王博，張春紅，林欣大

1. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院，浙江 杭州 310053；2. 中國計量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310018

Cd2+和Pb2+作為環(huán)境中主要的重金屬污染物，它們廣泛存在于農(nóng)作物及地下水中且蓄積性強（He et al.，2013）。二者常通過消化及呼吸系統(tǒng)進入人體，并在肝臟及腎臟中積累，引起肺部、腎臟和心血管系統(tǒng)病變（Roggeman et al.，2014；Llobet et al.，2013）。大約 95%的 Pb2+沉積于骨骼中，可引起血紅蛋白紊亂并損傷神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟以及生殖器官，并誘發(fā)心血管、神經(jīng)、生殖以及消化系統(tǒng)疾病的產(chǎn)生（Madsen et al.，2013；Wang et al.，2012；Xu et al.，2016；Chandler et al.，2016）。生物體持續(xù)暴露在Cd2+污染環(huán)境中會導(dǎo)致其在體內(nèi)積累，并影響發(fā)育、生存及繁殖力（Annabi et al.，2012；Rudel et al.，2013；Nawab et al.，2015）。

MTNs蛋白包含的巰基基團，能與重金屬結(jié)合從而達到解毒作用（Li et al.，2011；Chiaverini et al.，2010；Koivula et al.，2010）。體內(nèi)實驗表明，Cd2+結(jié)合MTNs蛋白并以非毒性形態(tài)沉積（Jensen et al.，2010；Yang et al.，2011）。過去有研究表明，抗氧化作用在長期 Cd2+誘導(dǎo)的肝臟及腎臟毒性疾病中扮演著重要角色（Li et al.，2011）。研究發(fā)現(xiàn)在Cd2+積累組織中MTNs表達量很高（Xu et al.，2016；Jihen et al.，2009；Liu et al.，2009），MTNs作為活性氧清除劑可清除生物體內(nèi)活性氧自由基（ROS）（Li et al.，2011；Saboli? et al.，2010），當(dāng) MTNs蛋白缺失時重金屬對生物體帶來的毒性作用可能會進一步增強。Pb2+在生物體內(nèi)以磷酸氫鹽的形式存在，它對巰基基團具有高度親和性。生物體內(nèi)積累的Pb2+能夠抑制生物體生長并提高致死率，對 DNA造成氧化損傷，通過促進 ROS的形成破壞脂質(zhì)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（Lin et al.，2015；Miranda et al.，2012；Pan et al.，2011）。當(dāng)給小鼠飼喂含 Pb2+溶液后，Pb2+能直接降低紅細胞中的血銅蛋白超氧化物歧化酶SOD活性（Lee et al.，2011）。此外Pb2+能通過前氧化損傷以及打破細胞抗氧化平衡最終引起機體氧化損傷（Jin et al.，2013）。Gsts（glutathione S-transferase，GST）是一系列能夠保護血紅蛋白因過氧化氫和 ROS造成氧化損傷的酶，它們能夠結(jié)合包括重金屬離子在內(nèi)的外部有毒化合物，通過將其從生物體內(nèi)排除，達到中和、解毒和保護機體免受氧化性損傷的作用（鄭雙艷等，2019）。

Cd2+和Pb2+在環(huán)境中通常以復(fù)雜化合物形式存在，盡管這兩種重金屬對生物體中具有不同影響且各自具有其特有的毒作用機制，然而當(dāng)它們同時存在于機體內(nèi)常會表現(xiàn)出拮抗或協(xié)同疊加兩種不同效應(yīng)。例如當(dāng)小鼠在二者的共同作用下，相比單獨暴露于同等濃度的Cd2+或Pb2+中反而表現(xiàn)出較低毒性（Ge et al.，2011；Xu et al.，2012）。研究小鼠發(fā)現(xiàn)腎臟中存在的Cd2+能有效降低Pb2+的毒性，并減少主要功能性酶的活性（Chiaverini et al.，2010）。二者聯(lián)合后對肝臟的氧化損傷相比同樣濃度的Cd2+單獨存在下反而更低，即這兩種重金屬在小鼠中發(fā)揮了拮抗作用（Chereddy et al.，2011；Karwowska et al.，2012；Alslaibi et al.，2014）。然而有時Cd2+和Pb2+卻表現(xiàn)出協(xié)同疊加效應(yīng)，例如二者聯(lián)合作用后，能顯著破壞小鼠睪丸支持細胞線粒體，從而對細胞結(jié)構(gòu)完整性造成影響；此外二者聯(lián)合還能顯著降低小鼠大腦干重，引起大腦氧化損傷，二者通過聯(lián)合脅迫作用使得毒性作用大大加強（Garcia et al.，2004；Antonio et al.，2003；Bizarro et al.，2013；Mahaffey et al.，1977；Zhang et al.，2009）。

黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）作為模式生物基因被研究得最為透徹，其短暫的生命周期和大量的基因工具使得研究更方便，它的基因與人類許多疾病基因具有同源性（萬永奇等，2016），因此在本研究中，對果蠅分別飼喂 Cd2+、Pb2+和Cd2++Pb2+，并通過測定其化蛹率和羽化率、抗氧化性、MTNs和Gst基因的表達水平，從而探究重金屬Cd2+和Pb2+及二者聯(lián)合對黑腹果蠅的作用效果，以此揭示二者的毒作用機理，為進一步研究及評估Cd2+和Pb2+的毒性機理提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

野生型黑腹果蠅（Oregon R，OR），培養(yǎng)溫度為 25 ℃，相對濕度為60%，光周期為晝∶夜=14∶10。基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方：每100 mL水中包含11.3%玉米粉，1%瓊脂，8.6%蔗糖，1%酵母和 1%丙酸，培養(yǎng)基pH為5.5。葡萄汁培養(yǎng)基配方：每30 mL水中包含蔗糖2.2 g，瓊脂1.4 g，冰醋酸1 mL，葡萄汁10 mL。

1.2 方法

1.2.1 Cd2+/Pb2+處理

稱取CdCl2和Pb(NO3)2粉末，分別配制成濃度為 0.5 mol·L-1和 3 mmol·L-1的母液，用移液器吸取不同體積母液，將 Cd2+/Pb2+或 Cd2++Pb2+母液溶解在標(biāo)準(zhǔn)玉米糊培養(yǎng)基中，根據(jù)課題組先前的預(yù)實驗結(jié)果，分別配制 0.05、0.1、0.3、0.5 mmol·L-1的Cd2+處理食物（下文簡寫為Cd0.05、Cd0.1、Cd0.03和 Cd0.5），0.2、0.5、1.5、2.9 mmol·L-1的 Pb2+處理食物（下文簡寫為Pb0.2、Pb0.5、Pb1.5和Pb2.9），以及 0.05 mmol·L-1Cd2++0.2 mmol·L-1Pb2+，0.1 mmol·L-1Cd2++0.5 mmol·L-1Pb2+，0.3 mmol·L-1Cd2++1.5 mmol·L-1Pb2+， 0.5 mmol·L-1Cd2++2.9 mmol·L-1Pb2+的 Cd2++Pb2+聯(lián)合處理食物（下文簡寫為 Cd0.05+Pb0.2、Cd0.1+Pb0.5、Cd0.03+Pb1.5和Cd0.5+Pb2.9）。對照組為不含Cd2+/Pb2+的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（下文簡寫為CK）。將果蠅成蟲放置在葡萄汁培養(yǎng)基中過夜產(chǎn)卵，收集培養(yǎng)基中孵化8 h內(nèi)的1齡幼蟲，轉(zhuǎn)移至基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及包含不同濃度Cd2+/Pb2+的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

1.2.2 原子吸收實驗

收集 Cd2+/Pb2+處理組和對照組中羽化 3 d成蟲，通過原子吸收光譜儀（PerkinElmer700，USA）測定果蠅中Cd2+/Pb2+含量。用去離子水漂洗果蠅蟲體，每次5 min，共3次。之后用63%的濃HNO3和 30% H2O2對果蠅進行微波消解，消解溫度為37 ℃，消解時間2 h。每組實驗包含雌雄果蠅成蟲各5只，共設(shè)置3個重復(fù)。測定Cd2+和Pb2+的條件如下：

Cd2+（Flame：C2H2∶O2=17 L·min-1∶2 L·min-1；slit：0.7 nm；Light energy：39；Micro-current：4 mA；Wavelength：228.3；Light：C-HCL；Lamp：Cd2+）；

Pb2+（Flame：C2H2∶O2=17 L·min-1∶2 L·min-1；slit：0.7 nm；Light energy：58；Micro-current：10 mA；Wavelength：283.3；Light：C-HCL；Lamp：Pb2+）。

