于非，王禹

(黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱150069)

麗格海棠又名玫瑰海棠，為秋海棠科秋海棠屬的多年生草本花卉[1]，當今世界著名的盆栽花卉之一，具有極高的觀賞及經(jīng)濟價值。其花色鮮艷，花色品種多,不但是優(yōu)質(zhì)園林綠化用花，還是優(yōu)良的家庭用花。據(jù)調(diào)查僅黑龍江省海棠每年園林綠化用花在2000萬盆以上,家庭用盆花每年在50萬盆左右。具有較高的觀賞和經(jīng)濟價值的室內(nèi)花卉，開發(fā)前景極其廣闊[2]。

麗格海棠目前的傳統(tǒng)繁育方式是有性繁殖和無性繁殖。有性繁殖即種子播種，由于麗格海棠是雜交的產(chǎn)物，胚胎發(fā)育不完全，所以不宜發(fā)芽，開花后結(jié)籽少，種子發(fā)芽率很低,不能保持母本的優(yōu)良特性等缺點,一般種子播種不作為商業(yè)化生產(chǎn)的繁育手段；無性繁育即莖段扦插，麗格海棠對環(huán)境條件要求高，分蘗力弱，莖段扦插成活率與繁殖系數(shù)低, 種質(zhì)退化嚴重[3]，并且長期無性繁殖還會造成病毒在植物體內(nèi)傳遞累積，嚴重影響花卉產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量，很難滿足當前花卉產(chǎn)業(yè)發(fā)展的要求。本試驗通過植物激素對麗格海棠組織培養(yǎng)快繁體系的研究，篩選出適合麗格海棠組織培養(yǎng)快繁的培養(yǎng)基，為建立麗格海棠再生體系奠定基礎(chǔ)，提高麗格海棠商品化生產(chǎn)效率提供技術(shù)支持[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗采用麗格海棠品種巴克斯(Barkos)，采集地點為黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院園藝分院智能化溫室。將采集成熟的鮮嫩葉片在自來水下流沖洗20min，置于超凈工作臺中，酒精消毒20s，蒸餾水沖洗兩次，0.1%的升汞消毒5min，蒸餾水沖洗2次，沿著主葉脈方向切成1cm×1cm大小的葉片組織，接種到不定芽分生培養(yǎng)基上。

1.2 培養(yǎng)基試驗

1.2.1 植物激素對麗格海棠不定芽分生的影響。誘導不定芽分生的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、TDZ和2.4-D，共組成9種培養(yǎng)基，MS+1mg/L 6-BA;MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ;MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L TDZ;MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L TDZ; MS+2mg/L 6-BA; MS+3mg/L 6-BA; MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D; MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L 2.4-D; MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L 2.4-D。每種培養(yǎng)基接種40個葉片，4個葉片接種在一瓶內(nèi)，共計10瓶，4周后觀察其不定芽分生情況。

1.2.2 植物激素對麗格海棠不定芽繼代增殖的影響。將誘導培養(yǎng)基中已分生的不定芽切下接種到繼代增殖培養(yǎng)基中，繼代增殖培養(yǎng)基為MS附加6-BA和NAA，共組成9種培養(yǎng)基，MS+1mg/L 6-BA;MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+1mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA;MS+2mg/L 6-BA;MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA; MS+3mg/L 6-BA。4周繼代1次，觀察高度大于2.5cm 的不定芽增殖情況。

1.2.3 植物激素對麗格海棠生根的影響。將高度大于2.5cm的組培苗切下接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基為MS附加IBA和NAA,共組成9種培養(yǎng)基，MS+0.1mg/L IBA; MS+0.1mg/L IBA+0.1mg/L NAA; MS+0.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA；MS+0.3mg/L IBA；MS+0.3mg/L IBA+0.1mg/L NAA;MS+0.3mg/L IBA+0.3mg/L NAA;MS+0.5mg/L IBA;MS+0.5mg/L IBA+0.1mg/L NAA; MS+0.5mg/L IBA+0.3mg/L NAA。4周后觀察其生根情況。

