趙青海 胡 毅

（1.北京中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司，北京100193；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢430070）

土霉素鈣屬于四環(huán)素類抗生素， 抗菌譜較廣。 自2017 年硫酸粘桿菌素在飼料中禁用之后， 土霉素鈣作為替代品大量使用在各個(gè)階段的主商品飼料中， 作為主要的抗生素品種，對(duì)于減少仔豬斷奶腹瀉， 促進(jìn)生長(zhǎng)具有一定的作用。 然而， 土霉素鈣如果長(zhǎng)期超量添加，存在非常嚴(yán)重的耐藥性問題， 各企業(yè)和研究機(jī)構(gòu)深刻認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)， 并積極尋求解決之道。 2019 年7 月10 日農(nóng)村農(nóng)業(yè)部發(fā)布194 號(hào)公告， 明確在2020 年7 月1 日前， 飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑的商品飼料， 故尋找土霉素鈣的替代產(chǎn)品以及方案， 具有非常重大的意義。

腸桿菌肽最早是由1993 年美國(guó)普林斯頓大學(xué)從腸道細(xì)菌中分離出一類分子量小于2.5KD (千道爾頓） 的索套結(jié)構(gòu)肽， 由21 個(gè)氨基酸組成， 分子質(zhì)量為2.1kDa， 其中N 端的8 個(gè)氨基酸形成一個(gè)圓形的環(huán)狀結(jié)構(gòu)， 9-21氨基酸形成β 發(fā)夾結(jié)構(gòu)， 貫穿圓環(huán)， 故其性質(zhì)非常穩(wěn)定， 對(duì)高溫、 蛋白酶有良好耐受性。腸桿菌肽對(duì)革蘭氏陰性菌具有強(qiáng)烈的殺滅作用， 在微生物實(shí)驗(yàn)室條件下， 針對(duì)大腸桿菌，沙門氏菌等主要有害菌可以做遠(yuǎn)低于土霉素鈣的最低抑菌濃度。 本試驗(yàn)在斷奶仔豬日糧中添加腸桿菌肽替代原配方中的土霉素鈣， 研究并驗(yàn)證其對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響， 旨在為腸桿菌肽替代土霉素鈣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

腸桿菌肽（抗菌肽含量0.5%）， 林州中農(nóng)穎泰生物肽有限公司提供。 20%土霉素鈣， 正大集團(tuán)購(gòu)買。

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì) 挑選8 欄健康的平均斷奶日齡在21 日齡左右、 斷奶方式一致、 平均斷奶體重在7-8 公斤的仔豬， 分為2個(gè)組， 每組3 個(gè)重復(fù)， 每個(gè)重復(fù)20 頭左右，各處理間初始體重?zé)o明顯差異。 試驗(yàn)前3 天保健， 不使用抗生素等藥物， 試驗(yàn)期為16d。 試驗(yàn)用基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。 各個(gè)處理組日糧中藥物添加見表2。 試驗(yàn)豬在斷奶前按豬場(chǎng)的正常飼養(yǎng)管理規(guī)定進(jìn)行飼養(yǎng)和免疫。試驗(yàn)期間自由采食， 供給衛(wèi)生的飲水， 并進(jìn)行嚴(yán)格的環(huán)境監(jiān)控， 以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

營(yíng)養(yǎng)濃度

表2 各處理組日糧藥物添加方案

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.2.1 記錄指標(biāo)

記錄每欄仔豬初重、 末重、 飼料消耗量，每天記錄每欄采食量折算每頭日采食量， 早晚中晚各觀察一次仔豬腹瀉情況。

1.2.2.2 計(jì)算指標(biāo)：

日增重（g/d） = （試驗(yàn)?zāi)┛傊?試驗(yàn)期死亡/淘汰的動(dòng)物總重-試驗(yàn)初總重） /試驗(yàn)頭數(shù)， 其中試驗(yàn)頭日數(shù)應(yīng)包括被淘汰的豬試驗(yàn)天數(shù)在內(nèi)。

