馬昌豪，曲智雅，仝桂平，李懷偉

(菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,山東 菏澤 274000)

三七傷藥片為《中國(guó)藥典》2015年版一部收載品種。該制劑由三七、制草烏、骨碎補(bǔ)、接骨木、赤芍、紅花、冰片、雪上一枝蒿8味藥材制成，除冰片外，制草烏、三七、雪上一枝蒿粉碎成細(xì)粉；冰片研細(xì)；其余四味加水煎煮后與細(xì)粉混合制成。該藥為活血消腫劑，具有舒筋活血，散瘀止痛功效[1-2]。該藥療效顯著，臨床應(yīng)用較多?，F(xiàn)行研究主要集中在該藥的藥理作用及活性成分，對(duì)其重金屬及有害元素的分析尚無(wú)報(bào)道，重金屬及有害元素容易在體內(nèi)蓄積，超過(guò)一定量后易對(duì)人體產(chǎn)生較大的危害[3]，該藥部分藥材為原粉投料，制劑存在重金屬污染的風(fēng)險(xiǎn)，因此測(cè)定三七傷藥片的重金屬及有害元素對(duì)于保證人民群眾用藥安全和藥品質(zhì)量具有重要的意義。

目前重金屬及有害元素的測(cè)定方法有原子吸收分光光度法、原子熒光法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)。其中電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)可以同時(shí)測(cè)定多種元素，具有準(zhǔn)確、快速、靈敏度高的特點(diǎn)[4]。本研究采用微波消解對(duì)樣品進(jìn)行前處理，利用ICP-MS對(duì)三七傷藥片中的五種重金屬及有害元素(鉛、鎘、砷、汞、銅)進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。

1 儀器與試藥

ETHOS UP微波消解儀(Milestonesrl公司)，7700 Series ICP-MS(Agilent Technologies),XS-105電子天平(瑞士梅特勒公司)，Milli-Q超純水儀(Millipore公司)雙氧水為分析純，硝酸為優(yōu)級(jí)純。

鉛、鎘、砷、銅、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心 濃度均為1000μg/mL)，金標(biāo)準(zhǔn)溶液(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院 濃度：1000μg/mL 批號(hào)：GSB 04-1715-2004)，內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液(Agilent Technologies 濃度：100μg/mL批號(hào)：20-41VYY2)。

標(biāo)樣(按照三七傷藥片處方比例自制)，其余樣品為抽檢樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別精密量取鉛、鎘、砷、銅、汞各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加10%硝酸逐級(jí)稀釋，制成每1mL含鉛、砷0ng、1ng、5ng、10ng、20ng，含鎘0ng、0.5ng、2.5ng、5ng、10ng，含銅0ng、50ng、100ng、200ng、500ng，含汞0ng、0.2ng、0.5ng、1ng、2ng、5ng的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密量取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用水稀釋制成每1mL含Ge、In、Bi各1μg的混合溶液。精密量取金標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用1.5mol/L的HCl逐級(jí)稀釋，制成濃度為1μg/mL的金單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將供試品粉碎，取粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸7mL和3mL雙氧水，混勻，放置過(guò)夜。密閉，置微波消解儀中按照表1中的程序消解，消解完畢后，將消解液轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1μg/mL)200μL，用水稀釋至刻度，離心取上清液，即得。除不加金單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液外，余同法制備試劑空白溶液。

表1 程序升溫表

2.4 測(cè)定方法

測(cè)定時(shí)選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，114Cd以115In作為內(nèi)標(biāo)，202Hg、208Pb以209Bi作為內(nèi)標(biāo)。依次將儀器的樣品管插入各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液中進(jìn)行測(cè)定(濃度依次遞增)，以測(cè)量值(3次讀數(shù)的平均值)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測(cè)定，取3次讀數(shù)的平均值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算得相應(yīng)的濃度。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

參照2.4項(xiàng)下測(cè)定方法，以測(cè)量值為縱坐標(biāo)，以各元素濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表2 。

表2 五種元素標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

2.5.2 精密度試驗(yàn)

取自制標(biāo)樣一份，按照2.3項(xiàng)下方法處理，重復(fù)測(cè)定6次，分別計(jì)算各元素的響應(yīng)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，鉛、鎘、砷、銅、汞的分別為1.1%、1.0%、0.9%、1.3%、0.6%，精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取自制標(biāo)樣六份，按照2.3項(xiàng)下方法處理，分別測(cè)定，計(jì)算各元素的響應(yīng)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，鉛、鎘、砷、銅、汞的分別為1.6%、2.2%、1.7%、1.3%、2.6%，重復(fù)性良好。

2.5.4 檢測(cè)限

制備樣品空白，連續(xù)測(cè)定7次，以3倍空白溶液的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以線性關(guān)系系數(shù)作為不同元素的檢測(cè)限。鉛、鎘、砷、銅、汞的檢測(cè)限分別為0.02mg/kg、0.01mg/kg、0.005mg/kg、0.03mg/kg、0.007mg/kg。

2.5.5 回收試驗(yàn)

取自制標(biāo)樣六份各0.5g，精密稱定，分別加入適量濃度的對(duì)照品溶液，按照2.3項(xiàng)供試品溶液制備方法處理樣品，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)表3可知，該方法準(zhǔn)確度良好。

表3 五種元素回收率

2.6 樣品測(cè)定結(jié)果

三七傷藥片無(wú)重金屬限度檢查，但該藥品中有部分原粉投料，并無(wú)礦石類藥材投料，可參照《中國(guó)藥典》中藥材重金屬及有害元素檢查項(xiàng)下的限度作為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)16批次三七傷藥片樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 16批次樣品五種元素含量

根據(jù)測(cè)定結(jié)果可知：16批次樣品的重金屬及有害元素均低于限度要求。

3 討論

三七傷藥片為復(fù)方制劑，含有較多的有機(jī)物，微波消解程度對(duì)重金屬及有害元素測(cè)定數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性有重要的影響，通過(guò)比較不同消解溶液，結(jié)合微波消解儀的使用要求，最終確定采用硝酸7mL和3mL雙氧水作為消解液。

藥物安全性評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要因素，中藥材及飲片受生長(zhǎng)環(huán)境及產(chǎn)地加工的影響，重金屬及有害元素的限量一直是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵性因素，現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)部分藥材的重金屬及有害元素的限度進(jìn)行規(guī)定，制劑標(biāo)準(zhǔn)很少涉及到安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)ICP-MS通過(guò)測(cè)定三七傷藥片中重金屬及有害元素的測(cè)定，是對(duì)其安全性評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)方法的探索，該方法準(zhǔn)確、快捷、重現(xiàn)性好，靈敏度高，能夠滿足方法學(xué)要求，為完善三七傷藥片標(biāo)準(zhǔn)的安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)要求提供參考。按照該方法檢驗(yàn)，抽檢的16批次三七傷藥片的重金屬及有害元素含量均低于的限度要求，說(shuō)明生產(chǎn)企業(yè)的原料采購(gòu)及生產(chǎn)過(guò)程控制在重金屬攝入方面安全性能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。