）和pH（5、6、7、8、9、10、11），121℃滅菌20 min，冷卻后加入已過濾除菌的芘母液，使其終濃度為50 mg·L-1。將已純化的菌分別接入不同鹽度和pH的培養(yǎng)液中，30℃、140 r·min-1振蕩培養(yǎng)，3 d后測定降解菌生長情況（OD600nm）。每個處理設(shè)3個重復(fù)。

1.2.3 分離菌株對PAHs降解能力分析

菌懸液的制備:將芘母液過濾除菌，取1 mL添加到100 mL無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，使芘的終濃度為50 mg·L-1，將其放置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，使丙酮揮發(fā)盡。無菌條件下，挑取已純化的菌株，接種于含芘的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，30 ℃、140 r·min-1培養(yǎng)7 d，5000 r·min-1離心5 min，棄掉上清液，用適量新鮮無機(jī)鹽培養(yǎng)液重懸，再次離心、重懸，獲得OD600nm值約0.25的菌懸液。

各菌株對芘和苯并[a]芘的降解:向含有芘（初始濃度為50 mg·L-1）和苯并[a]芘（初始濃度為5 mg·L-1）的5 mL無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，接種1 mL菌懸液，30℃，140 r·min-1避光振蕩培養(yǎng)，分別測定0 d和7 d時芘和苯并[a]芘的含量。每處理設(shè)3個重復(fù)，以不接種菌液為對照組。

1.2.4 不同鹽度和pH條件下各菌株對PAHs降解特性分析

菌懸液的制備同1.2.3。

在無機(jī)鹽培養(yǎng)液的基礎(chǔ)上調(diào)整鹽濃度（0、1%、5%、8%、10%、15%、20%）和pH（5、6、7、8、9、10、11），121℃滅菌20 min，冷卻后加入已過濾除菌的芘母液，使其終濃度為100 mg·L-1。置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，使丙酮揮發(fā)盡。取1 mL菌懸液接種至5 mL該培養(yǎng)液中，30 ℃，140 r·min-1避光振蕩培養(yǎng)，分別測定0 d和7 d時芘的含量。

1.3 分析方法

1.3.1 菌株鑒定

對篩選出的菌株進(jìn)行菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)的觀察以及生理生化試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、亞硝酸鹽反應(yīng)試驗(yàn)、明膠水解試驗(yàn)、吐溫80試驗(yàn)，接觸酶試驗(yàn)和淀粉水解試驗(yàn)等），其方法均參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[17]。

將篩選出的高效菌株交由華大基因科技有限公司進(jìn)行16S rRNA序列測定，將序列信息輸入NCBI（www.ncbi.nlm.nih.gov）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST分析，挑選模式菌種序列，利用MEGA軟件和Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)育樹根據(jù)鄰位法建立，所取bootstraps值為 1000，F(xiàn)lavobacterium antarcticumDSM 19726（AT1026）為外源菌株。

1.3.2 溶液中芘和苯并[a]芘含量的測定

向反應(yīng)體系中加入10 mL二氯甲烷，180 r·min-1振蕩萃取5 min，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，靜置，將有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉（400℃，2～3 h）過濾除水，萃取2次，合并萃取液，待溶劑揮干，用色譜純乙腈定容至1 mL。采用HPLC法（Agilent-1220高效液相色譜儀）測定。色譜條件:進(jìn)樣體積10μL；柱溫25℃；流速1 mL·min-1；流動相為水和乙腈；流動相梯度比例為0 min，10∶90 水/乙腈；1 min，100%乙腈；9 min，10∶90水/乙腈；VWD檢測波長:254 nm。用外標(biāo)法以峰面積對目標(biāo)化合物進(jìn)行定量。通過下式計(jì)算芘或苯并[a]芘的降解率:

式中:C0為0 d時所測定的芘或苯并[a]芘的實(shí)際濃度；Ct為7 d后芘或苯并[a]芘的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜鹽堿高環(huán)PAHs降解菌的分離鑒定

