周洋，孫昊，金志軍，吳玉仙，王成才

子宮內(nèi)膜癌（endometrial cancer，EC）為一組源自子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中排第2位，且呈現(xiàn)出逐年增高及年輕化趨勢[1-3]。同時因EC早期常無明顯臨床癥狀或僅存在輕微陰道出血、陰道流液等非特異性癥狀，易被患者忽視，部分患者確診時已進展為中晚期，臨床治療難度大，預后差[4-5]。因此，尋找一種有效的病理診斷及病情評價方法對提升臨床療效及患者總體生存率尤為重要。腫瘤標志物水平檢測為一種便捷、經(jīng)濟、無創(chuàng)的惡性腫瘤診斷方法，糖類抗原125（CA125）為高分子糖蛋白之一，是目前臨床應用最為廣泛的腫瘤標志物之一。近年有研究報道，CA125可參與子宮內(nèi)膜多種生理病理過程，其高表達和子宮內(nèi)膜組織病變程度密切相關[6-7]。葉酸受體α（FRα）是細胞表面和磷酸酰肌醇相錨連的糖蛋白，屬一種新型腫瘤標志物，有學者指出，其于正常組織內(nèi)表達極低，而約90%EC患者FRα呈高表達，且表達與腫瘤分期、分化程度有著密切關系[8]。本研究旨在探討EC組織中FRα與CA125的表達及臨床意義，為EC病理診斷及惡性程度評價提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年7月—2018年12月我院收治的62例EC患者作為EC組，選取同期42例子宮內(nèi)膜非典型增生患者作為非典型增生組，42例因子宮良性病變（臨床診斷排除內(nèi)膜病變）行全子宮切除術治療患者的正常子宮內(nèi)膜作為正常對照組。其中EC組年齡32～74歲，平均（51.35±7.92）歲；腫瘤分化程度：中低分化（G2～G3）43例，高分化（G1）19例；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期25例；腫瘤直徑：＜2 cm者34例，≥2 cm者28例；肌層浸潤深度：＜1/2者33例，≥1/2者29例；淋巴結轉(zhuǎn)移：有17例，無45例。非典型增生組年齡31～73歲，平均（52.06±8.15）歲。正常對照組年齡30～70歲，平均（50.84±8.37）歲。3組年齡相比，差異無統(tǒng)計學意義（F=0.240，P=0.787）。本研究經(jīng)第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 納入和排除標準

1.2.1 納入標準 ①EC組經(jīng)病理檢查確診為EC，病理分型均為子宮內(nèi)膜樣腺癌，初診患者；②非典型增生組與正常對照組均經(jīng)臨床診斷證實為子宮內(nèi)膜非典型增生患者和正常子宮內(nèi)膜患者；③3組均臨床資料完整，知曉本研究，簽訂知情同意書。

1.2.2 排除標準 ①既往行內(nèi)分泌治療或放化療者；②合并肝心腎肺等臟器功能嚴重異常者；③合并腦血管疾病、全身感染、其他類型惡性腫瘤者；④合并血液系統(tǒng)、精神系統(tǒng)疾病者。

1.3 研究方法

1.3.1 FRα、CA125表達測定 所有子宮內(nèi)膜組織標本均以多聚甲醛（4%）施行固定，制作石蠟切片（厚度為4 μm），應用免疫組織化學方法測定子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達。具體操作方法：將石蠟切片脫蠟、水化，應用檸檬酸緩沖液進行抗原修復，以正常山羊血清工作液室溫下孵育約15 min，滴加鼠抗人CA125單克隆抗體與鼠抗人FRα單克隆抗體在4℃條件下過夜，再滴加通用型二抗在室溫下孵育15 min，以二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，最后于光學顯微鏡下對切片染色情況進行觀察，檢測試劑盒由北京中山金橋生物有限公司提供。

1.3.2 結果判定標準 子宮內(nèi)膜組織標本FRα、CA125陽性信號定位于細胞膜和（或）細胞質(zhì)中，依照陽性細胞數(shù)和細胞染色強度以半定量積分法實施結果判定，每張切片選擇5個高倍鏡視野，觀察100個細胞，根據(jù)視野下陽性細胞占比進行評分：陽性細胞占比＞50%計3分，26%～50%計2分，11%～25%計1分，≤10%計0分；細胞染色強度：呈棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色為1分，不著色計0分；將兩項得分相乘，最終得分處于8～9分為“+++”，4～7分為“++”，1～3分為“+”，0分為“-”；當結果≥“+”時判定為陽性，并將“+++”、“++”歸為高表達，“+”和“-”歸為低表達[9]。

1.4 觀察指標 ①對比3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125的高表達率情況；②比較EC組患者不同腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度者FRα、CA125的表達差異；③分析EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達相關性；④隨訪EC組中術后滿1年的患者，比較FRα、CA125高表達者與低表達者的術后1年復發(fā)率，復發(fā)均經(jīng)計算機斷層掃描（CT）、磁共振成像（MRI）等影像學和（或）病理學證實。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計分析。定量資料用均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用單因素方差分析；定性資料用例數(shù)（百分比）表示，組間比較采用χ2檢驗；EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達相關性采用Spearman相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達情況EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125高表達率均高于非典型增生組及正常對照組（P＜0.05）。見表1，見圖1～6（見封三）。

表1 3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達情況比較例（%）

2.2 EC組不同臨床病理參數(shù)者FRα的表達差異比較 EC組不同腫瘤大小、有無淋巴結轉(zhuǎn)移者的FRα高表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤深度≥1/2的EC組患者FRα高表達率高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤深度＜1/2者（P＜0.05）。見表2。

