田 娟 劉 偉 蔣 明 趙京壯 吳 凡 喻麗娟 陸 星 文 華

(1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所, 農(nóng)業(yè)部淡水生物多樣性保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430223;2. 淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心, 武漢 430070; 3. 長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)系, 荊州 434020)

動(dòng)物從外界攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的第一目的是為了供給生命活動(dòng)的能量需要, 攝入的部分營(yíng)養(yǎng)素被用于分解代謝, 以產(chǎn)生能量用于同化作用以及維持生命的其他過(guò)程[1]。在現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 為了滿(mǎn)足養(yǎng)殖品種快速生長(zhǎng)的需求, 通常會(huì)采取在較短時(shí)間內(nèi)給予養(yǎng)殖對(duì)象以過(guò)高能量的營(yíng)養(yǎng)策略。蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂質(zhì)是水產(chǎn)動(dòng)物三種主要的能量來(lái)源, 然而飼料含過(guò)高水平的蛋白質(zhì)、脂肪或碳水化合物均會(huì)影響?hù)~(yú)類(lèi)的攝食和生長(zhǎng), 誘發(fā)多種魚(yú)類(lèi)發(fā)生肝臟代謝障礙(俗稱(chēng)“肝膽綜合癥”、“脂肪肝”等),導(dǎo)致生理狀態(tài)發(fā)生變化影響?hù)~(yú)體的健康[2—5]。

血液是在心臟和血管腔內(nèi)循環(huán)流動(dòng)的一種極其重要的組織, 在機(jī)體里主要起運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、防御和免疫、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、參與體液調(diào)節(jié)等作用, 故血液指標(biāo)值能反映動(dòng)物的健康狀態(tài)[6]。對(duì)于魚(yú)類(lèi)而言, 血液生理生化指標(biāo)的變動(dòng)范圍較大, 其結(jié)果受內(nèi)源或外源多種因素共同作用的影響, 如年齡、性別、繁殖、食性等內(nèi)源性因素和餌料、溶氧、溫度、養(yǎng)殖方式、疾病等外源性因子等[7,8]。在魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中, 發(fā)現(xiàn)魚(yú)類(lèi)血液生化指標(biāo)與機(jī)體的攝食、營(yíng)養(yǎng)狀況、飼料組成、飼料源等密切相關(guān)[9—15], 但同時(shí)發(fā)現(xiàn)魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)參數(shù)并不穩(wěn)定,難以通過(guò)測(cè)定血液指標(biāo)得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。因此本實(shí)驗(yàn)試圖測(cè)定餐后不同時(shí)間點(diǎn)的生化指標(biāo), 進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè), 從而更準(zhǔn)確地研究飼料組成對(duì)血液指標(biāo)造成的影響。草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)作為我國(guó)養(yǎng)殖產(chǎn)量第一的淡水魚(yú)類(lèi), 被廣泛用于魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)學(xué)及營(yíng)養(yǎng)性疾病學(xué)的研究[16—18]。本實(shí)驗(yàn)以3組高能純化飼料及對(duì)照組飼料喂養(yǎng)草魚(yú)幼魚(yú)11周, 采取餐后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血液樣品, 測(cè)定8種常見(jiàn)的與糖脂代謝相關(guān)的血液指標(biāo), 旨在研究高能量飼料對(duì)草魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響, 為準(zhǔn)確測(cè)定魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

據(jù)報(bào)道草魚(yú)幼魚(yú)飼料適宜的蛋白質(zhì)、脂肪、糖含量分別為30%—35%[19]、6%—7.5%[20]、不超過(guò)33%[21], 蛋能比為19.5 mg/kJ[22]。在本實(shí)驗(yàn)中, 以酪蛋白和明膠作為蛋白源, 以玉米油和大豆油(質(zhì)量比1∶1)作為脂肪源, 糊精為糖源, 設(shè)計(jì)的對(duì)照組飼料(CON)中含30%的蛋白質(zhì)、8%的脂肪、36%的糊精, 以滿(mǎn)足草魚(yú)幼魚(yú)在生長(zhǎng)和非特異性免疫方面的需求。另外設(shè)計(jì)了3組高能飼料, 分別是高蛋白組(HP)、高脂肪組(HF)和高碳水化合物組(HC)。3組高能飼料較對(duì)照組飼料配方, 含更高的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物, 其總能較對(duì)照組提高11%, 具體實(shí)驗(yàn)飼料配方和營(yíng)養(yǎng)成分如表1所示。所有原料經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎后過(guò)孔徑0.3 mm的網(wǎng),將粉料充分混勻, 最后加豆油、玉米油和25%的水進(jìn)行調(diào)和, 用模孔直徑為2 mm的絞肉機(jī)擠壓成條狀, 置于50℃烘箱中烘干, 然后破碎成長(zhǎng)度為3 mm左右的顆粒飼料, 置于-20℃冰柜中冷藏備用。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料組成和基本分析Tab. 1 Composition and proximate analysis of the experimental diets