以芘為唯一碳源和能源，通過逐步提高碳源濃度的方法，在含鹽量為5%、pH為8.6的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中逐漸富集降解菌，培養(yǎng)液中懸浮的芘化合物逐步減少直至消失，同時，培養(yǎng)液明顯變渾濁，說明微生物利用了底物芘，并大量繁殖。在表面涂有芘的無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上，經(jīng)轉(zhuǎn)接5代后，分離出6株形狀、大小、顏色等不同，且能在菌落周圍產(chǎn)生透明圈的菌株，編號為 SYP-1、SYP-2、SYP-3、SYP-4、SYP-5、SYP-11，其在無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后的形態(tài)特征如表1所示。

通過生理生化特征分析（表2），結(jié)合16S rRNA基因序列對比（表3），對所分離的菌株進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，該6株菌歸為3個不同的屬。其中，SYP-1與代爾夫特菌屬（Delftiasp.）中的多個菌種基因序列相似性達(dá)99%以上，SYP-2、SYP-4和SYP-11與海桿菌屬（Marinobactersp.）中的多個菌種基因序列相似性達(dá)99%以上，SYP-3和SYP-5與芽孢桿菌屬（Bacillussp.）中的多個菌種基因序列相似性達(dá)99%以上。通過與基因庫中典型模式菌株序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1），分析了各菌株的進(jìn)化地位，進(jìn)一步確定，SYP-1為Delftiasp.屬，SYP-2、SYP-4和 SYP-11為Marinobactersp.屬，SYP-3和SYP-5為Bacillussp.屬。

表1 分離菌株形態(tài)特征Table 1 Morphological characteristics of isolated strains

2.2 分離菌株的耐鹽堿特性

通過改變無機(jī)鹽培養(yǎng)液的鹽度和pH值，測試了所篩菌株的耐鹽堿特性，結(jié)果如表4所示。菌株SYP-1、SYP-2、SYP-3和SYP-11的鹽度生長范圍為0～20%，菌株SYP-4和SYP-5的鹽度生長范圍為0～15%。SYP-1、SYP-2和SYP-3的最適生長鹽度達(dá)5%，SYP-4、SYP-5和SYP-11的最適生長鹽度達(dá)8%。6株菌均可在pH為5～10的環(huán)境中生長，菌株SYP-1和SYP-5的最適生長pH為10，菌株SYP-2、SYP-3、SYP-4和SYP-11的最適生長pH為9。

表2 分離菌株的生理生化特性Table 2 Physiological-biochemical characteristics of isolated strains

表3 16S rRNA基因序列對比結(jié)果Table 3 Alignment results of 16S rRNA sequences

圖1 基于16S rRNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 1 Phylogenetic tree of 16S rRNA sequences

表4 分離菌株的耐鹽堿特性Table 4 Salt and alkali resistance properties of the isolated strains

2.3 各菌株對芘和苯并[a]芘的降解能力

將各菌株接種到分別含有芘（50 mg·L-1）和苯并[a]芘（5 mg·L-1）的無機(jī)鹽培養(yǎng)液中，研究其對PAHs的降解情況。結(jié)果表明（圖2），7 d后，各菌株對芘和苯并[a]芘均有不同程度的降解，其中SYP-3對芘的降解效率最高，達(dá)到68.8%；其次分別為SYP-2和SYP-4，可使芘的降解率達(dá)52.3%和51.0%，SYP-1、SYP-11和SYP-5可使芘的降解率分別達(dá)48.1%、42.7%和42.3%；SYP-11對苯并[a]芘的降解效率最高，達(dá)到49.4%；其次分別為SYP-2和SYP-4，使苯并[a]芘的降解率達(dá)44.2%和41.4%。SYP-3、SYP-5和SYP-1可使苯并[a]芘的降解率分別達(dá)34.5%、27.7%和27.0%。

2.4 不同鹽度和pH條件下各菌株對PAHs的降解特性

綜合不同菌株對芘和苯并[a]芘的降解能力，選用SYP-2、SYP-3、SYP-4和SYP-11這4株對芘和苯并[a]芘菌具有較高降解能力的菌株，研究了不同鹽度和pH條件下其對芘降解效率的影響。

