■馬青松 王衛(wèi)國(guó)

（河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，河南鄭州450001）

我國(guó)是飼料生產(chǎn)和使用大國(guó)，飼料在儲(chǔ)藏過(guò)程中，會(huì)受天氣、溫度、濕度、微生物活動(dòng)、害蟲等因素影響，儲(chǔ)藏不當(dāng)時(shí)會(huì)發(fā)生不同程度的劣變。霉菌生長(zhǎng)與繁殖需要的環(huán)境包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、合適的溫度、氧氣及可利用的游離水等，當(dāng)這些條件滿足時(shí)，飼料的霉變就會(huì)發(fā)生[1]，飼料霉變產(chǎn)生的霉菌毒素對(duì)飼料安全構(gòu)成極大的威脅[2]。飼料安全不僅關(guān)系到飼料生產(chǎn)企業(yè)、養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，也直接關(guān)系到國(guó)民舌尖上的安全。

在飼料中正確使用防霉劑，可有效抑制飼料的霉變，為飼料的安全儲(chǔ)藏與使用提供保障。目前飼料生產(chǎn)中大多添加固體防霉劑，隨著液體防霉劑的研發(fā)及添加技術(shù)的升級(jí)，越來(lái)越多的企業(yè)將液體防霉劑應(yīng)用于飼料生產(chǎn)[3-4]。到目前為止，有關(guān)液體防霉劑對(duì)飼料儲(chǔ)藏及飼料品質(zhì)影響的研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)將添加不同防霉劑的顆粒飼料存放在帶內(nèi)膜編織袋里進(jìn)行儲(chǔ)藏模擬試驗(yàn)，考察不同防霉劑對(duì)儲(chǔ)藏期間飼料品質(zhì)的影響，以期獲得有價(jià)值的數(shù)據(jù)，為防霉劑的合理選擇和使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選用的育肥豬配合飼料的基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，選用三種不同品牌的液體防霉劑A（成分為丙酸等）、B（成分為表面活性劑、丙酸、丙酸銨等）、C（成分為丙酸、丙酸銨、表面活性劑等）及一種固體防霉劑。

1.2 主要儀器

智能型生化培養(yǎng)箱SPX-250B：上海瑯玕實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；ZXMP 系列曲線控制十段編程恒溫恒濕箱：上海智城分析儀器制造有限公司生產(chǎn)；電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海市實(shí)驗(yàn)總廠生產(chǎn)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)，%）

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)分組

本試驗(yàn)分為5個(gè)試驗(yàn)組，每組3個(gè)重復(fù)，即對(duì)照組（不添加防霉劑）、液體防霉劑A組、液體防霉劑B組、液體防霉劑C組、固體防霉劑組。將三種液體防霉劑及固體防霉劑根據(jù)推薦的添加量及添加方法分別添加入飼料并混合均勻，得到粉狀飼料樣品，然后在蒸汽壓力0.2 MPa、環(huán)模孔徑3 mm條件下制成顆粒飼料，并進(jìn)行干燥冷卻，干燥冷卻后顆粒產(chǎn)品的水分含量見(jiàn)表2。

表2 試驗(yàn)樣品水分含量

1.3.2 儲(chǔ)藏試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)定3 種儲(chǔ)藏條件，分別為低溫低濕條件（溫度15 ℃、相對(duì)濕度50%）、中溫中濕條件（溫度28 ℃、相對(duì)濕度75%）及高溫高濕條件（溫度35 ℃、相對(duì)濕度85%）。每個(gè)試驗(yàn)組的飼料樣品同一種條件下儲(chǔ)藏12 袋，儲(chǔ)藏期為60 d，儲(chǔ)藏期自0 d 開(kāi)始以后每隔10 d 采樣1 次，采樣時(shí)每種儲(chǔ)存條件的每個(gè)試驗(yàn)組樣品取出兩袋，指標(biāo)測(cè)定時(shí)先將取出的兩袋樣品混合均勻后按各試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，其中儲(chǔ)藏期為0 d 的指標(biāo)測(cè)定是在封裝前取出每個(gè)試驗(yàn)組代表性樣品進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)測(cè)定的指標(biāo)分別為：水分含量、脂肪酸值、霉菌總數(shù)及細(xì)菌總數(shù)。