1.2 實(shí)驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)用草魚(yú)取自長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所苗種繁育場(chǎng)。在實(shí)驗(yàn)魚(yú)運(yùn)回后, 用聚維酮碘進(jìn)行消毒, 然后在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)2周, 暫養(yǎng)期間以對(duì)照組飼料飼喂, 以使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)飼料和實(shí)驗(yàn)環(huán)境。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h, 選取體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊、初始體質(zhì)量為(55.0±2.5) g的實(shí)驗(yàn)魚(yú)320尾, 用80 mg/L水的MS-222麻醉后稱(chēng)重, 養(yǎng)殖于16個(gè)封閉式循環(huán)水養(yǎng)殖桶中(直徑85 cm, 水深70 cm, 水體體積約400 L), 每桶20尾, 將16個(gè)桶隨機(jī)分成4組, 每組設(shè)4個(gè)重復(fù), 分別飼喂4種實(shí)驗(yàn)飼料。根據(jù)魚(yú)體生長(zhǎng)、攝食和水溫等環(huán)境狀況及時(shí)調(diào)整投飼量, 確保魚(yú)體搶食并盡量不出現(xiàn)殘餌, 每天表觀飽食投喂3次(08:30—09:00、12:30—13: 00、17:00—17:30), 投飼率3%—5%。每日記錄水溫、草魚(yú)攝食行為和死亡數(shù)量等, 每天換水1/3。養(yǎng)殖期間室溫(12—22)℃,水溫(25—28)℃, 溶氧質(zhì)量濃度大于5 mg/L, pH 6.8—7.3, 氨氮質(zhì)量濃度小于0.05 mg/L。共計(jì)飼養(yǎng)11周。

1.3 樣品采集

為避免多次放水撈魚(yú)又補(bǔ)充新水所造成的水溫差和多次捕撈操作對(duì)試驗(yàn)魚(yú)造成的應(yīng)激, 影響檢測(cè)結(jié)果, 本試驗(yàn)采樣時(shí)進(jìn)行以下操作: 在11周養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 先將每個(gè)養(yǎng)殖桶的試驗(yàn)魚(yú)全部撈出,使用MS-222麻醉后, 從中隨機(jī)挑選8尾, 平均放入另外4個(gè)養(yǎng)殖桶中; 同一處理組的4個(gè)養(yǎng)殖桶均進(jìn)行相同操作; 操作完成后每個(gè)養(yǎng)殖桶中養(yǎng)殖8尾魚(yú), 來(lái)自原來(lái)同一處理組的4個(gè)平行, 即每個(gè)平行提供2尾,用于后續(xù)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的取樣。將實(shí)驗(yàn)魚(yú)禁食48h, 確保水溫和魚(yú)體健康狀況正常, 從每組的4個(gè)養(yǎng)殖桶中隨機(jī)選取1個(gè)桶, 將桶中的8尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)撈出, 麻醉后置于冰盤(pán)上采用尾靜脈采血, 此次采樣被定義為對(duì)照樣本(完全饑餓狀態(tài))。剩余的養(yǎng)殖桶, 用對(duì)應(yīng)的處理組飼料飽食投喂1次, 然后分別在喂食后的2h、8h和24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)按上述采樣方法各采集血液1次, 將采集的血液樣品在4℃靜置5h后, 3000 r/min離心15min, 取上清貯存于-80℃冰箱中待檢測(cè)血清指標(biāo)。

