楊前宇 何聰芬 梁立雄 王 濤 李潞濱 劉 蕾，*

(1 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所/林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家林業(yè)局林木培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京 100091；2 北京工商大學(xué)/北京市植物資源研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100048)

蘭科(Orchidaceae)為多年生草本植物，屬被子植物門單子葉植物綱，約有6個(gè)亞科，800個(gè)屬，35 000余種[1-2]。依據(jù)生態(tài)類型可將蘭科植物分為地生蘭[3]、腐生蘭[4]和附生蘭[5]。蘭科菌根(Orchid mycorrhiza)是蘭科植物的原球莖或成年植株根部與特定真菌形成的一種共生體，這些特定真菌被定義為蘭科菌根真菌[6]。目前，學(xué)術(shù)上公認(rèn)的蘭科菌根真菌主要有3個(gè)科，即膠膜菌科(Tulasnellaceae)、角擔(dān)菌科(Ceratobasidiaceae)和蠟殼菌科(Sebacinaceae)[7]，可從蘭屬(Cymbidium)[8]、石斛屬(Dendrobium)[9]、玉鳳花屬(Habenaria)[10]等蘭科植物中廣泛分離獲得。

自然狀態(tài)下的蘭科植物必須從菌根真菌中獲得營(yíng)養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)[11]。真菌從植物根系的外皮細(xì)胞侵入營(yíng)養(yǎng)根后，在皮層細(xì)胞中定殖，形成菌絲團(tuán)(peloton)[12]。菌絲團(tuán)在幾天后被宿主細(xì)胞消解，為蘭科植物提供生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)元素[13]。有研究者將膠膜菌屬真菌與蘭科植物組培苗建立共生關(guān)系，形成共生菌根后，發(fā)現(xiàn)真菌對(duì)其生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，植物的鮮重明顯增加[14-16]。

蘭科菌根真菌的分離和鑒定[17]，真菌與蘭科植物在離體條件下共生關(guān)系的建立[18]，真菌—蘭科植物間存在的專一性[19]以及利用分離獲得的有效真菌促進(jìn)蘭科產(chǎn)業(yè)發(fā)展[20-23]等問題一直備受國(guó)內(nèi)外研究學(xué)者關(guān)注。本研究從采集自四川的野生建蘭(Cymbidiumensifolium)中分離獲得不同屬菌根真菌，在離體條件下分別與建蘭(C.ensifolium)、硬葉蘭(C.mannii)和鐵皮石斛(Dendrobiumofficinale)的幼苗建立共生關(guān)系，了解蘭科菌根真菌的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及其對(duì)蘭科植物幼苗的影響，探討菌根真菌與蘭科植物共生關(guān)系建立的機(jī)制，以期為深入了解蘭科植物和菌根真菌間的相互識(shí)別和共生分子機(jī)理提供技術(shù)參考，并為蘭花種質(zhì)資源的保護(hù)和產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營(yíng)提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 蘭科菌根真菌的分離、鑒定及形態(tài)學(xué)比較

1.1.1 植物材料 樣品采集自四川省成都市野生建蘭(地生型)。

1.1.2 真菌培養(yǎng)和純化培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)[24]和真菌鑒定培養(yǎng)基(FIM)[25]經(jīng)高溫滅菌后，待溫度降至50℃加入硫酸鏈霉素至其終濃度為50 mg·L-1。

1.1.3 真菌的分離 剪取健康建蘭根部，流水沖洗過夜，5%NaClO溶液消毒4 min后，切成厚度為1～2 mm小片分別置于FIM和PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)2～5 d。

1.1.4 真菌的DNA提取及系統(tǒng)進(jìn)化分析 采用Omega?試劑盒提取菌根真菌DNA，PCR特異擴(kuò)增ITS-rDNA片段(引物序列為ITS1F：5′-T C C G T A G G T G A A C C T G C GG-3′；ITS4R：5′-T C C T C C G C T T A T T G A T A T GC-3′)[26]。利用ClustalW[27]和MEGA6.05[28]軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，建樹方法采用最大似然法(maximum likelihood，ML)，Bootstrap均為1 000[28]。