1.4 指標(biāo)測(cè)定方法

水分含量：采用GB/T 6435—2014的方法測(cè)定；

脂肪酸值：采用GB/T 5510—2011的方法測(cè)定；

霉菌總數(shù)：采用GB/T 13092—2006的方法測(cè)定；

細(xì)菌總數(shù)：采用GB/T 13093—2006的方法測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel2013、SPSS 18.0進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，并繪制圖表，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 添加不同防霉劑的顆粒飼料在不同儲(chǔ)藏條件下水分含量變化

2.1.1 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下飼料水分含量的變化（見(jiàn)表3）

表3 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下水分含量的變化(%)

由表3 可知，在0～60 d 的儲(chǔ)藏期內(nèi)，隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，液體防霉劑A組、液體防霉劑B組、液體防霉劑C組、固體防霉劑組及對(duì)照組水分含量變化趨勢(shì)總體相同，均呈下降趨勢(shì)。溫度15 ℃、相對(duì)濕度50%儲(chǔ)存環(huán)境屬于較低的溫濕度條件，飼料在儲(chǔ)藏過(guò)程中受到環(huán)境的影響自身水分會(huì)有一定的散失，導(dǎo)致自身水分含量下降。

2.1.2 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下飼料水分含量變化(見(jiàn)表4)

表4 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下水分含量的變化(%)

由表4 可知，在溫度28 ℃、相對(duì)濕度75%儲(chǔ)藏環(huán)境中，儲(chǔ)藏期的0～60 d 內(nèi)液體防霉劑A 組、液體防霉劑B 組、液體防霉劑C 組的水分含量有一定的波動(dòng)，但變化不大，且到60 d的儲(chǔ)存期結(jié)束時(shí)三個(gè)添加液體防霉劑的試驗(yàn)組樣品的水分含量均低于0 d的水分含量。固體防霉劑組與對(duì)照組的水分含量整體呈上升的趨勢(shì)，到了儲(chǔ)存期60 d 時(shí)，兩個(gè)試驗(yàn)組的水分含量均高于0 d 時(shí)的水分含量，雖然試驗(yàn)期開(kāi)始時(shí)二者水分含量無(wú)顯著差異（P＞0.05），但到儲(chǔ)存期的50～60 d時(shí)，對(duì)照組的水分含量高于固體防霉劑組（P＜0.05）。0 d時(shí)液體防霉劑C組的水分含量高于對(duì)照組和固體防霉劑組，但是隨著儲(chǔ)存期的延長(zhǎng)，到60 d 儲(chǔ)存期結(jié)束時(shí)液體防霉劑C 組的水分含量下降且低于對(duì)照組和固體防霉劑組的水分含量（P＜0.05）。

2.1.3 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下飼料水分含量變化（見(jiàn)表5）

表5 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下水分含量的變化(%)

由表5可知，在溫度35 ℃、相對(duì)濕度85%高溫高濕儲(chǔ)藏環(huán)境中，儲(chǔ)藏期的0～60 d內(nèi)，四個(gè)添加不同防霉劑的試驗(yàn)組與對(duì)照組的水分含量總體上呈上升的趨勢(shì)，60 d儲(chǔ)存期結(jié)束時(shí)的水分含量均高于儲(chǔ)存期開(kāi)始時(shí)0 d的水分含量，對(duì)照組、固體防霉劑水分含量上升的幅度高于其它三個(gè)添加液體防霉劑的試驗(yàn)組，且與初始水分含量相比對(duì)照組與固體防霉劑的水分含量上升了約3%左右。雖然0 d時(shí)液體防霉劑C組的水分含量高于對(duì)照組和固體防霉劑組（P＜0.05），但到儲(chǔ)藏期60 d時(shí)，對(duì)照組和固體防霉劑組的水分含量均高于液體防霉劑C組的水分含量（P＜0.05）。而液體防霉劑A組和B組則表現(xiàn)出更好的抑制飼料在儲(chǔ)藏中吸收水分增加的能力。

2.2 添加不同防霉劑對(duì)顆粒飼料在不同儲(chǔ)藏條件下脂肪酸值的影響

2.2.1 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下飼料脂肪酸值的變化（見(jiàn)表6）

表6 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下脂肪酸值的變化(mg/100 g)