1.4 測(cè)定方法

每一處理組共計(jì)取血清8管, 每管取200 μL血清置于比色杯中, 然后按照希森美康全自動(dòng)生化分析儀(CHEMIX-800)的操作方法進(jìn)行測(cè)定, 所用試劑均購(gòu)自Sysmex公司。血清甘油三酯(TAG) 、總膽固醇(TCHO) 、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)含量分別采用ADP-HK、COD-POD、CDH-UV法測(cè)定, 血清低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)含量采用終點(diǎn)法, 葡萄糖(GLU)含量采用己糖激酶法測(cè)定, 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)分別采用門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試法(MDHUV)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試法(LDH-UV)、對(duì)硝基苯磷酸(p-NPP)法。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD,n=8)表示, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS17進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析, 運(yùn)用一般線性模型單變量進(jìn)行雙因素分析, 采用Tukey's進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)。對(duì)采樣時(shí)間點(diǎn)(T)和不同飼料(D)進(jìn)行雙因素方差分析, 檢測(cè)了采樣時(shí)間點(diǎn)(T)和飼料(D)對(duì)測(cè)定指標(biāo)的主要影響, 以及它們的交互作用。同一處理組在不同采樣時(shí)間點(diǎn)的差異用字母“x, y, z”表示, 同一采樣時(shí)間點(diǎn)不同處理組間的差異用字母“a, b, c, d”表示,P＜0.05即認(rèn)為存在顯著性差異, 運(yùn)用OriginLab 8.0軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果

2.1 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的動(dòng)態(tài)變化

如圖1所示, 草魚(yú)血清AST活性受到采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料的顯著影響(P＜0.05), 且兩者存在交互作用。草魚(yú)AST活性在餐后2h達(dá)到峰值, 且在2h時(shí)3個(gè)高能組AST活性均較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05), 而在24h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組AST活性無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HC和HF組AST活性隨餐后時(shí)間延長(zhǎng)下降, 且餐后8h和24h較對(duì)照和2h差異顯著(P＜0.05)。HP組在2h時(shí)出現(xiàn)最大值, 8h降低到最低值, 24h恢復(fù)到初始值。

圖1 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的影響Fig. 1 Effect of high-energy diets on postprandial AST activities in serum of grass carp

2.2 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的動(dòng)態(tài)變化

草魚(yú)幼魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的變化如圖2所示,采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清ALT活性(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。草魚(yú)ALT活性在餐后24h達(dá)到峰值, 且在24h時(shí)3個(gè)高能組ALT活性較對(duì)照組均顯著升高(P＜0.05)。CON組ALT活性在4個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HC和HF組ALT活性隨餐后時(shí)間延長(zhǎng)而升高, 且餐后8h和24h較0和2h差異顯著(P＜0.05);HP組在24h時(shí)出現(xiàn)最大值, 且較其他采樣時(shí)間點(diǎn)顯著升高(P＜0.05)。

圖2 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的影響Fig. 2 Effect of high-energy diets on postprandial ALT activities in serum of grass carp

2.3 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清堿性磷酸酶活性的動(dòng)態(tài)變化

如圖3所示, 采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清ALP活性(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組的草魚(yú)餐后血清ALP在餐后24h達(dá)到峰值, 但各組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在餐后8h, 3個(gè)高能組較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。HC和HP組ALP活性在4個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HF實(shí)驗(yàn)組在0和2h時(shí)無(wú)顯著差異(P＞0.05), 隨后開(kāi)始上升, 在8h時(shí)達(dá)到峰值, 8h和24h較0和2h顯著升高(P＜0.05)。CON組0h和24h ALP活性較2h和8h顯著升高(P＜0.05)。

圖3 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清堿性磷酸酶活性的影響Fig. 3 Effect of high-energy diets on postprandial ALP activities in serum of grass carp

2.4 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清膽固醇含量的動(dòng)態(tài)變化

血清膽固醇含量在各實(shí)驗(yàn)組的變化如圖4所示, 不同飼料顯著影響草魚(yú)血清TCHO含量(P＜0.05), 采樣時(shí)間點(diǎn)對(duì)其無(wú)顯著影響(P＞0.05), 但兩者對(duì)血清TCHO含量存在交互作用。4個(gè)處理組的TCHO含量無(wú)明顯的峰值時(shí)間點(diǎn), CON組和HF血清TCHO含量餐后波動(dòng)不明顯, 4個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。HC和HP組變化趨勢(shì)相同, 0時(shí)含量最高, 其他3個(gè)時(shí)間點(diǎn)較0h顯著降低(P＜0.05)。在0時(shí), HC組和HP組較CON組和HF組顯著升高(P＜0.05); 其他3個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn), 4個(gè)處理組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

圖4 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清膽固醇含量的影響Fig. 4 Effect of high-energy diets on postprandial TCHO contents in serum of grass carp

