劉喜玲，趙淑敏，劉紅莉，曹望第

（陜西省商洛市藥品檢驗(yàn)所，陜西 商洛 726000）

女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit．的干燥成熟果實(shí)，具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)之功效，用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明、內(nèi)熱消渴、骨蒸潮熱[1]。早期發(fā)現(xiàn)的主要活性成分為以脂溶性的齊墩果酸、熊果酸等為代表的五環(huán)三萜類化合物[2-3]。近年來(lái)，陸續(xù)分離得到了水溶性的紅景天苷和裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物，包括女貞酸、女貞苷、新女貞苷、特女貞苷和女貞苦苷等，具有較強(qiáng)的生理活性。對(duì)于女貞子的質(zhì)量分析，早期以測(cè)定齊墩果酸和熊果酸的含量為主，近年來(lái)對(duì)紅景天苷和裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物進(jìn)行了定量分析[4-5]。特女貞苷可抗炎抗菌，降血糖，調(diào)血脂，抗衰老，對(duì)高糖刺激的腎小球系膜細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用[6]。以往在中藥材的生產(chǎn)和產(chǎn)地加工過(guò)程中，往往只注重中藥材的產(chǎn)量、效益和藥材的外形質(zhì)量，而對(duì)藥材有效成分的積累動(dòng)態(tài)和藥材的內(nèi)在品質(zhì)重視不夠[7-9]。本研究中采用高效液相色譜法測(cè)定女貞子的特征性成分特女貞苷的含量[10-15]，建立最佳加工方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；FA1104型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；FW-200D型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津鑫博得儀器有限公司）；加熱回流裝置（實(shí)驗(yàn)室自行組裝）；1HP-10-H型試驗(yàn)用超純水機(jī)（重慶力德高端水處理設(shè)備研發(fā)有限公司）。

1．2 試藥

特女貞苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，含量為96．4%，批號(hào)為111926-201203）；甲醇（色譜純，Sigma-Aldrich公司，批號(hào)為34851-4L）；乙醇（分析純，500 mL，天津市天力化學(xué)試劑有限公司）；水為自制純化水；試驗(yàn)所用女貞子藥材于2016年冬采集于商洛市商州區(qū)，經(jīng)陜西省商洛市藥品檢驗(yàn)所曹望第主任藥師鑒定為木犀科植物L(fēng)igustrumlucidumAit．。

2 方法與結(jié)果

2．1 樣品加工方法

將成熟的女貞子除去枝葉，混勻，即得樣品。

烘干法：將采摘的女貞子在105℃下直接烘干；陰干法：將采摘的女貞子在室溫下放置2個(gè)月左右自然陰干；曬干法：將采摘的女貞子在室外陽(yáng)光下晾曬15 d左右；蒸后曬干法：將采摘的女貞子蒸不同時(shí)間后，經(jīng)過(guò)曬干處理；燙后曬干法：用沸水將采摘的女貞子燙不同時(shí)間后，經(jīng)過(guò)曬干處理。

取不同加工方法處理好的樣品，經(jīng)超微粉碎（過(guò)3號(hào)篩），制成9種樣品，粉末2 g，精密稱定，按2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0832第二法水分測(cè)定法（烘干法）測(cè)定水分。詳見表1。

表1 女貞子不同加工法加工的試驗(yàn)樣品的水分含量（n=2）

2．2 特女貞苷含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[1]

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：224 nm；流動(dòng)相：甲醇-水（40∶60，V∶V）；流速：1．0 mL／min；柱溫：35℃。理論板數(shù)按特女貞苷峰計(jì)應(yīng)不低于4 000，在此色譜條件下，特女貞苷與其他組分峰均達(dá)到基線分離。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：取特女貞苷對(duì)照品8．5 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并制成每1 mL含0．17 mg的溶液，即得。

供試品溶液：取2．1項(xiàng)下不同加工方法處理好的樣品0．5 g粉碎（過(guò)3號(hào)篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中精密加入稀乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取特女貞苷對(duì)照品溶液，分別取0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0，20．0μL，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=808．74X-31．272，r=0．999 8（n=8）。結(jié)果表明，特女貞苷進(jìn)樣量在0．085～3．400μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取特女貞苷對(duì)照品溶液10μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0．32%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，2，4，8，12 h時(shí)測(cè)定。結(jié)果的RSD為1．31%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一處理方法的樣品6份，按2．3．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定。結(jié)果的RSD為0．75%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱定已知含量的樣品6份（質(zhì)量濃度為85．28μg／mL），各0．25 g，精密量取質(zhì)量濃度為0．85 g／L的特女貞苷對(duì)照品溶液5 mL，分別加入上述6份樣品中，按擬訂色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定含量，以干燥品計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 特女貞苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．2．4 樣品含量測(cè)定

按2．1項(xiàng)下樣品處理方法，處理9種不同樣品后，按2．3．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣2次，每次10μL，測(cè)定峰面積，按照干燥品計(jì)算含量。結(jié)果加工方法1～9的特女貞苷含量分別為0．90%，1．23%，0．94%，1．51%，1．77%，1．59%，1．65%，1．84%，1．85%。

3 討論

本研究為探究性試驗(yàn)，通過(guò)考察不同的加工方法對(duì)女貞子中特女貞苷含量的影響，對(duì)2015年版《中國(guó)藥典（一部）》中規(guī)定的女貞子加工方法（稍蒸或置沸水中略燙后干燥，或直接干燥）進(jìn)行比較，結(jié)果表明，不同加工方法對(duì)女貞子中特女貞苷含量有顯著影響。

比較不同加工方法對(duì)女貞子中特女貞苷含量的測(cè)定結(jié)果，特女貞苷的含量依次為燙后干燥法＞蒸后干燥法＞陰干法＞曬干法＞烘干法；蒸10 min比蒸5 min和蒸20 min后干燥的女貞子中特女貞苷含量高；置沸水中燙5 min和燙10 min比燙2 min后干燥的女貞子中特女貞苷含量高，隨著燙的時(shí)間的延長(zhǎng)，燙5 min和燙10 min處理后，女貞子中特女貞苷的含量增長(zhǎng)不大，因而宜采用燙后干燥的方法進(jìn)行產(chǎn)地加工。因此，最佳產(chǎn)地加工方法是將女貞子置沸水中燙5 min后曬干處理。

特女貞苷是女貞子中的專屬成分，其藥理活性明確，可作為女貞子藥材質(zhì)量檢驗(yàn)的指標(biāo)性成分。本研究中建立的女貞子的不同加工處理方法對(duì)女貞子中特女貞苷的含量提高起到了很好的指導(dǎo)意義，對(duì)于女貞子藥材的質(zhì)量提升具有一定參考價(jià)值。