1.2.3 化蛹和羽化率試驗

將 1齡幼蟲從葡萄汁培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移至不同Cd2+/Pb2+處理以及對照培養(yǎng)基中，每日觀察果蠅的化蛹情況并記錄羽化數(shù)量，計算化蛹率和羽化率。試驗共設(shè)置 4組重復(fù)，每個重復(fù)包含20只果蠅。

1.2.4 超氧化物歧化酶（SOD）活性、過氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量測定

取 20只果蠅成蟲研磨制成組織勻漿，根據(jù)Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度。采用試劑盒（南京建成生物工程有限公司）上的方法測定 SOD、CAT活性以及MDA含量。每一組設(shè)置10個重復(fù)。酶活性計算方式如下：

式中，OD為樣品在可見分光光度計550 nm處的吸光度，OD1為對照OD值，OD2為測定OD值，OD3為標(biāo)準(zhǔn)OD值，OD4為空白OD值；V1為反應(yīng)液總體積；V2為取樣量；ρ1為待測樣本蛋白濃度，mg·mL-1；ρ2 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，10 nmol·mL-1。

1.2.5 QRT-PCR

通過黑腹果蠅基因組數(shù)據(jù)庫（http://flybase.org/），采用 BLAST的方法篩選出MTN及其他基因序列，并根據(jù)以上查找的序列設(shè)計用于熒光定量PCR的引物（表1）。根據(jù)說明書上的方法采用RNAiso Plus試劑盒（Takara，Dalian，China）提取CK及Cd0.5+Pb2.9處理組7日及28日齡成蟲總 RNA，以 RNA為模板采用SuperScriptTM II RTase（TaKaRa，Dalian，China）試劑盒反轉(zhuǎn)錄cDNA。通過熒光定量PCR和相對定量2-△△Ct法檢測不同基因在不同時間段的相對表達量（Livak et al.，2001）。PCR 程序為第一階段95 ℃預(yù)變性1 min；第二階段95 ℃保持10 s，60 ℃保持25 s，45個循環(huán)。

1.2.6 統(tǒng)計分析

運用 Excel對以上各實驗數(shù)據(jù)進行整理及作圖。運用SPSS對 SOD、CAT、MDA和熒光定量PCR數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-way ANOVA）以及LSD多重比較，采用獨立方差t檢驗分析重金屬含量數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 果蠅中Cd2+/ Pb2+含量

由圖1可知，在單獨Cd2+和Pb2+處理下，隨著培養(yǎng)基中Cd2+/Pb2+濃度的上升果蠅體內(nèi)Cd2+及Pb2+含量隨之上升。例如Cd0.05處理下果蠅體內(nèi)平均Cd2+積累量為0.02 μg左右，然而在Cd0.5處理下，果蠅體內(nèi)Cd2+積累量上升至0.2 μg左右；同樣地，在Pb0.2處理下果蠅體內(nèi)Pb2+含量約為0.15 μg，當(dāng)Pb2.9處理下果蠅體內(nèi)Pb2+積累量上升至0.7 μg左右。由此表明，果蠅中Cd2+和Pb2+的積累量具有劑量依賴性。此外當(dāng)同時加入Cd2+和Pb2+后，果蠅中Cd2+和Pb2+積累量均高于單獨Cd2+或Pb2+處理。例如在Cd0.05+Pb0.2處理下，較單獨Cd0.05處理，Cd2+積累量從0.02 μg上升至0.3 μg左右；較單獨Pb0.2 處理，Pb2+積累量從 0.15 μg 上升至 0.3 μg 左右。其他各濃度處理下規(guī)律相似，即二者以協(xié)同方式相互促進積累。

2.2 鎘和鉛對果蠅化蛹率和羽化率的影響

為了研究果蠅體內(nèi)積累的Cd2+和Pb2+是否影響其發(fā)育，測定了果蠅的化蛹率和羽化率。結(jié)果表明，相比CK、Cd0.05和Cd0.1處理組，Cd0.3和Cd0.5處理下化蛹率從90%左右下降至70%左右，羽化率則從85%下降至70%以下。各濃度Pb處理下化蛹率和羽化率較CK均有所下降，在Pb1.5和Pb2.9處理下，化蛹率和羽化率甚至均降低至50%左右。在 Cd0.05+Pb0.2處理下，果蠅化蛹率和羽化率和CK相比均無顯著性差異，甚至高于 Pb0.2處理。然而在 Cd0.1+Pb0.5、Cd0.3+Pb1.5和 Cd0.5+Pb2.9的聯(lián)合處理下，化蛹率和羽化率較單獨 Cd2+/Pb2+處理顯著下降（P＜0.05），化蛹率從 90%分別下降至 70%、60%和 50%左右，羽化率從 85%下降至64%、49%和 28%(P＜0.05)（圖 2）。