2.5 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清高密度脂蛋白膽固醇含量的動(dòng)態(tài)變化

草魚(yú)幼魚(yú)血清高密度脂蛋白膽固醇的含量變化如圖5所示, 采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清HDLC含量(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。血清HDLC含量的變化與CHO相似。CON組和HF組餐后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯變化。HC組和HF組,0時(shí)含量顯著高于其他3個(gè)時(shí)間點(diǎn)(P＜0.05)。在0h時(shí),HC組和HP組較CON組和HF組顯著升高(P＜0.05)。

圖5 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清高密度脂蛋白膽固醇含量的影響Fig. 5 Effect of high-energy diets on postprandial HDLC contents in serum of grass carp

2.6 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清低密度脂蛋白膽固醇含量的動(dòng)態(tài)變化

圖6 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清低密度脂蛋白膽固醇含量的影響Fig. 6 Effect of high-energy diets on postprandial LDLC contents in serum of grass carp

如圖6所示, 采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清LDLC含量(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組的草魚(yú)餐后血清LDLC含量在餐后24h達(dá)到峰值, 24h時(shí)HP組較對(duì)照組顯著降低(P＜0.05); 在餐后2h和8h, 4個(gè)處理組均較0h顯著降低, 且在0h時(shí)和8h時(shí)3個(gè)高能組LDLC含量均較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。

2.7 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清葡萄糖含量的動(dòng)態(tài)變化

如圖7所示, 采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清GLU含量(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。草魚(yú)血清GLU含量在餐后2h達(dá)到峰值。較對(duì)照組, HC組在2h時(shí)顯著升高, HF組顯著降低(P＜0.05), HP組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在餐后0h,3個(gè)高能組均較對(duì)照組顯著降低, 而餐后8h和24h均較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。餐后8h和24h, 4個(gè)處理組內(nèi)的血糖含量趨于穩(wěn)定, 未出現(xiàn)明顯差異(P＞0.05)。

圖7 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清葡萄糖含量的影響Fig. 7 Effect of high-energy diets on postprandial GLU contents in serum of grass carp

2.8 草魚(yú)在攝食高能飼料后血清甘油三酯含量的動(dòng)態(tài)變化

血清甘油三酯含量的變化如圖8所示, 采樣時(shí)間點(diǎn)和不同飼料均顯著影響草魚(yú)血清TAG含量(P＜0.05), 且兩者對(duì)其存在交互作用。草魚(yú)血清TAG含量在餐后8h達(dá)到峰值。在0h, HP組較對(duì)照組顯著降低, HC組和HF組顯著升高(P＜0.05)。在2h和8h時(shí)HC和HF組TAG含量均較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05), 而HP組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在24h, 4個(gè)處理組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

圖8 高能量飼料對(duì)草魚(yú)餐后血清甘油三酯含量的影響Fig. 8 Effect of high-energy diets on postprandial TAG contents in serum of grass carp

3 討論

3.1 采樣時(shí)間點(diǎn)對(duì)草魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)被廣泛運(yùn)用于評(píng)價(jià)魚(yú)體健康和營(yíng)養(yǎng)狀況。在本實(shí)驗(yàn)中, 攝食不同飼料的草魚(yú)幼魚(yú)在禁食48h后, 再重新攝食相應(yīng)飼料, 除血清TCHO外, 血清AST、ALT和ALP活性, 以及血清HDLC、LDLC、GLU和TAG含量均受到采樣時(shí)間點(diǎn)即餐后時(shí)間的顯著影響, 且餐后時(shí)間與飼料存在交互作用;草魚(yú)血糖和血清AST活性均在餐后2h達(dá)到峰值, 血清ALT和ALP活性以及LDLC含量均在餐后24h達(dá)到峰值, 血清TAG含量在餐后8h達(dá)到峰值, 而血清TCHO和HDLC含量則無(wú)明顯峰值。在對(duì)大菱鲆(Psetta maxima)[24]和虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[25]的研究中均發(fā)現(xiàn), 血漿氨基酸含量與采樣時(shí)間顯著相關(guān)。奧尼羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus×O.aureus)血漿AST和ALT活性同樣受到采樣時(shí)間點(diǎn)的影響[26]。在吉富羅非魚(yú)(GIFT,Oreochromis niloticus)、卵形鯧鲹(Trachinotus ovatus)、軍曹魚(yú)(Rachycentron canadum)中均發(fā)現(xiàn), 魚(yú)類(lèi)血糖在餐后1—3h達(dá)到峰值, 且高糖組的血糖含量較低糖組顯著升高[12]。在飼喂羅非魚(yú)中、高脂肪水平飼料后, 血糖峰值出現(xiàn)在6h, 血清TAG峰值出現(xiàn)在餐后12h, 而TCHO的峰值受到飼料脂肪水平的影響[27]; 在另一個(gè)對(duì)羅非魚(yú)的研究中發(fā)現(xiàn), 在注射葡萄糖后血漿TAG水平快速上升, 在3h后達(dá)到峰值[12]。這些結(jié)果均表明魚(yú)類(lèi)攝食后, 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)進(jìn)行吸收、消化、代謝后,部分血液生化指標(biāo)會(huì)迅速升高, 達(dá)到某個(gè)峰值, 然后下降; 峰值的高低與飼料組成有關(guān), 也暗示部分血液指標(biāo)隨采樣時(shí)間點(diǎn)的不同出現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化, 且餐后時(shí)間與飼料存在交互作用, 這提示研究者在進(jìn)行魚(yú)類(lèi)血液指標(biāo)檢測(cè)時(shí), 需要保證不同處理組的采樣時(shí)間同步性, 即均在餐后同一時(shí)間點(diǎn)采樣, 否則將因采樣時(shí)間點(diǎn)的不同出現(xiàn)假陽(yáng)性差異。