由表6可知，儲(chǔ)藏初期各試驗(yàn)組之間脂肪酸值差異不顯著（P＞0.05），儲(chǔ)藏期為20 d 時(shí)，對(duì)照組及固體防霉劑組脂肪酸值顯著高于液體防霉劑B、C 組（P＜0.05）。在儲(chǔ)藏期40 d 時(shí)，對(duì)照組的脂肪酸值明顯高于其他添加防霉劑的試驗(yàn)組（P＜0.05）。在整個(gè)60 d的儲(chǔ)藏周期內(nèi)，各個(gè)試驗(yàn)組脂肪酸值隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)均呈升高的趨勢(shì)，而液體防霉劑A組表現(xiàn)出最好的抑制脂肪酸值增加的能力。

2.2.2 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下飼料脂肪酸值的變化（見(jiàn)表7）

表7 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下脂肪酸值測(cè)定結(jié)果(mg/100 g)

由表7可知，儲(chǔ)藏初期各試驗(yàn)組之間脂肪酸值差異不顯著（P＞0.05），而在儲(chǔ)藏20 d 時(shí)，對(duì)照組的脂肪酸值明顯高于其他4 個(gè)添加防霉劑的試驗(yàn)組（P＜0.05）,并且在20～60 d對(duì)照組的脂肪酸值開(kāi)始降低，而固體防霉劑組儲(chǔ)藏期為30 d開(kāi)始降低，這說(shuō)明對(duì)照組在儲(chǔ)藏20 d、固體防霉劑組在40 d之后開(kāi)始發(fā)生了逐漸加強(qiáng)的二次氧化。而三個(gè)液體防霉劑組在整個(gè)儲(chǔ)藏期內(nèi)呈升高的趨勢(shì)。

2.2.3 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下飼料脂肪酸值的變化（見(jiàn)表8）。

表8 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下脂肪酸值的變化(mg/100 g)

由表8 可知，在高溫高濕儲(chǔ)藏環(huán)境下，0～60 d 內(nèi)各試驗(yàn)組和對(duì)照組脂肪酸值的變化趨勢(shì)與中溫中濕儲(chǔ)藏條件下的變化趨勢(shì)相同。而對(duì)照組和固體防霉劑組的脂肪酸值由峰值開(kāi)始下降的起始天數(shù)更早，對(duì)照組和固體防霉劑組都是20 d之后，且下降速度非?？欤砻鞫窝趸姆浅×?，因而飼料品質(zhì)會(huì)有顯著的劣變。而三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組在0～60 d 的儲(chǔ)藏期內(nèi)，脂肪酸值隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，表明一次氧化還在進(jìn)行。三種液體防霉劑的抑制氧化能力都較好。而液體防霉劑A 則表現(xiàn)出最好的抑制脂肪氧化能力。

2.3 添加不同防霉劑對(duì)不同儲(chǔ)藏條件下飼料霉菌總數(shù)的影響

2.3.1 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下飼料霉菌總數(shù)變化(見(jiàn)表9)

表9 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下霉菌總數(shù)的變化（CFU/g）

由表9 可知，在該種儲(chǔ)藏條件下，因環(huán)境溫度及濕度均處于較低水平，不利于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，5個(gè)試驗(yàn)組飼料樣品在整個(gè)60 d的儲(chǔ)藏期內(nèi)均未出現(xiàn)霉變。

2.3.2 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下霉菌總數(shù)變化（見(jiàn)表10）

表10 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下霉菌總數(shù)的變化（CFU/g）

由表10 可知，在儲(chǔ)藏期的0～30 d，5 個(gè)試驗(yàn)組飼料樣品均未檢測(cè)到霉菌。在儲(chǔ)藏期40～60 d，對(duì)照組和固體防霉劑組霉菌開(kāi)始大量增長(zhǎng)，到60 d 時(shí)對(duì)照組、固體防霉劑組的霉菌總數(shù)均超過(guò)GB 13078—2017中對(duì)飼料原料的最高允許量4×104CFU/g。而三個(gè)液體防霉劑組在儲(chǔ)藏期的0～60 d 內(nèi)均未檢測(cè)到霉菌。