2.4.1 不同鹽度條件下菌株對PAHs降解特性

在芘濃度為50 mg·L-1，pH為8.6，鹽度為0～15%的范圍內(nèi)，菌株SYP-2、SYP-3、SYP-4和SYP-11對芘的降解效率如圖3所示?？梢钥闯?，4株菌對芘降解具廣泛的鹽度范圍和較高的耐鹽性。菌株SYP-2在5%的鹽度條件下對芘的降解率達(dá)到80.1%；SYP-3在1%～15%的鹽度條件下對芘的降解效率達(dá)58.8%～68.8%；SYP-4在0～10%的鹽度條件下對芘的降解效率沒有顯著差異，在該鹽度范圍內(nèi)，芘降解率達(dá)到57.3%～68.8%；SYP-11在1%～10%的鹽度范圍內(nèi)對芘的降解效率無明顯差異，該鹽度條件下芘的降解率達(dá)66.2%～76.4%。

2.4.2 不同pH條件下菌株對PAHs的降解特性

在芘濃度為50 mg·L-1，鹽度為5%，pH為5～10的范圍內(nèi)，菌株SYP-2、SYP-3、SYP-4和SYP-11對芘的降解效率如圖4所示?？梢钥闯?，在5～10的pH范圍內(nèi)，4株菌對芘均具有良好的降解效果。具體來看，芘的最大降解率主要集中在pH 8～9的范圍內(nèi)，其中菌株SYP-2、SYP-3和SYP-4在pH為9時對芘的降解率分別達(dá)59.9%、64.9%和65.5%；SYP-11在pH為8時對芘的降解率達(dá)69.6%。

圖2 各菌株對芘和苯并[a]芘的降解能力Figure 2 Degradation effects of different strains on pyrene and benzo（a）pyrene

圖3 不同鹽度條件下菌株對芘的降解效果Figure 3 Degradation effects of strains on pyrene under different salinity conditions

圖4 不同pH條件下菌株對芘的降解效果Figure 4 Degradation effects of strains on pyrene under different pH conditions

3 討論

目前，已分離到的能夠在鹽堿環(huán)境中降解PAHs尤其是高環(huán)PAHs的菌株還比較少。因而，有必要針對鹽堿環(huán)境中的PAHs，開發(fā)嗜鹽堿微生物資源以保證其降解效果。Wu等[18]從石化污水排放點(diǎn)分離出一株代爾夫特菌Delftia lacustrisstrain LZ-C，研究發(fā)現(xiàn)該菌株可降解萘酚、萘、2-甲基萘和甲苯等多環(huán)芳烴，并可在2.5 mol·L-1的鹽度下生長。李倩等[19]從黃海沉積物中分離到一株石油烴降解菌Marinobactersp.PY97S，該菌株能降解多種多環(huán)芳烴和烷烴，其NaCl濃度生長范圍是0～10%（最適為0），初始pH生長范圍為6～9（最適為7）。Zhou等[20]從黃海沿岸土壤中分離出的嗜鹽菌株Thalassospirasp.strain TSL5-1可在0.5%～19.5%的鹽度范圍內(nèi)以芘為唯一碳源生長。本研究所篩選的6株P(guān)AHs降解菌中，4株菌（SYP-1、SYP-2、SYP-3、SYP-11）的可生長鹽度范圍為0～20%，2株菌（SYP-4、SYP-5）的可生長鹽度范圍為0～15%，它們的最適生長鹽度達(dá)5%～8%，6株菌均可在pH為5～10的環(huán)境中生長，最適生長pH達(dá)9～10。相較而言，本研究所篩選的6株降解菌均具有較寬的耐鹽堿譜和較高的耐鹽堿性。