3.2 高能量飼料對(duì)草魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

在已有的對(duì)魚(yú)類(lèi)血液學(xué)的研究報(bào)道中, 通常檢測(cè)饑餓24h的魚(yú)體血液生化指標(biāo), 因此為了所討論的結(jié)果具有可比性, 此部分僅討論本研究的24h實(shí)驗(yàn)結(jié)果。血清AST和ALT活性是反應(yīng)肝功能的靈敏指標(biāo)[28]。在本實(shí)驗(yàn)中, 3個(gè)高能組ALT活性顯著高于對(duì)照組, 而AST活性在餐后24h, 4個(gè)處理組間無(wú)顯著差異。郭小澤等在草魚(yú)上研究發(fā)現(xiàn)攝食高脂飼料(飼料脂肪含量8.2%)后, 血清AST和ALT活性較對(duì)照組(飼料脂肪含量3.1%)無(wú)顯著差異[10]; 而汪開(kāi)毓等[29]研究發(fā)現(xiàn)高脂組(飼料脂肪含量8.1%)草魚(yú)血清中AST、ALT活性極顯著高于對(duì)照組(飼料脂肪含量4.6%), 羅非魚(yú)中亦得到類(lèi)似結(jié)果[11]; 在羅非魚(yú)幼魚(yú)上亦發(fā)現(xiàn)血清中AST和ALT活性隨飼料碳水化合物水平的升高而升高(飼料能量隨碳水化合物水平的升高而升高)[30,31], 高糖飼料亦顯著提高了草魚(yú)這2種轉(zhuǎn)氨酶活性[10]; 但高蛋白飼料不影響星斑川鰈幼魚(yú)(Platichthys stellatus, Pallas 1788)血漿這2種轉(zhuǎn)氨酶活性[32]。這說(shuō)明對(duì)于不同魚(yú)類(lèi)高水平的脂肪和碳水化合物可能均會(huì)導(dǎo)致血清轉(zhuǎn)氨酶活性的升高, 對(duì)草魚(yú)肝功能造成一定損傷, 但損傷程度與飼料配方和養(yǎng)殖對(duì)象有關(guān)。

ALP活性與機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)免疫狀態(tài)有關(guān), 是體內(nèi)的一種解毒酶。在正常情況下, 血清中ALP活性較低, 當(dāng)肝臟或骨骼發(fā)生病變時(shí), 血清中ALP酶活性會(huì)升高[33]。在本實(shí)驗(yàn)中, 餐后24h, 4個(gè)處理組的草魚(yú)幼魚(yú)血清ALP活性無(wú)顯著差異。同樣在草魚(yú)上的研究發(fā)現(xiàn)高脂飼料不影響血清ALP活性, 但高糖飼料顯著提高了ALP活性[10]; 繆凌鴻等[34]在研究中發(fā)現(xiàn)高碳水化合物水平飼料對(duì)異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)血漿ALP活性無(wú)顯著影響; 而隨著飼料中脂肪含量的增加, 羅非魚(yú)血漿中ALP活性逐漸升高[11]; 高蛋白飼料同樣不影響星斑川鰈幼魚(yú)血漿ALP活性[32]。這些結(jié)果的差異, 可能與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān), 需要通過(guò)測(cè)免疫指標(biāo)進(jìn)一步闡述其機(jī)理。