1.1.5 真菌的菌落生長(zhǎng)速度及形態(tài)觀察 篩選出的蘭科菌根真菌經(jīng)活化后，分別接種到裝有PDA培養(yǎng)基的9 cm培養(yǎng)皿中(9皿重復(fù))。將滅菌的蓋玻片45°插入培養(yǎng)基，待菌絲長(zhǎng)至1/2處時(shí)取出，于BX51光學(xué)顯微鏡(OLYMDUS，美國(guó))下拍照，并用測(cè)微尺隨機(jī)測(cè)量5處菌絲直徑，取平均值(3皿重復(fù))。每12 h測(cè)量一次菌落直徑(3皿重復(fù))，待真菌生長(zhǎng)至第8天時(shí)拍照并記錄菌落形態(tài)(3皿重復(fù))。

1.2 菌根真菌與蘭科植物離體共培養(yǎng)

1.2.1 植物材料 建蘭(地生型)、硬葉蘭(附生型)和鐵皮石斛(附生型)幼苗。

1.2.2 菌根真菌材料 從春蘭和建蘭分離獲得的3株菌根真菌。

1.2.3 培養(yǎng)基 1)真菌培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基；2)共生培養(yǎng)基：燕麥瓊脂培養(yǎng)基(oatmeal agar medium，OMA)[18]。

1.2.4 離體共培養(yǎng) 3種蘭花組培苗經(jīng)生根培養(yǎng)后，選取根長(zhǎng)為0.5～1 cm的健壯幼苗各5株，分別與3株真菌在0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 g·L-1OMA共生培養(yǎng)，處理組和未與真菌共培養(yǎng)的對(duì)照組(CK)各設(shè)置6個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)條件：溫度23±2℃，光照強(qiáng)度1 600～ 2 000 lx，光周期為14 h光照/10h黑暗。同時(shí)各處理組以及對(duì)照組(CK)選取15株幼苗，洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，吸干水分，分別統(tǒng)計(jì)鮮重、干重、苗長(zhǎng)和根長(zhǎng)并計(jì)算平均值(精確至0.000 1 g)。

1.2.5 共生體形成檢驗(yàn) 待處理組蘭花幼苗共生培養(yǎng)至第10天時(shí)，每天隨機(jī)選取植物樣品，通過組織切片和番紅染色法[20]，于光學(xué)顯微鏡下觀察真菌定殖情況。第30天時(shí)，隨機(jī)選取3株幼苗計(jì)算真菌在植物根中的定殖率(3個(gè)重復(fù))，按照公式計(jì)算定殖率：

定殖率=具有菌絲團(tuán)的根數(shù)量/全部根數(shù)量×100%

(1)。

1.2.6 真菌對(duì)蘭科植物的作用 3種蘭花組培苗與菌根真菌共培養(yǎng)30 d后，隨機(jī)選取處理組和對(duì)照組(CK)各15株，按照公式計(jì)算鮮重、干重、苗長(zhǎng)和根長(zhǎng)的平均增長(zhǎng)率[14]：

平均增長(zhǎng)率=(接菌30 d重量或長(zhǎng)度-接菌前重量或長(zhǎng)度)/接菌前重量或長(zhǎng)度×100%

(2)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘭科菌根真菌的鑒定及形態(tài)學(xué)比較

2.1.1 真菌的鑒定 從野生建蘭中分離的3株菌根真菌經(jīng)ITS測(cè)序分析，1株為膠膜菌屬真菌，1株為角擔(dān)菌屬真菌，1株為蠟殼菌屬真菌，并將其在NCBI網(wǎng)站注冊(cè)(表1)。

表1 菌根真菌ITS序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的比對(duì)結(jié)果Table 1 Blast results of mycorrhizal fungi ITS sequences in the GenBank database

利用最大似然法(ML)對(duì)本試驗(yàn)所獲得的3株真菌與NCBI已發(fā)表的2株膠膜菌屬真菌(MG018496.1、KF896886.1)、2株角擔(dān)菌屬真菌(DQ279045.1、KP715598.1)和2株蠟殼菌屬真菌(AB831840.1、KY649451.1)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。由圖1可知，上述9株真菌聚類到3個(gè)分支，同屬真菌聚類到同一分支，且各分支Bootstrap均大于等于90%。

