肖植國 許慶

【摘要】目的：對比紫外分光光度法改進為高效液相色譜法測定的效率，對比兩種檢測方法價值。方法：采購5個廠家50個批次的青霉素V鉀片，每個廠家10個批次，配置供試品溶液、標準品溶液。分別進行紫外分光光度法改進為高效液相色譜法檢測，繪制標準曲線，進而計算不同廠商與批次青霉素V鉀分散片含量，進行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗，計算相對保留時間等指標。結(jié)果：相較于由紫外分光光度，高效液相色譜法標準曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，同時最低檢出限也顯著下降，精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重現(xiàn)性試驗的相對保留時間與峰面積低于紅外光譜。結(jié)論：高效液相色譜法對青霉素V鉀分散片含量測定性能有一定程度的提高。

【關(guān)鍵詞】紫外分光光度法;高效液相色譜法; 青霉素V鉀分散片;含量分析

我國開始生產(chǎn)青霉素V鉀片時間較晚，生產(chǎn)工藝并不成熟，藥品質(zhì)量問題發(fā)生風(fēng)險高，加強青霉素V鉀片質(zhì)控非常必要[1]。青霉素V鉀分散片含量測定方法較多，本次研究嘗試對比紫外分光光度法改進為高效液相色譜法測定的效率，對比兩種檢測方法價值。

1材料與方法

1.1? 實驗材料

采購5個廠家50個批次的青霉素V鉀片，每個廠家10個批次。

1.2 儀器與試劑實驗

儀器：Agilent1260型高效液相色譜儀，UV2401PC型紫外分光光度計，MettleToledoMS205DU電子天平，立式透明冷藏箱、通風(fēng)柜、各類型號點樣管等。甲醇、三氯甲烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、純水等標準品，由中國國家標準物質(zhì)中心提供。對照品：中國藥品生物制品檢定院，苯氧乙酸對照片、苯氧甲基青霉噻唑酸A型與B型對照品、苯氧基氨酸脫羧青霉噻唑酸A型與B型對照品。

1.3? 方法

1.3.1高效液相色譜法

（1）對照品溶液：精密稱量青霉素V對品適量，置于10ml容量瓶中，加入水溶解，定量稀釋制成0.2mg/ml溶液，4℃冰箱保存。避光保存。稱取一定量標準物質(zhì)儲備液，用水0.1mg/ml、1μg/ml、10μg/ml工作液溶液，避光4℃保存。

（2）供試品溶液：取目標對照品，精密稱定，置入錐形瓶，加入pH 6.5磷酸鹽緩沖液（0.2mmol/L磷酸二氫鉀溶液125ml加水250ml混勻，氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.5，加水稀釋到500ml），溶解制成3.6mg/ml供試品溶液。精密量取1ml，置入100ml量瓶中，采用pH6.5磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

（3）檢測：①葡聚糖凝膠G-10為填充劑，玻璃柱內(nèi)徑1.0～1.4cm，柱長30～40cm。，量取0.1mg/ml藍色葡萄胎2000溶液100～200μl，10μl，流速1.5mL·min-1，檢測波長0～20 min為254nm。流動相A為pH7.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液[（0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1mmol/L磷酸二氫鈉溶液（61：39）]，流動相B為水。分別以流動相A、B測定，記錄色譜圖。②線性關(guān)系考察，將對照品稀釋至刻度，進樣后，繪制色譜圖以及峰面積，以溶液濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制不同對照品的回歸方程。③進行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗，計算相對保留時間等指標。

1.3.2 紫外分光光度法

取樣品10品，研細，精密測量，置入100ml量瓶，加水搖勻溶解稀釋至刻度，精密稱量取連續(xù)濾液5ml，置入100ml量瓶，加水稀釋到刻度，搖勻，取2ml每份。置入兩只試管，一支加入甲咪唑-汞溶液10ml，混勻，密塞，60℃水浴加熱25min，不斷振量，冷卻制得甲液。另一支加入水10ml，搖勻，制得乙液。取對照品125mg，精密稱量，置入100ml量瓶，分別制得甲液、乙液。在325nm波長出測定吸光度，測甲液2ml水與10ml咪唑-汞混合液為空白，測乙液以水為空白，采用差值計算，即得到含量。繪制標準曲線，計算青霉素的含量。進行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗，計算相對保留時間等指標。

2? 結(jié)果

相較于由紫外分光光度，高效液相色譜法標準曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，同時最低檢出限也顯著下降，精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重現(xiàn)性試驗的相對保留時間與峰面積低于紅外光譜。

3? 討論

從本次研究來看，相較于紫外分光光度計測量，高效液相色譜法的測定性能明顯增強，主要體現(xiàn)在以下幾個方面：①標準曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，提示檢出的誤差得到有效的控制，線性關(guān)系更理想，測定供試品的藥品含量更符合真實情況;②最低檢出限也顯著下降，靈敏度上升，有助于檢出血液中微小的含量留存;③檢出的可靠性增強，研究中高效液相色譜法精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重現(xiàn)性試驗的相對保留時間與峰面積低于紅外光譜，提示結(jié)果的穩(wěn)定性更高，不容易受到干擾[2]。目前，對于藥物的含量分析，普遍以高效液相色譜法作為最終的鑒定結(jié)果。高效液相色譜技術(shù)，可一次進行多種物質(zhì)成分含量的檢測，用于青霉素V鉀分散片含量，能夠分析不同物質(zhì)的含量，并通過分析是否存在新的“峰”來看到是否存在雜質(zhì)、雜質(zhì)的含量，從而評價藥品的質(zhì)量。高效液相色譜法最低檢出限度的下降，使其可用于血液等樣本中的藥物含量分析，用于藥代動力學(xué)等藥理學(xué)研究。

小結(jié)：高效液相色譜法對青霉素V鉀分散片含量測定性能有一定程度的提高。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典（二部），中國醫(yī)藥科技出版社，2015，1287-1288

[2]陳希，吳鑫，鄢雷娜，等.國產(chǎn)青霉素 V鉀片質(zhì)量評價[J].今日藥學(xué)，2016，26（10）：707-709.