葡萄糖為機(jī)體各組織行使生理功能提供能源,魚(yú)類(lèi)血糖濃度受到飲食、應(yīng)激、氣候、藥物等的影響, 并受神經(jīng)、內(nèi)分泌激素等調(diào)節(jié)[7]。同時(shí)魚(yú)類(lèi)對(duì)糖的耐受性較差, 在攝食后, 會(huì)迅速出現(xiàn)高血糖現(xiàn)象。在本實(shí)驗(yàn)中, 餐后2h血糖濃度達(dá)到峰值。餐后24h, 3個(gè)高能組的血糖含量顯著高于對(duì)照組。研究者報(bào)道高碳水化合物飼料會(huì)導(dǎo)致羅非魚(yú)、卵形鯧鲹、軍曹魚(yú)、翹嘴紅鲌(Erythroculter ilishaeformisBleeker)、南方鲇幼魚(yú)(Silurus meridionalisChen)和厚唇弱棘?(Hephaestus fuliginosus)等血糖濃度升高[12,35—37]。高脂飼料亦會(huì)導(dǎo)致羅非魚(yú)[38]、黃姑魚(yú)(Nibea albifloraRichardson)[39]血糖濃度升高。這些結(jié)果說(shuō)明魚(yú)類(lèi)血糖濃度的升高可能是為了快速代謝所攝入的過(guò)多糖或脂肪。

魚(yú)類(lèi)血脂(包括TAG、TCHO、HDLC和LDLC等)水平的變化與機(jī)體的新陳代謝、生理狀況密切相關(guān), 被廣泛地用來(lái)評(píng)價(jià)魚(yú)體的脂肪代謝能力。在本實(shí)驗(yàn)中, 餐后24h, 血清TAG、TCHO和HDLC含量4個(gè)處理組間均無(wú)顯著差異, 僅HP組血清LDLC含量較對(duì)照組顯著降低。郭小澤等[10]發(fā)現(xiàn)高糖和高脂飼料均會(huì)顯著提高血清TAG和TCHO含量; 汪開(kāi)毓等[29]研究發(fā)現(xiàn)高脂組草魚(yú)血清TAG和TCHO的含量均顯著高于低脂組。同時(shí)在長(zhǎng)期攝食高糖或者高脂飼料后, 羅非魚(yú)餐后24h血清TAG和TCHO含量均較對(duì)照組顯著升高[12,27,31]。前人的研究報(bào)告, 總體上得出高糖或高脂飼料會(huì)提高魚(yú)體血液中TAG和TCHO含量, 這些結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)在24h的結(jié)果存在差異, 但TAG結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)在8h的結(jié)果一致。本文認(rèn)為這可能與魚(yú)類(lèi)本身的消化吸收能力和代謝速率有關(guān), 草魚(yú)的腸道排空時(shí)間為12h[40], 羅非魚(yú)為18h[41], 而大部分肉食性或雜食性魚(yú)類(lèi)的胃腸排空時(shí)間超過(guò)24h, 如大西洋鮭(Salmo salarL.)餐后24h腸道仍然存在少量?jī)?nèi)容物,餐后48h才開(kāi)始消化完畢[42], 虹鱒為28—29h[43]。這也進(jìn)一步說(shuō)明在進(jìn)行魚(yú)類(lèi)血液生化指標(biāo)分析時(shí), 需要考慮水產(chǎn)動(dòng)物的血液指標(biāo)受到多種因素的影響,其在發(fā)生動(dòng)態(tài)變化, 因此, 為了得出更準(zhǔn)確的結(jié)論,一方面需要用其他指標(biāo)對(duì)血液生化指標(biāo)所得出的結(jié)論進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證, 另一方面應(yīng)考慮不同魚(yú)本身的代謝特性。

4 結(jié)論

草魚(yú)血清生化指標(biāo)受到餐后采樣時(shí)間點(diǎn)和飼料的顯著影響, 為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性, 需要保證不同處理組的采樣時(shí)間同步性, 即均在餐后同一時(shí)間點(diǎn)采樣, 同時(shí)需要用其他指標(biāo)對(duì)血液生化指標(biāo)所得出的結(jié)論進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。