劉平祥， 梁鵬帥， 程龍梅， 劉金萍*， 陳嫦青， 莫宇麗， 陸應誠

（1.廣東驅(qū)動力生物科技股份有限公司，廣東廣州 510560；2.華南農(nóng)業(yè)大學，廣東廣州 510642）

豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、發(fā)熱、接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性。目前已經(jīng)有多種豬瘟病毒疫苗被研制出來，而且在實際應用中也取得了比較理想的效果，但在很多豬場部分豬群也出現(xiàn)了免疫失敗的情況，說明增進豬群豬瘟抗性的研究仍需持續(xù)開展。近年來，血紅蛋白直接抑制病毒的分子機制被揭示，血紅蛋白β亞基與細胞RIG-I相互作用可激活RIG-I信號通路，從而上調(diào)IFN-β的表達，進而抑制豬瘟病毒的增殖（如圖 1）（Dan 等，2013）。

圖1 HB抑制CSFV增殖和復制的分子機制

研究表明，復方菠菜提取物、VB12合劑可以提升動物造血功能，提高動物的血紅蛋白濃度。本文通過研究血紅蛋白與豬瘟抗體水平關(guān)系及復方菠菜提取物、VB12合劑對豬瘟抗體水平的影響，以期為實際生產(chǎn)中對豬瘟的抑制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 復方菠菜提取物、VB12合劑由廣州三行生物科技有限公司提供，其主要成分為1%菠菜提取物，100 mg/kg VB12等。

1.2 試驗一：豬瘟病毒抗體水平與血紅蛋白濃度的關(guān)系

1.2.1 試驗設計 試驗于廣東省選取了3個豬場（HY豬場、SF豬場、SJ農(nóng)莊），分別隨機挑選不同階段的豬（表1）進行豬瘟抗體水平及相應血紅蛋白濃度的檢測。

1.2.2 豬瘟病毒抗體檢測 采用IEDXX豬瘟ELISA抗體試劑盒，按照試劑盒推薦標準進行檢測及數(shù)據(jù)計算。

a．計算公式：

對照：

式中：NCx為陰性對照抗體滴度值；NC1A（450）為第一個陰性對照在450 nm波長吸光度值；NC2A（450）為第二個陰性對照在450 nm波長吸光度值。

表1 3個豬場豬群選取情況

b．判定標準：

陰性：阻斷率≤30%，可疑：30%＜阻斷率＜40%，陽性：阻斷率≥40%。

1.3 試驗二：復方菠菜提取物、VB12合劑對不同階段豬血紅蛋白濃度的影響

1.3.1 復方菠菜提取物、VB12合劑對母豬及所產(chǎn)仔豬血紅蛋白濃度的影響

1.3.1.1 試驗設計與飼養(yǎng)管理 試驗于海南某大型豬場進行，試驗期為母豬產(chǎn)前30 d至分娩。試驗選取體況、胎次相近的母豬600頭，隨機分為兩組，對照組和試驗組，每組各300頭母豬，對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中添加500 g/t的復方菠菜提取物、VB12合劑。試驗基礎日糧參照NRC（1998）妊娠母豬營養(yǎng)推薦需要量配制，具體見表2。試驗期間母豬飼養(yǎng)管理按照豬場正常程序進行，每日兩餐，自由飲水。

式中：PCx為陽性對照抗體滴度值；PC1A（450）為第一個陽性對照在450 nm波長吸光度值；PC2A（450）為第二個陽性對照在450 nm波長吸光度值。

試驗有效性判定：

NCx>0.005 PCx阻斷率>50%。

樣品：

表2 母豬的基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3.1.2 血紅蛋白濃度測定 采用優(yōu)利特URIT-15血紅蛋白分析儀進行檢測。母豬血紅蛋白濃度測定：每組各隨機挑選80頭母豬，于產(chǎn)前3 d檢測每頭母豬耳緣靜脈血紅蛋白濃度。初生仔豬血紅蛋白濃度測定：每組各隨機挑選80頭母豬檢測其初生仔豬1日齡（打鐵針前）耳緣靜脈血紅蛋白濃度，每窩隨機挑選2頭仔豬。

1.3.2 復方菠菜提取物、VB12合劑對保育豬血紅蛋白濃度的影響

1.3.2.1 試驗設計與飼養(yǎng)管理 試驗于福建XH豬場進行，試驗期36 d。選取健康、體重相近的30日齡仔豬160頭，隨機分成兩組，對照組和試驗組，每組4個重復，每個重復20頭保育豬。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中添加400 g/t的復方菠菜提取物、VB12合劑。試驗基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表3。試驗期間保育豬飼養(yǎng)管理按照豬場正常程序進行，每天定時喂料，自由飲水。

1.3.2.2 保育豬血紅蛋白濃度測定 采用優(yōu)利特URIT-15血紅蛋白分析儀進行檢測。于試驗結(jié)束當天，每個重復隨機挑選10頭保育豬，檢測其耳緣靜脈血紅蛋白濃度。

1.4 試驗三：復方菠菜提取物、VB12合劑對豬瘟抗體水平的影響

1.4.1 試驗設計與飼養(yǎng)管理 試驗地點為浙江某豬場，試驗期39 d。試驗選取健康、體重相近的30日齡保育豬320頭，隨機分為兩組，對照組與試驗組，每組各8個重復，每個重復20頭保育豬。試驗組在基礎日糧中添加500 g/t復方菠菜提取物、VB12合劑，一直飼喂至檢測豬瘟抗體水平結(jié)束；對照組飼喂基礎日糧?；A日糧組成及營養(yǎng)水平見表4。豬群于試驗結(jié)束前24 d進行豬瘟疫苗免疫，并于試驗結(jié)束時進行豬瘟抗體滴度檢測。試驗期間保育豬飼養(yǎng)管理按照豬場正常程序進行，每天定時喂料，飲水自由。