表1 熒光定量PCR引物Table 1 Primers for QRT-PCR

圖1 不同處理組中果蠅Cd2+/Pb2+積累量Fig. 1 Accumulation amount of Cd2+/Pb2+ in Drosophila melanogaster in different treatments

2.3 Cd2+/Pb2+對SOD、CAT活性及MDA含量的影響

圖 3表明，在 Pb2+及 Cd2+和 Pb2+組合處理下CAT活性較Cd2+顯著增加；此外Cd2+和Pb2+表現(xiàn)為協(xié)同作用，二者共同處理下 CAT活性均高于單獨Pb2+/Cd2+處理。例如在 Pb2.9處理下 CAT活性為0.26 U·g-1，Cd0.5 處理下 CAT 活性低至 0.15 U·g-1，而Cd0.5+Pb2.9處理下CAT活性高達0.4 U·g-1。類似地，Cd2+處理下SOD活性最低，Pb2+處理次之，Cd2+和Pb2+表現(xiàn)出最高的SOD活性。CK組下SOD活性為112 U·mg-1，而Cd0.05處理下SOD反而上升至 128 U·mg-1，而 Cd0.1、Cd0.3和 Cd0.5下 SOD活性均降至90 U·mg-1以下。Pb0.2處理下SOD下降為91.5 U·mg-1，其余Pb2+處理下SOD活性均高于Cd2+。Cd0.05+Pb0.2和Cd0.3+Pb1.5處理下SOD活性最低；但在Cd0.5+Pb2.9聯(lián)合處理下，SOD活性顯著上升122.5 U·mg-1。在Cd0.05+Pb0.2聯(lián)合處理下，MDA含量高于單獨Cd0.05和Pb0.2處理，為1.14 nmol·mg-1，相比之下Cd0.05和Pb0.2處理下 MDA 含 量 僅 為 0.56 nmol·mg-1和 0.62 nmol·mg-1。然而Cd0.1+Pb0.5處理下 MDA 為 0.79 nmol·mg-1，反而比 Pb0.5 處理下的 0.93 nmol·mg-1更低；Cd0.5+Pb2.9處理下 MDA含量為 0.81 nmol·mg-1，同樣低于單獨 Cd0.5處理下的 1.25 nmol·mg-1（圖 3）。

2.4 Cd2+/Pb2+對MTNs和Gsts表達水平的影響

由于在有限的時間段內(nèi)不能明顯地觀察到重金屬處理效果，而果蠅在長時間處理下又不能良好生長，因此根據(jù)之前的實驗結(jié)果，在 Cd0.5+Pb2.9聯(lián)合處理下，選取7日和28日齡的果蠅成蟲通過熒光定量PCR檢測MTNs和Gsts的表達水平。結(jié)果表明（圖4），7日齡成蟲中，Cd2+/Pb2+以及二者共同處理下，MTNB和MTND水平較對照組表達量顯著上升（P＜0.05）。在 Cd0.5處理下，MTNB和MTND較CK表達量分別提高1400倍和600倍左右；在Cd0.5+Pb2.9處理下，MTNB和MTND較CK表達量分別提高4000倍和1600倍左右，即Cd2+和 Pb2+聯(lián)合處理上調(diào) MTNs表達水平的效果高于Cd2+/Pb2+單獨處理。在 28日齡成蟲中，MTNB和MTND表達量較7日齡成蟲低，在Cd0.5+Pb2.9處理下MTNB和MTND僅為CK的130倍和120倍。在7日齡成蟲中，Cd0.5和Cd0.5+Pb2.9處理下，MTNA、MTNC、Gst2和Gst5表達量同樣顯著上升（P＜0.05），為CK的20-50倍；單獨Pb2.9處理對各基因的表達量沒有影響。在28日齡成蟲中，3組處理下MTNA、MTNC、Gst2和Gst5表達量較對照均顯著上升（P＜0.05），為CK的20-90倍。

