黃海燕

摘要：隨著我國國民經濟的良好發(fā)展和人民生活水平的顯著提高，人們日益重視加強蔬菜農殘檢測，以確保蔬菜農產品質量安全。當前，酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農殘檢測中得到了日漸廣泛的應用。本文簡述了酶抑制率法的技術原理，淺析了酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農殘檢測中的具體操作方法，以期為酶抑制率法在蔬菜農殘檢測中的應用提供借鑒。

關鍵詞：酶抑制率法;蔬菜;農殘檢測

普洱市思茅區(qū)地處云南省南部，位于瀾滄江下游。普洱市思茅區(qū)為保障農產品安全，加強了對農藥殘留的檢測，嚴禁農殘超標的農產品進入農產品交易市場。普洱市思茅區(qū)加強了酶抑制率法在蔬菜農殘檢測中的有效應用。

一、酶抑制率法原理

酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農殘檢測中的應用，主要是對蔬菜所含的有機磷類以及氨基甲酸酯類農藥殘留進行檢測。酶抑制率法的原理如下：在特定條件下，有機磷類農藥以及氨基甲酸酯類農藥會抑制膽堿酯酶相應的正常功能，且抑制率與上述兩類農藥的實際濃度呈現出正相關關系。通常，酶對乙酞膽堿進行催化，并使之水解，水解產物能和顯色劑發(fā)生化學反應生成黃色物質，在412nm處，借助分光光度計對吸光度隨時間變化呈現的相應值進行準確測定，進而對抑制率進行訓算，借助抑制率即可對蔬菜樣品中所含的有機磷類農殘以及氨基甲酸酯類農殘進行準確判斷。以酶的抑制率表示農殘檢測的結果判定。

二、酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農殘檢測中的具體操作方法

1.機型選擇。酶抑制率法相應的農藥殘留檢測儀器生產廠家，基于單批次同一時間實施檢測的樣品不同數量，設計出相應的各類通道類型，常見的通道類型有8通道、12通道以及%通道等。其中，8通道可對1到7個樣品實施同時檢測;12通道可對1到12個樣品實施同時檢測;96通道最多可對92個樣品實施同時檢測。其他通道類型的農殘檢測儀器可對相應數量的樣品實施同時檢測。要基于普洱市思茅區(qū)農殘檢測的實際需要，對檢測機型進行選擇，按照單批次農殘檢測相應的樣品實際數量對相應的通道類m的檢測儀進行選擇。對通道數呈現懸殊相差的農殘檢測儀進行使用，在對八道移液器進行利用時，操作不慎極易影響檢測精準度，且會浪費檢測試劑。單批次農殘檢測相應的樣品數量較多時，選用通道數較少的農殘檢測儀，極易延長批次內農殘檢測操作時間而造成檢測誤差。

2.試劑配制

（1）PH8.0緩沖液。取重量為11.9g的無水磷酸氫二鉀，同時取重量為3.23g的磷酸二氫鉀，采用容積為1000ml的蒸餾水對之進行溶解。

（2）顯色劑。取重量為160g的二硫代二硝基苯甲酸，同時取重量為15.6mg的碳酸氫鈉，采用容積為20ml的緩沖溶液對之進行溶解，并將冰箱溫度設定為4℃對溶劑進行保存。

（3）底物。取重量為25.0mg的硫代乙酸膽堿。采用容積為3.0m的蒸餾水對之進行溶解，搖晃均勻后，將之放置于設定溫度為4℃的冰箱內進行保存?zhèn)溆?，但要確保保存期在兩周以下。

（4）乙酞膽堿酯酶?；诿腹逃械幕钚郧闆r，采用緩沖液對之進行溶解，對3min相應的吸光度變化值進行控制，使之超過0.3。搖晃均勻后，將之放置在設定溫度為4℃的冰箱內進行保存?zhèn)溆?，要確保保存期在4天之內。在實際農殘檢測中，通常采用農殘檢測儀器相應生產廠家所提供的配套檢測試劑，遵循試劑說明書實施操作使用即可。