2.3.3 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下霉菌總數(shù)變化（見(jiàn)表11）

由表11可知，該儲(chǔ)藏環(huán)境的溫、濕度均處于較高水平，飼料更容易發(fā)生霉變。在儲(chǔ)藏期的前20 d，五個(gè)試驗(yàn)組飼料樣品均沒(méi)有檢測(cè)到霉菌。儲(chǔ)藏期的30～50 d，對(duì)照組霉菌加速生長(zhǎng)，發(fā)生霉變，50～60 d內(nèi)霉菌數(shù)量急劇增長(zhǎng)，達(dá)到2.6×105CFU/g，固體防霉劑組的霉菌總數(shù)也達(dá)到2.0×105CFU/g，均超過(guò)GB 13078—2017中對(duì)飼料原料的最高允許量。而三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組在0～50 d 內(nèi)未檢查到霉菌，在60 d 時(shí)，開(kāi)始檢測(cè)到少量霉菌。上述結(jié)果表明，三種液體防霉劑對(duì)霉菌生長(zhǎng)的抑制作用顯著，且在三者之間防霉效果無(wú)顯著差異。

2.4 添加不同防霉劑飼料在不同儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)變化規(guī)律

2.4.1 低溫低濕儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)變化（見(jiàn)表12）

表11 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下霉菌總數(shù)的變化（CFU/g）

由表12可知，在溫度15 ℃、相對(duì)濕度50%的儲(chǔ)藏條件下，在0～60 d內(nèi)對(duì)照組及固體防霉劑組細(xì)菌總數(shù)的增長(zhǎng)速度較小，而三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組在0～60 d內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)無(wú)顯著增加。

2.4.2 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)變化（見(jiàn)表13）

由表13可知，在溫度28 ℃、相對(duì)濕度75%的儲(chǔ)藏環(huán)境中，在0～60 d內(nèi)對(duì)照組及固體防霉劑組細(xì)菌總數(shù)的增長(zhǎng)速度較小，而三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組在0～60 d內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)無(wú)顯著增加。

2.4.3 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)變化（見(jiàn)表14）

表13 中溫中濕儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)的變化（×103 CFU/g）

表14 高溫高濕儲(chǔ)藏條件下細(xì)菌總數(shù)的變化（×103 CFU/g）

由表14 可知，在溫度35 ℃、相對(duì)濕度85%的儲(chǔ)藏環(huán)境中的飼料樣品，在0～60 d 內(nèi)對(duì)照組及固體防霉劑組細(xì)菌總數(shù)的增長(zhǎng)速度較小，而三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組在0～60 d 內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)無(wú)顯著增加。以上結(jié)果表明，上述儲(chǔ)藏條件下飼料中細(xì)菌的生長(zhǎng)不明顯。

3 討論

3.1 不同防霉劑對(duì)顆粒飼料水分含量的影響

飼料水分含量會(huì)受儲(chǔ)存環(huán)境溫、濕度的直接影響，這是因?yàn)閮?chǔ)存環(huán)境的溫、濕度會(huì)影響飼料的平衡水分。本研究中的低溫低濕儲(chǔ)存環(huán)境（溫度15 ℃、相對(duì)濕度50%）飼料樣品的水分含量均有不同程度的降低，高溫高濕儲(chǔ)存環(huán)境（溫度35 ℃、相對(duì)濕度85%）飼料樣品水分含量均有不同的升高，該變化規(guī)律和石華樂(lè)[5]的研究結(jié)果較為相似。對(duì)于本研究的中溫中濕儲(chǔ)存環(huán)境（溫度28 ℃、相對(duì)濕度75%），添加液體防霉劑的三個(gè)試驗(yàn)組儲(chǔ)存結(jié)束時(shí)的水分含量和其初始水分含量雖然有一定變化但是變化幅度較小，這是因?yàn)轱暳系某跏妓趾驮摥h(huán)境條件下的平衡水分比較接近且微生物活動(dòng)較少，故水分含量能保持相對(duì)穩(wěn)定。中溫中濕條件下，雖然液體防霉劑C 組儲(chǔ)藏期0 d 時(shí)水分含量高于對(duì)照組和固體防霉劑組，但儲(chǔ)藏期60 d 水分含量有所下降且比后兩者都低，這是因?yàn)橐后w防霉劑能夠有效的防止霉菌的生長(zhǎng)繁殖使水分含量不易受到微生物影響。固體防霉劑和對(duì)照組的飼料樣品水分含量在儲(chǔ)存結(jié)束時(shí)高于初始水分且檢測(cè)到大量霉菌，此原因是霉菌的生長(zhǎng)過(guò)程會(huì)消耗飼料的養(yǎng)分產(chǎn)生大量水分，該結(jié)果和魏金濤[6]的研究結(jié)果類似。