圖2 Cd2+/Pb2+處理下果蠅的化蛹率（A）和羽化率（B）Fig. 2 The pupation (A) and eclosion (B) rates of Drosophila after treatment with Cd2+/Pb2+

3 討論

本研究結(jié)果表明，Cd2+/Pb2+的積累量具有劑量依賴性。并且當(dāng)果蠅飼養(yǎng)在同時包含 Cd2+和 Pb2+的培養(yǎng)基中，其體內(nèi)Cd2+或者Pb2+的吸收量更高。這暗示在果蠅體內(nèi)二者的積累具有相互促進的協(xié)同作用。然而研究小鼠肺組織發(fā)現(xiàn)，重金屬的組合反而減少了Pb2+的吸收（Fortoul et al.，2005），這是由于 Cd2+/Pb2+的吸入引起了非髂細支氣管細胞和纖毛細胞數(shù)量的下降，導(dǎo)致支氣管上皮形態(tài)發(fā)生改變，致使Pb2+濃度反而下降。由于本研究中果蠅依賴取食積累重金屬，而小鼠則通過呼吸積累重金屬，因此推斷造成以上結(jié)果差異的原因可能是昆蟲和哺乳動物在重金屬吸收和應(yīng)答方面存在差異。

低濃度的Cd2+促進果蠅生長，這可能是因為低濃度的 Cd2+激活了保護果蠅免受外界損傷的相關(guān)酶系。然而高濃度的Cd2+抑制果蠅生長，這可能是由于自我保護能力不足以抵抗外界高濃度重金屬的毒害作用。高濃度Pb2+對果蠅的生長表現(xiàn)出抑制作用，但是低劑量組對果蠅的影響微乎其微。Cd0.1+Pb0.5、Cd0.3+Pb1.5和 Cd0.5+Pb2.9聯(lián)合處理均抑制果蠅生長，且二者聯(lián)合作用較單獨Cd2+/Pb2+處理下化蛹率和羽化率顯著下降，即兩種重金屬具有協(xié)同作用。此外對于果蠅個體，無論是Cd2+或 Pb2+單獨處理，或是 Cd2++Pb2+共同處理，Cd2+都扮演著主要作用。過去有研究表明 Cd2+與Pb2+能顯著影響懷孕小鼠肝糖原含量和支氣管上皮細胞形態(tài)，并且這種影響主要是Cd2+介導(dǎo)的，這與Cd2+扮演著主要作用的結(jié)果相一致（Pillai et al.，2005）。

圖3 不同處理下的CAT（A）、SOD（B）活性和MDA（C）含量Fig. 3 The CAT (A), SOD (B) activity and MDA (C) contents with different treatment

生物體消除活性氧自由基是一個動態(tài)平衡的過程。本研究測定了氧化氫酶CAT、超氧化物歧化酶SOD的酶活性，以及自由基產(chǎn)物MDA的動態(tài)變化，用于評估Cd2+和Pb2+對果蠅抗氧化能力的影響。結(jié)果表明Cd2+和Pb2+在果蠅抗氧化能力方面具有劑量依賴性，并且二者之間表現(xiàn)出了拮抗特性（Rani et al.，2014）。

圖4 在Cd2+/Pb2+作用下與重金屬解毒相關(guān)基因的表達譜Fig. 4 The effects of Cd2+/Pb2+ on the expression profiles of detoxifying genes

果蠅在低濃度的 Cd2+處理下較對照組具有較高的SOD活性，然而MDA含量依然維持在較低水平。作為對重金屬的反應(yīng)，生物體通過清除體內(nèi)自由基以緩解Cd2+帶來的氧化損傷，并且這種手段對于保護機體是足夠的。然而果蠅經(jīng)低濃度的 Cd2+處理后，相對對照組發(fā)育周期顯著降低，且化蛹和羽化率顯著上升。此結(jié)果表明，清除氧化損傷的系統(tǒng)在低濃度的Cd2+刺激下被激活，用于降低氧化損傷，并且促進了果蠅生長發(fā)育，隨著Cd2+濃度上升，SOD及CAT活性降低，MDA含量顯著上升，導(dǎo)致氧化損傷加劇，并導(dǎo)致抗氧化能力達到極限且不足以清除體內(nèi)自由基，最終延緩果蠅的生長和發(fā)育（Xia et al.，2016）。