鹽度和pH是影響PAHs降解菌降解效率的重要因素[21]。有研究表明，當(dāng)鹽濃度高于3%，pH大于9時，非嗜鹽堿微生物的代謝會受到限制，使其生物修復(fù)效率明顯降低，甚至喪失修復(fù)能力[22]。Minai等[23]研究表明，石油污染土壤中微生物在1.0%的鹽度下對菲、蒽和芘的降解率最高，當(dāng)超過最適鹽度1%時，PAHs的降解率隨鹽度的增加而降低。Arulazhagan等[24]從鹽制造公司的工業(yè)污泥中富集出可在鹽環(huán)境中以菲為唯一碳源的菌團(tuán)，當(dāng)以菲為苯并[e]芘的共代謝底物時，NaCl濃度為30 g·L-1的條件下，該菌團(tuán)7 d內(nèi)可將苯并[e]芘降解80%，5 d內(nèi)可將菲降解99%；當(dāng)NaCl濃度提高至60 g·L-1時，苯并[e]芘和菲的降解率明顯降低（苯并[e]芘10 d的降解率為65%，菲8 d的降解率為97%）；當(dāng)NaCl濃度提高至90 g·L-1時，菲和苯并[e]芘6 d的降解率分別降低了30.3%和9%。也有研究表明，微生物在中性條件下對PAHs降解效果最佳[25-26]。顧平等[27]從長期受石油烴和PAHs污染的土壤中分離獲得一株能以苯并[a]芘為唯一碳源的降解菌株BB-1，研究發(fā)現(xiàn)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿條件對該菌株的生長均具有抑制作用，而當(dāng)培養(yǎng)基初始pH值為7時，其對苯并[a]芘的降解率最大。本文通過研究不同鹽度和pH條件下4株菌（SYP-2、SYP-3、SYP-4、SYP-11）對芘降解效率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，盡管不同鹽度和pH條件下4株菌對芘的降解效果存在一定差異，但無論在0～15%的鹽度范圍內(nèi)還是在5～10的pH范圍內(nèi)，4株菌對芘均具有良好的降解效果，表明所篩選菌株對芘的降解也具有廣泛的鹽度和pH范圍以及較高的耐鹽堿性。

本研究所分離的6株降解菌，在5%的鹽度下，除對4環(huán)的芘具有良好的降解作用外，對5環(huán)的苯并[a]芘也具有較高的降解能力，表明在高鹽堿的脅迫作用下，所分離菌株對降解4環(huán)以上高環(huán)PAHs具有很大潛力，可應(yīng)用到高環(huán)PAHs污染鹽堿土壤的修復(fù)中。Cui等[28]研究表明，菌株Marinobactersp.D15-8W幾乎不能降解芘、熒蒽等，但其與CycloclasticusPY97M組成的復(fù)合菌團(tuán)在21 d內(nèi)可分別將初始濃度為20 mg·L-1的芘和熒蒽分別降解76%和83%。Deng等[29]從大亞灣石油污染海水中分離獲得一株菌株HZ01，鑒定為Achromobactersp.，其在pH 7.0、NaCl濃度為3%、溫度28℃的條件下，30 d對蒽、菲和芘的降解率分別為29.8%、50.6%和38.4%。王慧等[15]從石油污染土壤中富集分離出的嗜鹽菌Thalassospirasp.strain TSL5-2，在5%鹽度下，25 d內(nèi)，對菲、芘、熒蒽（初始質(zhì)量濃度均為20 mg·L-1）、苯并蒽（初始質(zhì)量濃度為8 mg·L-1）的降解率分別為100%、53.3%、60%、18.1%，但不能降解苯并芘。本研究所分離的菌株，在5%的鹽度下，7 d內(nèi)可使初始濃度為50 mg·L-1的芘降解率達(dá)42.3%～68.8%，使初始濃度為5 mg·L-1的苯并[a]芘降解率達(dá)27.0%～49.4%。從降解效率看，所分離的菌株對芘（初始濃度為50 mg·L-1）的降解能力明顯高于苯并[a]芘（初始濃度為5 mg·L-1），這是由于PAHs環(huán)的數(shù)量與排列特征都影響其穩(wěn)定性，高環(huán)PAHs在環(huán)境中的半衰期遠(yuǎn)大于低環(huán)PAHs[30]，隨著多環(huán)芳烴環(huán)數(shù)增加，其疏水性也隨之增強(qiáng)、生物毒性更大、生物可降解性減弱[31]。

本研究結(jié)果為豐富降解高環(huán)PAHs的微生物資源和指導(dǎo)高環(huán)PAHs污染鹽堿土壤的微生物修復(fù)具有重要意義。

4 結(jié)論

（1）從延長油田石油污染土壤中分離出6株能以芘為唯一碳源和能源的嗜鹽堿菌，該6株菌分屬于3個不同菌屬，即代爾夫特菌屬（Delftiasp.）、海桿菌屬（Marinobactersp.）和芽孢桿菌屬（Bacillussp.）。

（2）所分離菌株對降解4環(huán)以上高環(huán)PAHs具有很大潛力，且6株降解菌對芘的降解具有廣泛的鹽度和pH范圍以及較高的耐鹽堿性。