圖1 最大似然法構(gòu)建真菌ITS序列系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.1 The phylogenetic tree of fungal ITS sequences based on maximum likelihood method

2.1.2 真菌的菌絲和菌落形態(tài)特征 由表2可知，3株真菌形態(tài)學(xué)特征中均未觀察到任何有性生殖孢子，其中Tsc和Cej3菌絲形態(tài)特征相近，表現(xiàn)為直角分枝處有隔膜；而Sec菌絲形態(tài)特征表現(xiàn)為菌絲基部念珠狀變形明顯(圖2)。3株真菌的菌落形態(tài)特征差異明顯，Cej3和Sec菌落有環(huán)紋同心圓，Tsc菌落無(wú)環(huán)紋同心圓；Tsc和Cej3有氣生菌絲，Sec無(wú)氣生菌絲(圖3)。

表2 蘭科菌根真菌的形態(tài)特征(第8天)

2.1.3 真菌的菌落生長(zhǎng)曲線 在PDA培養(yǎng)基上每隔12 h測(cè)定一次菌落直徑并繪制生長(zhǎng)曲線，由圖4可知，Cej3僅需4 d就可以長(zhǎng)滿9 cm培養(yǎng)皿，Tsc需12 d，Sec大于14 d；3株真菌的菌落生長(zhǎng)速度為Cej3>Tsc>Sec。

2.2 菌根真菌與蘭科植物離體共培養(yǎng)

2.2.1 共生體形成檢驗(yàn) 3種蘭科植物幼苗在不同OMA濃度下分別與3株真菌共培養(yǎng)至第10天時(shí)，通過組織切片和番紅染色法，于光學(xué)顯微鏡下觀察真菌定殖情況(圖5)并記錄真菌定殖時(shí)間(表3)。結(jié)果表明，不同菌株在不同濃度培養(yǎng)基條件下在蘭科植物中定殖的時(shí)間不同。膠膜菌屬真菌(Tsc)可以在全部OMA試驗(yàn)濃度中與3種蘭科植物幼苗建立共生關(guān)系，在建蘭中最早定殖時(shí)間為17 d(2.0 g·L-1OMA)，在硬葉蘭中最早定殖時(shí)間為15 d(2.0 g·L-1OMA)，在鐵皮石斛中最早定殖時(shí)間為14 d(8.0 g·L-1OMA)。角擔(dān)菌屬真菌(Cej3)可在全部OMA試驗(yàn)濃度中與建蘭幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為13 d(0.5 g·L-1OMA)，而在4.0 g·L-1和8.0 g·L-1OMA條件下，幼苗死亡；在0.5 g·L-1和1.0 g·L-1OMA中與硬葉蘭幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為11 d(0.5 g·L-1OMA)，而在2.0、4.0、8.0 g·L-1OMA條件下，幼苗死亡；在0.5 g·L-1OMA中與鐵皮石斛幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為15 d，而在1.0、2.0、4.0和8.0 g·L-1OMA條件下，幼苗死亡。蠟殼菌屬真菌(Sec)在4.0 g·L-1和8.0 g·L-1OMA中與建蘭幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為27 d(8.0 g·L-1OMA)；在8.0 g·L-1OMA中與硬葉蘭幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為25 d；在4.0、8.0 g·L-1OMA與鐵皮石斛幼苗建立共生關(guān)系，最早定殖時(shí)間為24 d(8.0 g·L-1OMA)。

注：A：菌絲基部；B：直角分枝處隔膜。Note: A: Hyphae base. B: The diaphragm of rectangular branch of hyphae.圖2 蘭科菌根真菌在PDA上的菌絲形態(tài)特征(第8天)Fig.2 The mycelium morphological characteristics of Orchid mycorrhizal fungi on PDA (the 8th day)

圖3 蘭科菌根真菌在PDA上的菌落形態(tài)特征(第8天)Fig.3 The colonial morphological characteristics of Orchid mycorrhizal fungi on PDA (the 8th day)