當(dāng)飼喂低濃度 Pb2+后，CAT和 SOD活性及MDA含量顯著上升，這表明在低濃度Pb2+環(huán)境下，機體可提升抗氧化能力用于應(yīng)對Pb2+的毒害作用。然而，Pb2+是脂質(zhì)過氧化物 MDA的誘導(dǎo)物，由于有限的抗氧化能力不足以保護機體免受氧化損傷最終隨著Pb2+濃度的上升MDA含量也隨之增加。機體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)是動態(tài)變化的，為了應(yīng)對活性氧自由基，過度增加的Pb2+由于超過了其自我保護能力范圍，引起果蠅生長力的降低。

Cd2+和 Pb2+能夠?qū)π∈蟠竽X的氧化損傷起到協(xié)同促進作用，然而在小鼠肝臟中卻發(fā)現(xiàn)了拮抗影響（Massó et al.，2007）。本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng) Cd2+和 Pb2+協(xié)同作用于果蠅，隨著重金屬濃度的增加MDA含量同樣增加。此外CAT活性的增加同樣關(guān)系到清除活性氧自由基的功能。本研究發(fā)現(xiàn)果蠅針對不同劑量的重金屬濃度及組合方式具有不同的應(yīng)答方式，這種方式是動態(tài)變化的，而不是簡單的拮抗或協(xié)同作用。

重金屬能夠誘導(dǎo) MTNs的表達，研究表明MTNs能在痕量重金屬刺激下發(fā)生改變，通過形成復(fù)合物以及其他手段來緩解重金屬的毒性（Chandler et al.，2016；Yang et al.，2011；Saboli? et al.，2010；Valko et al.，2005）。本研究中，我們檢測了果蠅中一系列MTNs基因的表達水平，研究發(fā)現(xiàn)MTNB和MTND在不同濃度的處理組中均有高表達，尤其是在 Cd2+和 Pb2+共同處理組中。有報道表明MTNB對Cd2+極為敏感，MTND和MTNB有著同樣功能（Chiaverini et al.，2010）。研究 MTNB的啟動子，發(fā)現(xiàn)Cd2+可作為MTNB的啟動子誘導(dǎo)其表達（Egli et al.，2010）。MTNs的高表達對于緩解Cd2+毒性作用具有重要作用。

在Cd2+處理下，GstD2和GstD5在成蟲階段的第7天和第28天上調(diào)。在單獨的Cd0.05，Pb1.5以及Cd0.05+Pb0.2處理組下，7日齡成蟲階段MTNB和MTNC以及MTND表達水平高于28日齡成蟲，導(dǎo)致了對不同 Cd2+和 Pb2+的應(yīng)答反應(yīng)。低濃度的Cd2+能夠激活機體內(nèi)排毒機理，增加 SOD和 CAT活性，加強解毒基因的表達，例如MTNA、MTNB、MTNC、MTND、GstD2和GstD5。然而Cd2+需在高濃度水平下才能激活此能力。兩種重金屬在低劑量協(xié)同作用下可被果蠅機體吸收，并刺激和重金屬解毒相關(guān)基因表達量的上升從而緩解重金屬對果蠅生長產(chǎn)生的副作用。

4 結(jié)論

（1）果蠅中Cd2+和Pb2+含量隨著培養(yǎng)基中重金屬濃度的上升而增加，Cd2++Pb2+聯(lián)合處理后 Cd2+和Pb2+積累量較單獨加入Cd2+或Pb2+均有所上升，二者具有協(xié)同吸收效應(yīng)。

（2）低濃度的 Cd2+促進果蠅發(fā)育，高濃度的Cd2+抑制其發(fā)育；高濃度的Pb2+會抑制其發(fā)育。Cd2+和Pb2+的聯(lián)合處理抑制果蠅的發(fā)育，抑制作用隨著Cd2+/Pb2+濃度的增加而增強。

（3）Cd2+/Pb2+聯(lián)合處理較單獨Cd2+/Pb2+處理顯著提高CAT活性，Cd0.5+Pb2.9引起SOD活性顯著上升，Cd0.05+Pb0.2處理較單獨Cd0.05或Pb0.2處理顯著提升MDA含量。

（4）Cd2+/Pb2+處理下MTNs和Gsts表達水平顯著升高。