表2 EC組不同臨床病理參數(shù)者FRα的表達差異比較例（%）

2.3 EC組不同臨床病理參數(shù)者CA125的表達差異比較 EC組不同腫瘤大小、有無淋巴結轉(zhuǎn)移者的CA125高表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤深度≥1/2的EC組患者CA125高表達率高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤深度＜1/2者（P＜0.05）。見表3。

表3 EC組不同臨床病理參數(shù)者CA125的表達差異比較例（%）

2.4 EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達Spearman相關性分析發(fā)現(xiàn)，EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達呈正相關（rs=0.328，P=0.009）。

2.5 FRα、CA125表達與EC患者1年復發(fā)率的關系在EC患者中選取術后滿1年的患者53例，以術后12個月為時間截點，隨訪術后1年復發(fā)率。結果發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜組織中FRα呈高表達者和低表達者的復發(fā)率分別為17.07%（7/41）和8.33%（1/12），差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.553，P=0.457）；CA125呈高表達者和低表達者的復發(fā)率分別為15.38%（6/39）和7.14%（1/14），差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.611，P=0.435）。

3 討論

EC好發(fā)于絕經(jīng)后及圍絕經(jīng)期女性，病因尚不完全闡明，多認為與高血壓、肥胖癥、糖尿病、多囊卵巢綜合征、未生育、大量使用外源性雌激素、遺傳等多種因素有關，EC起病較為隱匿，早期患者臨床癥狀、體征不明顯，晚期患者治療方法有限，預后差，尋找一種有效病理診斷及預后評價方法一直為臨床研究熱點[10-12]。

FRα為新型腫瘤標志物之一，在機體正常組織中幾乎不表達，而在卵巢癌、鼻咽癌、肺癌、乳腺癌等上皮源性腫瘤中具有較高表達，可參與腫瘤的發(fā)生、進展過程[13]。流行病學研究報道，葉酸攝入不足與腫瘤發(fā)生風險升高密切相關，葉酸經(jīng)小腸吸收后在二氫葉酸還原酶作用下可轉(zhuǎn)化為四氫葉酸，進而參與DNA合成需要的嘌呤前體、胸腺嘧啶脫氧核苷酸及細胞中甲基供體S-腺苷甲硫氨酸（SAM）生成，當葉酸缺乏時，機體SAM生成減少，影響DNA合成過程中嘧啶核苷酸甲基化，低甲基化可造成腫瘤抑制基因失活，致使癌基因突變，進而導致腫瘤發(fā)生、發(fā)展[14]。由細胞學水平而言，葉酸缺乏可致使細胞凋亡產(chǎn)生紊亂、新生血管生成加快，進而加速腫瘤發(fā)生[15]。而FRα于腫瘤組織中可經(jīng)胞吞作用有效地結合葉酸，F(xiàn)Rα高表達可造成葉酸相對缺乏，為腫瘤細胞生長及增殖創(chuàng)造有利條件[15-16]。沈祥麗等[17]研究報道，子宮內(nèi)膜樣腺癌（EEC）患者子宮內(nèi)膜組織中FRα陽性表達率顯著高于子宮內(nèi)膜增生和正常子宮內(nèi)膜患者。黎金顏等[18]研究指出，EC患者子宮內(nèi)膜組織FRα表達高于子宮內(nèi)膜增生和正常子宮內(nèi)膜患者，且表達與臨床分期、分化程度密切相關。本研究更為全面地分析了EC組織中FRα的高表達率及其在不同瘤體大小、腫瘤分化程度、肌層浸潤深度、臨床分期等病理參數(shù)患者中的表達差異，結果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα的高表達率顯著高于非典型增生組及正常對照組，且腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤深度≥1/2的EC組患者FRα高表達率均高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤深度＜1/2的患者（P＜0.05）。這表明EC組織中FRα呈高表達，且其表達水平在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤深度者中差異顯著，提示可將FRα高表達作為EC病理診斷與惡性程度評價的重要依據(jù)。

CA125為臨床應用較廣泛的腫瘤標志物，主要分布于子宮內(nèi)膜、卵巢等由體腔上皮所分化形成的組織，在正常分化細胞、組織中表達較低，而在肺癌、卵巢癌、乳腺癌、EC等上皮源性腫瘤中均高表達[19-20]。蔡鳳梅等[21]研究報道，EC組織中CA125陽性表達率顯著高于子宮內(nèi)膜增生患者，且與腫瘤臨床分期、浸潤深度關系密切。本研究全面探究了EC組織中CA125的高表達率及其在不同臨床病理參數(shù)患者中的表達差異，結果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中CA125的高表達率高于非典型增生組及正常對照組，且腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤深度≥1/2的EC患者CA125高表達率均高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤深度＜1/2者（P＜0.05）。這表明EC組織中CA125呈高表達，且在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤深度患者中表達差異有統(tǒng)計學意義，亦提示可將CA125高表達作為EC病理診斷與惡性程度評定的有力依據(jù)。

本研究EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達呈正相關（P＜0.05），表明FRα與CA125存在相關性，可協(xié)同參與EC發(fā)生、發(fā)展。本研究首次探討了EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125的高表達率與患者預后復發(fā)率的關系，結果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125具有高表達率者其復發(fā)率高于低表達率者，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。分析其原因可能與本研究樣本量較少有關，尚待增加樣本量后進一步研究。

綜上，EC組織中FRα、CA125均呈現(xiàn)高表達率，且在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤深度的患者表達有顯著差異，該結果可作為EC病理診斷和惡性程度評價的有效參考指標。