圖4 3株真菌菌落生長(zhǎng)曲線Fig.4 The growth curve of three colonies of fungi

注：AF：有活力的菌絲；CW：細(xì)胞壁；P：菌絲團(tuán)。Note: AF: Active fungus. CW: Cell wall. P: Peloton.圖5 硬葉蘭根部與Tsc菌株共生結(jié)構(gòu)切片F(xiàn)ig.5 Cross-section of symbiosis structures in root of C. mannii with Tsc

2.2.2 菌根真菌與蘭科植物組培苗共培養(yǎng) 由表4可知，膠膜菌屬真菌(Tsc)在全部OMA濃度下均可與3種蘭科植物建立共生關(guān)系，且定殖率均為100%；建蘭、硬葉蘭和鐵皮石斛處理組的平均鮮重凈增率最高分別可達(dá)158.84%(2.0 g·L-1OMA)、179.01%(2.0 g·L-1OMA)和167.51%(8.0 g·L-1OMA)，而同濃度下CK的平均鮮重凈增率分別為13.88%、14.24%和22.34%。角擔(dān)菌屬真菌(Cej3)可與建蘭在全部OMA濃度下建立共生關(guān)系，定殖率均為100%，平均鮮重凈增率最高可達(dá)180.89%(0.5 g·L-1OMA)，而同濃度下CK為25.38%；Cej3菌株在0.5 g·L-1和1.0 g·L-1OMA下可與硬葉蘭建立共生關(guān)系，定殖率分別為28.00%和23.00%，而在2.0 g·L-1OMA中硬葉蘭幼苗死亡；Cej3菌株在0.5 g·L-1OMA與鐵皮石斛建立共生關(guān)系，定殖率分別為44.00%，在1.0 g·L-1和2.0 g·L-1OMA中鐵皮石斛幼苗死亡。蠟殼菌屬真菌(Sec)在4.0 g·L-1和8.0 g·L-1OMA可與建蘭建立共生關(guān)系，定殖率分別為36.66%和30.00%，平均鮮重凈增率最高可達(dá)107.70%(4.0 g·L-1OMA)，同濃度下CK僅為24.90%，未與真菌建立共生幼苗平均鮮重凈增率僅33.37%(2.0 g·L-1OMA)；Sec菌株在8.0 g·L-1OMA與硬葉蘭建立共生關(guān)系，定殖率為29.00%，平均鮮重凈增率為88.56%，同濃度下CK為19.98%；Sec菌株在4.0 g·L-1和8.0 g·L-1OMA與鐵皮石斛建立共生關(guān)系，定殖率分別為24.00%和28.00%。

表3 菌根真菌在3種蘭花中的定殖時(shí)間

注：*：未檢出；d：植株死亡。下同。

Note: *: Not detected. d: Plant dead. The same as following.

3種蘭花與Tsc菌株在4.0 g·L-1OMA中共培養(yǎng)30 d的生長(zhǎng)情況表明，處理組與CK差異明顯，處理組幼苗葉色濃綠、葉分蘗數(shù)增多、莖粗壯且高生長(zhǎng)明顯，根發(fā)達(dá)且新生根數(shù)較多，而CK幼苗葉發(fā)黃、生長(zhǎng)勢(shì)較差，根細(xì)小且?guī)缀鯚o(wú)新生根出現(xiàn)(圖6)。

