胡志國，鐘彩麗，何林才,姜學涯，苑婷婷

(深圳凱吉星農(nóng)產(chǎn)品檢測認證有限公司，廣東 深圳 518111)

豆芽是一種四季皆可生產(chǎn)且物美價廉的蔬菜，富含Vc、氨基酸、膳食纖維等對人體益的成分，且脂肪與膽固醇含量很低，深受廣大消費者喜愛[1]。4-氯苯氧乙酸，做為一種植物生長調(diào)節(jié)劑，在豆芽的生產(chǎn)中使用十分廣泛。但由于其對人體具有一定的毒性積累作用?！秶沂称匪幤繁O(jiān)督管理總局 農(nóng)業(yè)部 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會關于豆芽生產(chǎn)過程中禁止使用6-芐基腺嘌呤等物質(zhì)的公告(2015第11號)》已經(jīng)明令禁止在豆芽生產(chǎn)中使用4-氯苯氧乙酸這種物質(zhì)。

目前，測定豆芽中的4-氯苯氧乙酸，很多采用高效液相色譜法[2-7]。這種方法由于采用保留時間定性，有時可能存在假陽性的結(jié)果?！禨N/T 3725-2013中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準 出口食品中對氯苯氧乙酸殘留量的測定》[8]采用了液質(zhì)聯(lián)用的方法。但該方法操作過程繁瑣，消耗有機溶劑多，越來越不能滿足檢測機構(gòu)對于豆芽中4-氯苯氧乙酸的測試要求。本方法采用乙酸乙酯在酸性環(huán)境下提取，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定豆芽中的4-氯苯氧乙酸。該方法消耗溶劑少，操作簡單易行，比較適合大批量的檢測任務。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

Thermo U3000液相色譜(塞默飛世爾科技(中國)有限公司)；AB API 5500串聯(lián)質(zhì)譜儀配有電噴霧離子源(上海愛博才思分析儀器貿(mào)易有限公司)；振蕩器(逗點生物技術(shù)有限公司)；離心機(塞默飛世爾科技(中國)有限公司)；氮吹儀(美國Organomation公司)； 旋渦均質(zhì)器(艾卡(廣州)儀器設備有限公司)； 有機濾膜：0.22μm； 50mL具塞聚丙烯離心管。4-氯苯氧乙酸標準物質(zhì)：純度98%(上海安譜實驗科技股份有限公司)。甲醇：色譜純(J.T.Baker有限公司)； 乙酸乙酯：色譜純(J.T.Baker有限公司)；氯化鈉：分析純(天津市永大化工有限公司)；甲酸：分析純(成都金山化學試劑有限公司)；氫氧化鈉：分析純(臺山粵僑試劑塑料有限公司)。

1.2 實驗步驟

準確量取5 g粉粹好的豆芽樣品，置于50mL離心管中，加入0.02 mol/L 的氫氧化鈉溶液5 mL，2 g氯化鈉，渦旋振蕩搖勻后加入2滴甲酸溶液再加入10 mL乙酸乙酯溶液，振蕩30 min。以5000 r/min的速度離心2 min。取上清液2 mL 于45 ℃氮吹至干，用1.0mL甲醇溶解，旋渦30秒，過0.22 m有機過濾膜，上機測試。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

a)色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18 2.1mm×50mm×1.7 m Column

b)進樣量：1 L；

c)柱溫：35℃；

d)梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 質(zhì)譜條件

a)離子源：電噴霧離子源；

b)掃描方式：負離子掃描；

c)檢測方式:多反應監(jiān)測(MRM)；

d) 電噴霧電壓：-4500V；

e)霧化氣壓力：50psi；

f)氣簾氣壓力：30psi；

g)輔助氣流速：50psi；

h)離子源溫度：550 ℃；

j) 定性離子對、定量離子對、采集時間、去簇電壓及碰撞能量見表2。

表2 4-氯苯氧乙酸的質(zhì)譜參數(shù)

*為定量離子對

2 結(jié)果與討論

2.1 定性分析

在上述液相色譜-質(zhì)譜條件下進行測定，試液中待測物質(zhì)色譜峰保留時間與基質(zhì)標準工作溶液保留時間偏差在±2.5%以內(nèi)，各離子的相對豐度應與標準品的相對豐度一致，且樣品中各離子對的相對豐度與濃度接近的基質(zhì)標準工作溶液中對應的離子對的相對豐度進行比較，偏差不超過表3的規(guī)定的范圍，可判定樣品中存在對應的待測物[8]。

表3 定性測試時相對離子豐度最大允許偏差

在此條件下，4-氯苯氧乙酸的標準溶液液相色譜串聯(lián)質(zhì)多反應監(jiān)測色譜圖如圖1所示。

圖1 4-氯苯氧乙酸的標準溶液液相色譜串聯(lián)質(zhì)多反應監(jiān)測色譜圖

Graphic1 4-Chlorophenoxyaceticacid

2.2 定量分析

采用基質(zhì)溶液，配制1.0ng/mL,5.0ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL工作標準溶液進行上機測試，得到4-氯苯氧乙酸的標準黃線方程為Y=7.73070×104X+7.22673×104，相關系數(shù)r=0.99987。

2.3 回收率

稱取6份5.00g(精確至0.01g)不含4-氯苯氧乙酸的豆芽樣品，分別加入濃度為1 g/mL的標準溶液50 L、50 L、100 L、100 L，加入濃度為10 g/mL的標準溶液50 L、50 L。此時添加的4-氯苯氧乙酸相當于0.01、0.01、0.02、0.02、0.1、0.1mg/kg的水平。按處理樣品同樣的方式進行處理，測試。得到的回收率見表4。

表4 4-氯苯氧乙酸回收率

2.4 檢出限

1.0ng/mL(相當于樣品中含量為0.001mg/kg)的4-氯苯氧乙酸的基質(zhì)標準溶液在此分析條件下的信噪比為22.4，遠遠低于SN/T 3725-2013中關于檢出限為0.01mg/kg(信噪比等于3)的要求。

2.5 結(jié)論

按此方法對豆芽中的4-氯苯氧乙酸進行檢測，可以節(jié)省大量的有機溶劑(正己烷、乙酸乙酯)，節(jié)約大量的凈化時間，檢測結(jié)果也能滿足標準的對于檢出限、回收率要求。對于一些食品檢測機構(gòu)檢測樣品多，檢測時間要求緊張的任務來說，此方法不失為一個比較好的選擇。