3.檢測步驟

（1）樣液制備。①樣品處理。對普洱市思茅區(qū)代表性較強的蔬菜樣品進行選取，將蔬菜表面泥土清除干凈。對于葉菜類蔬菜，將之剪成1cm見方大小的碎片，取大約2g;對于塊莖類以及瓜果類蔬菜，削除其表皮，取大約2g;將上述經過處理的蔬菜樣品放置在提取瓶中，通過可調移液器向提取瓶中加入容積為10ml的緩沖液。將提取瓶放置于多用可調速振蕩器中，對之進行時長兩分鐘的振蕩提取，然后進行時長3到5分鐘的靜置。②若浸提液呈現出較淺顏色，或者無色，借助移液管將浸提液對離心管進行轉移，將之作為待測液;若浸提液相對較為渾濁，則借助移液管將浸提液吸取至離心管相應的0.5ml刻度線位置，將之放置于微型離心機內實施離心處理，使上層液實現澄清，將之取出后，放置于離心管架上，將之作為樣液。缺乏離心機設備時，可對浸提液實施過濾處理。③若浸提液存在較為嚴重的色素干擾狀況，則將浸提液對另一提取瓶進行轉移，并將重量為0.1g到0.5g的活性炭加入該提取瓶中，將之放置于多用可調速振蕩器中，對之實施時長5分鐘到6分鐘的振蕩處理（可基于脫色實際情況，適當對脫色時間進行延長或者縮短），將經過振蕩的浸提液取出，對之進行時長5分鐘到10分鐘的靜置，借助移液管將上層液進行吸取至離心管相應的0.5ml刻度線位置，將之放置于微型離心機內實施離心處理，使上層液實現澄清，將之取出后，放置于離心管架上，將之作為樣液（要避免活性炭在樣液中存在殘留，對于含有活性炭殘留的樣液，要再次實施離心處理）。④蔥、蒜、韭菜、茭白等汁液中，含有影響酶的植物此生物質，極易造成假陽性現象。對此類樣品進行處理，可整株浸提，避免此生物質發(fā)生干擾。⑤采用各類儀器，在樣液配置實際過程中會略微呈現出不同，例如，有的取樣品重量為1g，有的取樣品重量為2e，所需添加的緩沖液容積與之對應為5ml和10ml，保持相同的比例。

4.配置對照液。配置對照液極為簡易，僅需將緩沖液直接移取，即可將之作為對照液。

5.測試

（1）對照液測試：先將容積為2.5ml的緩沖液加入試管中，再將容積為0.1ml的酶液以及容積為0.1ml的顯色劑加入試管中，搖勻，將試管在37℃環(huán)境下進行時長為超過巧分鐘的放置。將容積為0.1ml的底物加入試管中并搖勻，此時，檢液即呈現出顯色反應，應立即將試管放置于儀器比色池內，并對反應3分鐘的吸光度實際變化值進行記錄。（2）樣品溶液測試：先將容積為2.5ml的樣品提取液加入試管中，再實施與對照液測試相同的操作，最后對反應3分鐘的吸光度實際變化值進行記錄。（3）借助多通道移液器對酶試劑、顯色劑以及底物進行移取，應在Ⅴ型槽中倒入試劑，并對試劑進行取用。借助移液器將容積我20u的酶加入微孔板孔內，再借助移液器將容積為250ul的對照緩沖液加入其中。將微孔板放置于儀器內部，按動上下鍵對“啟動振板”進行選擇，之后按動“確認鍵”，對振板進行啟動，將酶和樣品有效混勻。完成板振后，對之進行時長10分鐘的靜置。然后，將10ul顯色劑以及10ul底物加入微板孔內，立即將之放置于儀器內，實施測量。

三、結語

綜上所述，酶抑制率法成本低廉，且靈敏準確，在蔬菜農殘檢測中的應用日漸廣泛。在普洱市思茅區(qū)蔬菜農殘檢測中，對酶抑制率法進行應用，要深入了解酶抑制率法原理，并遵循機型選擇、試劑配制、樣液制備、對照液制備以及測試的具體操作方法，有效保障酶抑制率法對蔬菜農殘檢測的有效性。

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