3 討論

蘭科菌根作為主要的菌根類型之一，菌根共生關(guān)系幾乎伴隨蘭科植物從種子萌發(fā)到開花結(jié)果的整個(gè)生活史[10]。獲得促進(jìn)蘭科植物生長(zhǎng)發(fā)育的有效共生真菌是開展蘭科植物與菌根真菌共生相關(guān)研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。1987年，Moore[28]將原隸屬于蘭科菌根菌的所有真菌重新歸類為3個(gè)屬，即膠膜菌屬(Tulasnella)、角擔(dān)菌屬(Certobasidium)和蠟殼菌屬(Sebacina)。根據(jù)真菌詞典第十版[29]，上述3個(gè)科均屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)傘菌綱(Agaricomycetes)，其中膠膜菌科和角擔(dān)菌科屬于雞油菌目(Cantharellales)，該目包括7個(gè)科、38個(gè)屬，而蠟殼菌科屬于蠟殼菌目(Sebacinales)，該目?jī)H含1個(gè)科，共9個(gè)屬，該科真菌質(zhì)地膠質(zhì)，能流出像膠一樣的物種，是蘭科植物的主要共生菌根真菌[30]。大量的研究學(xué)者利用可培養(yǎng)手段，有效分離獲得了蘭科植物菌根真菌菌株。如郭順星等[31]、徐錦堂等[32]、范黎等[33]先后從野生天麻(Gastrodiaelata)和鐵皮石斛(D.officinale)中分離獲得多株典型的膠膜菌屬、角擔(dān)菌屬和蠟殼菌屬真菌；李潞濱[34]從我國(guó)4種野生蘭屬植物中分離獲得多株膠膜菌屬真菌；Kristianen等[35]從三蕊蘭(Neuwiediaveratrifolia)中分離獲得1株角擔(dān)菌屬真菌；Selosse等[36]從法國(guó)鳥巢蘭(Neottianidus-avis)分離獲得多株蠟殼菌屬真菌。本研究利用可培養(yǎng)手段從建蘭(地生型國(guó)蘭)中分離獲得3株菌根真菌并進(jìn)行研究，經(jīng)ITS測(cè)序分析鑒定，所分離獲得3株菌根真菌中，1株(Tsc)為膠膜菌屬真菌，1株(Cej3)為角擔(dān)菌屬真菌，1株(Sec)為蠟殼菌屬真菌；利用最大似然法(ML)構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹中與Sec相比，Tsc和Cej3的遺傳距離較近，菌絲和菌落形態(tài)特征觀察也發(fā)現(xiàn)Tsc和Cej3的特點(diǎn)相近；分子生物學(xué)和形態(tài)學(xué)研究結(jié)果表明，菌株Tsc和Cej3親緣關(guān)系較近，同屬雞油菌目，而與Sec親緣關(guān)系較遠(yuǎn)[37]。

表4 菌根真菌對(duì)3種蘭花幼苗生長(zhǎng)的影響Table 4 The inoculation effects of mycorrhizal fungi on the growth parameters of three species orchid plantlets /%

圖6 3種蘭花與Tsc菌株(CK)在OMA(4.0 g·L-1)中共培養(yǎng)30 d的生長(zhǎng)效果比較Fig.6 The comparison of growth status on three species of orchids and Tsc (CK) in OMA(4.0 g·L-1) about 30 days

研究表明，微生物在植物中的定殖時(shí)間與植物種類、外部環(huán)境、培養(yǎng)基濃度及微生物本身有關(guān)[38-39]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究者常利用OMA培養(yǎng)基建立真菌與蘭科植物共生關(guān)系，但多數(shù)只選擇同一濃度作為試驗(yàn)條件[25-26,39]，而關(guān)注濃度對(duì)真菌在植物中定殖時(shí)間影響的較少。本研究利用組織切片的方法檢驗(yàn)不同濃度OMA培養(yǎng)基條件下真菌在植物中的定殖情況，發(fā)現(xiàn)同一株真菌在同一種蘭科植物內(nèi)定殖的時(shí)間會(huì)因OMA培養(yǎng)基濃度不同而發(fā)生變化。Tsc菌株可以在全部OMA試驗(yàn)濃度下與3種蘭科植物建立共生關(guān)系，且定殖率均為100%，但定殖時(shí)間存在差異；而Cej3和Sec與不同植物在不同OMA濃度下定殖時(shí)間與定殖率均不相同，且存在明顯差異，推測(cè)OMA培養(yǎng)基濃度對(duì)共生關(guān)系的建立存在一定的影響，這可能與蘭科植物和菌根真菌的營(yíng)養(yǎng)關(guān)系有關(guān)[40]。此外，Tsc和Cej3在蘭科植物中定殖時(shí)間較Sec定殖時(shí)間早，同時(shí)通過測(cè)定3種真菌菌落的生長(zhǎng)曲線發(fā)現(xiàn)，Cej3生長(zhǎng)速率最快，Tsc次之，Sec最慢，因此，推測(cè)定殖時(shí)間與真菌和植物本身的特點(diǎn)相關(guān)[41]。