料肉比=總耗料/總增重

腹瀉率= （腹瀉頭數(shù)* 腹瀉天數(shù)） /（試驗(yàn)豬頭數(shù)* 試驗(yàn)天數(shù)） *100%

2 結(jié)果與分析

腸桿菌肽替代土霉素鈣對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響腸桿菌肽替代土霉素鈣對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率的影響見表3。 同土霉素鈣組相比， 抗菌肽組日增重提高了4%、 采食 量 提 高 了2.2% （P ＞0.05）、 料 肉 比 增 加0.8%， 腹瀉率降低12.4%， 整個(gè)試驗(yàn)期無仔豬死亡。

表 3 腸桿菌肽替代土霉素鈣對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉率的影響

3 討論

自抗生素發(fā)明以來， 抗生素不僅僅對(duì)人類的健康產(chǎn)生了巨大的作用， 并且在動(dòng)物的健康以及生產(chǎn)性能的提高有著不可磨滅的貢獻(xiàn)，極大地豐富了我們對(duì)動(dòng)物食品的需求。

然而隨著時(shí)代的發(fā)展， 抗生素也展現(xiàn)出來了它有害的一面。 近30 年來， 抗生素在動(dòng)物飼料中的使用量日漸增長(zhǎng)， 品種也日漸豐富，隨之而來是我們必須面對(duì)的兩個(gè)問題： 其一是動(dòng)物本身對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性的問題， 需要不停地增加使用量才能維持同樣的效果，最終導(dǎo)致某類抗生素失效。 其二是在商品飼料以及養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)抗生素的使用量過量導(dǎo)致的食品安全問題。 非抗生素類物質(zhì)替代抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)過程中使動(dòng)物保持健康和穩(wěn)定的生產(chǎn)性能， 是我們必須面對(duì)的課題， 抗菌肽就是其中一個(gè)非常重要的研究方向。

抗菌肽分子量小、 水溶性好、 熱穩(wěn)定性較高、 生物功能多樣， 有著與傳統(tǒng)抗生素不同的殺菌機(jī)制， 不易導(dǎo)致耐藥性菌株的產(chǎn)生。目前全球共發(fā)現(xiàn)的抗菌肽已達(dá)到兩千多種。腸桿菌肽是一種優(yōu)質(zhì)的抗菌肽， 研究顯示，腸桿菌肽不僅僅對(duì)革蘭氏陰性菌具有非常明確的殺滅作用， 而且因其膜穿孔的殺菌機(jī)制，極難產(chǎn)生耐藥性， 符合抗生素替代品的發(fā)展趨勢(shì)。 Sophie 等（2000） 研究發(fā)現(xiàn)， 腸桿菌肽純品對(duì)E.coli O157：H7 最低抑菌濃度為1μg/ml。Fabian 等（2007） 研究顯示， 其對(duì)沙門氏菌最低抑菌濃度為3.12μg/ml， 以上研究表明， 腸桿菌肽最主要的兩種導(dǎo)致動(dòng)物生產(chǎn)性能降低和腹瀉的兩種革蘭氏陰性菌作用確切。

針對(duì)養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)， 研究者們對(duì)現(xiàn)場(chǎng)采集的大腸桿菌野生毒株進(jìn)行了最低抑菌濃度的測(cè)定。研究結(jié)果表明， 20%土霉素鈣和0.5%腸桿菌肽對(duì)大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922 都有很強(qiáng)的抑菌效果； 而0.5%腸桿菌肽大腸桿菌野生毒株的抑制效果明顯高于20%土霉素鈣； 土霉素鈣對(duì)CVCC50094 表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌效果，但對(duì)野生型沙門氏菌， 0.5%腸桿菌肽對(duì)大部分沙門氏菌的MIC 小于20%土霉素鈣， 效果較好。 無論是在實(shí)驗(yàn)室， 還是在生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)， 新型抗菌肽腸桿菌肽均能體現(xiàn)出較好的抑菌能力， 做到了替代抗生素， 但避免了使用抗生素的弊端， 是在無抗時(shí)代下一個(gè)值得深入研究并推廣的選項(xiàng)。