表3 保育豬基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

表4 保育豬基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4.2 豬瘟病毒抗體檢測 采用北京金諾百特科技有限公司豬瘟病毒抗體檢測試劑盒，按照試劑盒推薦標準進行檢測及數(shù)據(jù)計算。

a．試驗有效性判定：陰性對照 OD值＞0.5；陽性對照OD值＜0.5。

b．計算方法：

計算待檢樣品豬瘟病毒抗體的陽性對照抗體滴度值（PC）：

c．判定標準：

樣品PC＜40%，判為陰性；樣品PC≥40%，判為陽性；如果結(jié)果可疑，檢查樣品有無污染或者重檢；如果重檢結(jié)果依然可疑，應結(jié)合豬場流行病學情況，重新采樣并檢測。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 采用SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)表示為“平均值±標準誤”，采用鄧肯法進行差異顯著性分析。

2 試驗結(jié)果

2.1 試驗一：豬瘟病毒抗體水平與血紅蛋白濃度的關(guān)系 由圖2、3、4可知，豬瘟抗體水平與血紅蛋白濃度均有正相關(guān)趨勢。

2.2 試驗二：復方菠菜提取物、VB12合劑對母豬及所產(chǎn)仔豬血紅蛋白濃度的影響 由表5可知，通過給母豬飼喂一個月復方菠菜提取物、VB12合劑，試驗組母豬血紅蛋白濃度相對對照組提高26.27%，且差異顯著（P＜0.05）。試驗組仔豬血紅蛋白濃度相對對照組提高18.84%，且差異顯著（P＜0.05）。說明通過給母豬飼喂復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高母豬及所產(chǎn)仔豬血紅蛋白濃度。

表5 復方菠菜提取物、VB12合劑對母豬及所產(chǎn)仔豬血紅蛋白濃度影響g/L

由表6可知，通過給保育豬飼喂一個月復方菠菜提取物、VB12合劑，試驗組保育豬血紅蛋白濃度相對對照組提高9.60%，且差異顯著 （P＜0.05）。說明通過給保育豬飼喂復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高其血紅蛋白濃度。

表6 復方菠菜提取物、VB12合劑對保育豬血紅蛋白濃度的影響g/L

2.3 試驗三：復方菠菜提取物、VB12合劑對豬瘟抗體水平的影響 如表7所示，試驗組豬瘟抗體水平高于對照組，是對照組的1.5倍（P＜0.05），且標準誤比對照組小，說明復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高豬瘟抗體水平，且均勻度較好。

表7 復方菠菜提取物、VB12合劑對豬瘟抗體水平的影響

3 討論

血紅蛋白是最重要的酸堿緩沖物質(zhì)，紅細胞中的血紅蛋白及其鉀鹽是重要的維持機體體液平衡的緩沖物質(zhì)，對維持機體健康有重要作用 （劉佳，2010），其可增強動物抗應激及疾病抵抗力；紅細胞也是免疫細胞，是機體抗病的重要力量。紅細胞具有“免疫黏附作用”，細菌、病毒遇到紅細胞比遇到白細胞的機會多500~1000倍，紅細胞可以吸附病菌，然后將其遞呈給白細胞，將白細胞的吞噬能力提高4~5倍，另外，紅細胞表面的溶酶體酶可直接吞噬病菌 （郭峰，1995）；血紅蛋白濃度低，即貧血，會影響到機體的免疫反應，特別是對細胞免疫功能的影響尤為顯著（P＜0.01）（姚金水等，2013）。這可能是因為貧血會影響抗體制造及抗原抗體反應，因為二者皆需要適宜的溫度及pH，而貧血對二者皆有影響（劉佳，2010；王黎生，2004；徐令和廖清奎，1990）。本研究結(jié)果表明，豬瘟抗體水平與血紅蛋白濃度呈正相關(guān)，與以上理論相一致。

菠菜提取物中的卟啉為血紅素的重要結(jié)構(gòu)，其也被用作生產(chǎn)補血造血的產(chǎn)品，而維生素B12的主要生理功能是參與制造骨髓紅細胞，防止惡性貧血（周晉等，2004）。本試驗結(jié)果中復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高豬血紅蛋白濃度，與以上結(jié)論一致。同時該試驗結(jié)果也表明復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高豬的豬瘟抗體滴度。

血紅蛋白能通過抑制豬瘟病毒的增殖（Dan等，2013），提高機體抵抗力并增加豬瘟抗體滴度，從而增加豬群對豬瘟的抵御力。提高血紅蛋白濃度將有利于對豬瘟的抵抗作用，據(jù)調(diào)查表明，20%的仔豬血紅蛋白濃度低于90 g/L，嚴重貧血；75%的豬場血紅蛋白濃度低于110 g/L，處于貧血狀態(tài)（Anne，2014）。對國內(nèi)豬場進行大量的檢測，發(fā)現(xiàn)貧血現(xiàn)象更為普遍，有96%的母豬血紅蛋白濃度低于110 g/L，29.5%的母豬血紅蛋白濃度低于90 g/L（數(shù)據(jù)待發(fā)表）。因此，提高豬群的抗豬瘟能力，必須先減少豬群的貧血現(xiàn)狀。

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明，豬瘟抗體水平與血紅蛋白濃度呈正相關(guān)趨勢，而復方菠菜提取物、VB12合劑可以提高豬血紅蛋白水平，從而提高豬瘟抗體水平。