蘭科菌根真菌被證明可以與多種蘭科植物幼苗建立共生關(guān)系，并在相互作用的過程中發(fā)揮重要作用[36]。Stewart等[42-43]利用蘭科菌根真菌與多種玉鳳花屬(Habenaria)和綬草屬(Spiranthes)蘭花幼苗在OMA培養(yǎng)基中成功建立共生關(guān)系，發(fā)現(xiàn)不同屬真菌對(duì)不同種蘭科植物的影響不同。金輝等[14]將鐵皮石斛組培苗與菌根真菌共培養(yǎng)60 d后發(fā)現(xiàn)，接菌組幼苗鮮重增長(zhǎng)率為107.02%，較對(duì)照組高84.80%。本研究(真菌與植物離體條件下共培養(yǎng)30 d)中，Tsc菌株可以在全部OMA試驗(yàn)濃度下提高3種蘭科植物幼苗的鮮重、干重、苗高、根長(zhǎng)增長(zhǎng)率，且定殖率均為100%，說(shuō)明一種真菌可對(duì)多種蘭科植物幼苗的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，同時(shí)，Tsc、Cej3和Sec菌株可以在不同OMA濃度下促進(jìn)同一種植物生長(zhǎng)，推測(cè)同一種蘭花可與不同菌根真菌形成共生體[44]。

近年來(lái)，對(duì)角擔(dān)菌屬真菌的研究發(fā)現(xiàn)，角擔(dān)菌屬中包括蘭科菌根真菌、植物致病菌以及植物土傳病害的生防菌等[45]。Mosqueraespinosa等[46]研究分離自哥倫比亞蘭花(Colombianorchids)根部的角擔(dān)菌屬真菌時(shí)發(fā)現(xiàn)，將角擔(dān)菌屬真菌接種水稻，可引起紋枯病癥狀，但其致病力顯著低于作為陽(yáng)性對(duì)照的立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)，將上述角擔(dān)菌屬真菌接種水稻3 d后再接種立枯絲核菌，水稻的病情指數(shù)顯著低于只接種立枯絲核菌。本研究從野生建蘭幼苗中分離的Cej3菌株，回接至建蘭幼苗后，可以在全部OMA試驗(yàn)濃度下建立共生關(guān)系；而接種硬葉蘭和鐵皮石斛幼苗時(shí)發(fā)現(xiàn)，在2.0 g·L-1OMA中硬葉蘭幼苗死亡，在1.0 g·L-1和2.0 g·L-1OMA中鐵皮石斛幼苗死亡。從蘭科植物幼苗中分離的角擔(dān)菌屬真菌回接至宿主植物幼苗后，不會(huì)致死幼苗且可與之建立穩(wěn)定的共生關(guān)系并促進(jìn)其生長(zhǎng)，但對(duì)于其他物種，在不合適的條件下可導(dǎo)致植物死亡，推測(cè)這與菌根真菌對(duì)蘭科植物的專一性及外部環(huán)境有關(guān)。

4 結(jié)論

本研究從野生建蘭(C.ensifolium)中分離獲得3株真菌，經(jīng)ITS分析鑒定分別歸屬于膠膜菌屬(Tsc)、角擔(dān)菌屬(Cej3)和蠟殼菌屬(Sec)。 形態(tài)學(xué)比較研究發(fā)現(xiàn)3株真菌的菌絲和菌落特征存在明顯差異。在不同培養(yǎng)基濃度條件下與蘭科植物共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)上述3株真菌與3種蘭科植物存在一定程度的專一性，其定殖率和定殖時(shí)間均不相同，但3株真菌均對(duì)蘭科植物的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步深入研究蘭科植物與真菌共生的分子機(jī)制提供了理論依據(jù)。