3.2 不同防霉劑對(duì)飼料脂肪酸值的影響

在儲(chǔ)藏不當(dāng)?shù)臈l件下，飼料所含脂肪易受到溫度、水分、微生物活動(dòng)等的影響，發(fā)生氧化酸敗，品質(zhì)劣變。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，低溫低濕環(huán)境下，試驗(yàn)組的顆粒飼料樣品脂肪酸值在儲(chǔ)存期內(nèi)呈上升的趨勢(shì)，該結(jié)果與魏金濤[6]、何健等[7]的研究一致。在中溫中濕和高溫高濕儲(chǔ)藏條件下，三個(gè)液體防霉劑組脂肪酸值在整個(gè)儲(chǔ)存期內(nèi)呈升高趨勢(shì)，而對(duì)照組和固體防霉劑組的脂肪酸值則先升高后下降，并且結(jié)合霉菌、細(xì)菌等微生物的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂肪酸值出現(xiàn)下降時(shí)，均伴隨著微生物開(kāi)始繁殖，脂肪二次氧化加重。而液體防霉劑組在整個(gè)儲(chǔ)存期內(nèi)均未出現(xiàn)脂肪酸值下降的現(xiàn)象，這與石華樂(lè)等[8]的研究一致，且與王明潔等[9]對(duì)脂肪酸值曲線出現(xiàn)“先升后降”現(xiàn)象可能與微生物有關(guān)的推測(cè)較為相符。

3.3 不同防霉劑對(duì)微生物的影響

飼料中霉菌的生長(zhǎng)繁殖除了受飼料本身的水分含量影響外，不當(dāng)儲(chǔ)存條件會(huì)導(dǎo)致霉菌的大量生長(zhǎng)繁殖甚至產(chǎn)生霉菌毒素，而添加防霉劑可有效控制飼料中霉菌的發(fā)生[10]。杜莉等[11]研究發(fā)現(xiàn)液體防霉劑與空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組相比能夠延緩飼料的霉變，使飼料的保存期得到延長(zhǎng)。韓康印等[12]研究發(fā)現(xiàn)，液體防霉劑可以破壞霉菌的生存環(huán)境進(jìn)而防止飼料霉變。

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，低溫低濕條件下霉菌、細(xì)菌均難以大量生長(zhǎng)繁殖。而在中溫中濕、高溫高濕環(huán)境下，不添加防霉劑組和添加固態(tài)防霉劑組，霉菌、細(xì)菌在儲(chǔ)存后期生長(zhǎng)增強(qiáng)，儲(chǔ)存60 d時(shí)霉菌總數(shù)均超過(guò)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的飼料原料霉菌總數(shù)限量值（4 ×104CFU/g）。但添加三種液體防霉劑的試驗(yàn)組在整個(gè)儲(chǔ)存期的不同儲(chǔ)存條件下，霉菌均無(wú)顯著增長(zhǎng)。表明三種液體防霉劑均能有效防止飼料霉變。對(duì)于細(xì)菌而言，在整個(gè)儲(chǔ)存期內(nèi)，參與試驗(yàn)的各組樣品在不同儲(chǔ)藏條件下，細(xì)菌總數(shù)未出現(xiàn)顯著增長(zhǎng)。其中僅對(duì)照組及固體防霉劑組的細(xì)菌含量高于三個(gè)液體防霉劑試驗(yàn)組。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中使用的三種液體防霉劑在試驗(yàn)期內(nèi)能夠有效抑制飼料中水分的增加，延緩飼料中脂肪的氧化，抑制飼料中霉菌、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，保持飼料的質(zhì)量穩(wěn)定。其中以液體防霉劑A的效果最佳。