1.3 培養(yǎng)條件

試驗采用的培養(yǎng)基均為含30g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH=5.7，培養(yǎng)室溫度26±2℃，光照 1200 lx 左右,每天光照10～12h，4周后調(diào)查分生倍數(shù)和平均株高。生根培養(yǎng)2周后調(diào)查生根率等。

2 結(jié)果與分析

2.1 適合不定芽分生的植物

本試驗以植物激素6-BA、TDZ和2.4-D作為供試因子，研究了三者對麗格海棠不定芽分生的結(jié)合效應。從表1得出,外植體在大部分培養(yǎng)基上7～10天均分生出不定芽，隨著6-BA濃度的升高，不定芽產(chǎn)生速度加快，再生比率也增高，但當6-BA濃度達到3mg/L時，不定芽出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，且隨著濃度升高,越來越嚴重；6-BA和TDZ、2.4-D同時使用，TDZ和2.4-D濃度達到0.3mg/L時，不定芽出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；隨著TDZ和2.4-D濃度的升高，葉片產(chǎn)生的愈傷越來越多，且不易分化出不定芽。綜合以上因素，最佳不定芽分生的培養(yǎng)基為MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ或MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D。

表1 植物激素對不定芽分生的影響

2.2 適合不定芽繼代增殖的植物激素

本實驗以植物激素6-BA和NAA作為供試因子，研究了二者對麗格海棠不定芽繼代增殖的結(jié)合效應。從表2得出,隨著6-BA濃度的增高,不定芽分化速度加快和增殖倍數(shù)提高，但當6-BA濃度達到3mg/L時，芽生長勢減弱；隨著NAA濃度的提高易生成根，根生成后不定芽增殖速度減慢，因此，麗格海棠不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA + 0～0.1mg/L NAA，增殖系數(shù)可達5.8。

表2 植物激素對不定芽繼代增殖響

2.3 適合組培苗生根的植物激素

本實驗以植物激素IBA和NAA作為供試因子，研究了二者對麗格海棠組培苗生根的結(jié)合效應。從表3得出，IBA濃度的升高對麗格海棠組培苗生根有促進作用，但IBA濃度達到0.3mg/L以上，對組培苗生長有抑制作用，添加0.1mg/L NAA可以促進組培苗生長，但當NAA濃度達到0.3mg/L以上，出現(xiàn)葉片枯萎現(xiàn)象，因此，組培苗生根可選用0.1～0.3mg/L IBA，可添加0.1mg/L NAA促進組培苗生長。

表3 植物激素對組培苗生根的影響

3 結(jié)論與討論

麗格海棠組織培養(yǎng)快繁體系最佳的不定芽再生培養(yǎng)基植物激素組合為MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ或MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D，培養(yǎng)4周后再生率可達87.3%；4周后將再生的不定芽從葉片切下，接種到繼代增殖培養(yǎng)基上，最佳的不定芽繼代增殖培養(yǎng)基激素組合為MS+2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系數(shù)可達5.8，根據(jù)具體需求可繼續(xù)進行增殖，每4周繼代一次；將高度為2.5cm以上的組培苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，最佳的生根培養(yǎng)基激素組合為MS+0.1～0.3mg/L IBA，組培苗生根后且長度達到5cm以上可移栽馴化。

從實驗得出，隨著細胞分裂素濃度的增加，對不定芽再生和增殖均有促進作用，但當濃度超出一定范圍時，對不定芽再生和增殖起到了抑制的作用；高濃度的IBA對麗格海棠組培苗的生根和生長有促進作用，但是濃度越高在促進生根的同時也影響了組培苗的生長，出現(xiàn)黃葉枯萎現(xiàn)象。因此，在生產(chǎn)中應結(jié)合不定芽和組培苗生長勢而調(diào)節(jié)激素濃度。麗格海棠組培苗葉片和莖較脆，在生根時建議切成叢狀，利于生根和馴化。

圖1麗格海棠葉片不定芽再生 圖2麗格海棠不定芽增殖

圖3麗格海棠組培苗生根 圖4麗格海棠組培苗