劉文術(shù) 王賀 牛佳義

【摘要】目的 探討microRNA-432（miR-432）在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中的表達(dá)及其臨床意義。方法 采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者癌癥組織和非膠質(zhì)瘤患者腦組織中

miR-432的表達(dá)水平，并檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者和非膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)情況；結(jié)果 miR-432

在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)顯著低于正常腦組織（P=0.0019），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且其在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者血清中的表達(dá)顯著低于非神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者（P=0.0228），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

結(jié)論 miR-432具有抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活力和遷移能力的作用，有望成為膠質(zhì)瘤的潛在治療靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】microRNA；神經(jīng)膠質(zhì)瘤；U87細(xì)胞；活力；遷移

【中圖分類號(hào)】R739.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2019.10..01

神經(jīng)膠質(zhì)瘤（簡(jiǎn)稱為膠質(zhì)瘤）是一種發(fā)生在神經(jīng)外胚層的惡性腫瘤，是神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一（30%）。膠質(zhì)瘤具有生長(zhǎng)速度較快、治愈率低、術(shù)后復(fù)發(fā)率較高、存活率低、預(yù)后較差等特點(diǎn)，患者通常出現(xiàn)顱內(nèi)壓增高、癲癇、嘔吐等臨床癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命安全[1]。因此，膠質(zhì)瘤已成為臨床和基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)問題。

本研究主要探究miR-432在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中的表達(dá)及其臨床意義，為今后神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2018年1月我院收治的膠質(zhì)瘤患者的腦組織15例，并收集同期在我院接受治療的創(chuàng)傷性腦損傷患者腦組織15例作為正常對(duì)照組。膠質(zhì)瘤患者年齡10～75歲，平均（42.5±26.75）歲，其中男8例，女7例，根據(jù)《WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類》分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期1例，Ⅱ期3例，Ⅲ期3例，Ⅳ期8例。膠質(zhì)瘤患者年齡10～75歲，平均（41.75±27.05）歲，其中男8例，女7例。兩組患者在年齡、性別比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87細(xì)胞購于南京科佰生物科技有限公司（中國(guó)）。U87細(xì)胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素混合物的DMEM培養(yǎng)液（Hyclone公司，美國(guó)），并置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱（Thermo公司，美國(guó)）中培養(yǎng)。

1.3 RNA提取和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）

根據(jù)Trizol Reagent試劑（Invitrogen，美國(guó)）說明書提取組織、血清和細(xì)胞中總RNA，并使用NanoDrop2000檢測(cè)RNA濃度和純度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（ABI，美國(guó)）說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。

1.4 CCK-8實(shí)驗(yàn)

采用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力。首先，將細(xì)胞以1×104個(gè)細(xì)胞/孔密度接種于96孔板中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，在每孔中加入10 μL CCK-8溶液（北京百奧萊博，中國(guó)），孵育4小時(shí)。采用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處的吸光度。每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔取平均值，另設(shè)單孔只加入培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。首先，將細(xì)胞接種于六孔板中，細(xì)胞

轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，利用一次性進(jìn)口吸頭在每孔中豎直劃一條直線，用PBS（索萊寶，中國(guó)）清洗細(xì)胞，以去掉漂浮的細(xì)胞，然后更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。分別于0小時(shí)、24小時(shí)后觀鏡下觀察并拍照，對(duì)比不同時(shí)間細(xì)胞劃痕寬度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，用graphpad軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。t值用以檢驗(yàn)計(jì)量資料，x2用以檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，組間差異經(jīng)P值進(jìn)行判定，當(dāng)*P<0.05，

** P<0.0和***P<0.001時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

質(zhì)瘤患者和非膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)，結(jié)果顯示，與非膠質(zhì)瘤患者相比，膠質(zhì)瘤患者血清中miR-432的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0228<0.05）。

2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-432的表達(dá)量變化

CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與mimic-NC組相比，miR-432 mimic

顯著降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87細(xì)胞的活力，而與inhibitor-NC組相比，miR-432 inhibitor顯著升高U87細(xì)胞活力。

3 討 論

本研究應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-432在15例膠質(zhì)瘤患者的癌癥組織和15例非膠質(zhì)瘤患者的腦組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，miR-432在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)顯著降低。qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，miR-432在膠質(zhì)瘤患者血清中

miR-432的表達(dá)水平顯著低于非膠質(zhì)瘤患者。

參考文獻(xiàn)

[1] 賈紅英，王潔貞，趙敬杰，神經(jīng)膠質(zhì)瘤術(shù)后預(yù)后因素的研究.中華流行病學(xué)雜志，2003.24（3）：p.229-232.

本文編輯：趙小龍