易鑫堯，郭婷莉，張 萌，郁 葉，顏文慧，陳莉娜

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，陜西 西安 710061）

自噬是依賴于溶酶體的細(xì)胞降解過程，對維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和功能的平衡至關(guān)重要，自噬紊亂和人類許多疾病包括癌癥、神經(jīng)退行性疾病以及糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）等密切相關(guān)。自噬可分為巨自噬、微自噬和分子伴侶介導(dǎo)自噬［1］。線粒體自噬屬于巨自噬，通過自噬途徑將受損的線粒體清除以維持細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)態(tài)。根據(jù)自噬受體的分類可將哺乳動物中的線粒體自噬大致分為3類，分別是以P62、BRCA1鄰近基因1蛋白（neighbor of BRCA1 gene 1，NBR1）和視神經(jīng)蛋白（optineurin，OPTN）為自噬受體的PTEN誘導(dǎo)激酶1（PTEN-induced putative kinase1，PINK1）/帕金森病蛋白2（parkinson protein2，parkin）介導(dǎo)的線粒體自噬、以Bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白（recombinant Bcl2/adenovirus E1B 19 ku interacting protein，BNIP)為自噬受體的線粒體自噬以及以FUN14結(jié)構(gòu)域包含蛋白1（FUN14 domain-containing 1，F(xiàn)UNDC1）為自噬受體的線粒體自噬［2］。哺乳動物中主要以PINK1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬為主，其步驟包括自噬前體的形成、自噬體的形成、自噬溶酶體的形成以及線粒體的降解，詳細(xì)過程分述如下：①線粒體自噬信號引發(fā)自噬激活激酶1（unc-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）復(fù)合物形成，ULK1復(fù)合物激活Ⅲ型磷脂酰肌醇3激酶（classⅢphosphatidylinositol 3-kinase，PI3KC3）/Vps34復(fù)合物并產(chǎn)生3-磷酸磷脂酰肌醇〔phosphatidylinositol 3-phosphate，PI3P〕，PI3P標(biāo)記一個特定的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成自噬前體［3］并招募效應(yīng)蛋白WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域磷酸肌醇相互作用蛋白2（WD repeat domain phosphoinositideinteracting protein 2，WIPI2）和雙重FYVE結(jié)構(gòu)域包含蛋白 1（double FYVE-containing protein 1，DFCP1）［4］；② 微管相關(guān)蛋白輕鏈 3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain 3-Ⅰ，LC3-Ⅰ）［5］與磷脂酰乙醇胺（phosphatidyl ethanolamine，PE）結(jié)合生成LC3-Ⅱ并通過WIPI2和DFCP1定位于吞噬泡上［6］。線粒體膜電位去極化使PINK1（PTEN-induced putative kinase 1，PINK1）在線粒體外膜聚集并從胞漿中招募Parkin。Parkin將大量的線粒體外膜蛋白泛素化，使自噬受體定位于線粒體外膜［7-9］。自噬受體通過其特異性的LC3相互作用序列（LC3-interacting region，LIR）與LC3相結(jié)合并將線粒體轉(zhuǎn)移到吞噬泡中，吞噬泡不斷延伸最終封閉形成自噬體；③自噬體和內(nèi)溶酶體融合形成自噬溶酶體，然后自噬溶酶體中的酸性水解酶將線粒體降解從而將損壞的線粒體清除。

糖尿病是全球常見的一種慢性內(nèi)分泌代謝疾病，可引發(fā)多種并發(fā)癥。糖尿病血管病是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，其在臨床上表現(xiàn)為微血管和大血管并發(fā)癥。DN屬于微血管并發(fā)癥，它能引起40%～50%的終期腎疾?。?0］，并且是糖尿病患者的主要死亡原因之一。DN的發(fā)病機制十分復(fù)雜，包括糖基化終產(chǎn)物的增多、氧化應(yīng)激增強、己糖通路及戊二醇通路的激活等［11］。自噬功能異常也在DN進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。DN的病理過程十分復(fù)雜，其不僅是由腎組織內(nèi)單一細(xì)胞的病變而引發(fā)的，而是腎組織中的各個細(xì)胞都可能存在線粒體自噬障礙。本文將分別敘述腎足細(xì)胞、腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞以及腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體自噬紊亂。

1 糖尿病腎病中腎足細(xì)胞的線粒體自噬紊亂

足細(xì)胞又稱為腎小球臟層細(xì)胞，它是構(gòu)成腎小球濾過系統(tǒng)的最后一道屏障，其損傷在糖尿病腎病的發(fā)展進(jìn)程中起重要作用［12］。足細(xì)胞富含線粒體，在很大程度上依靠氧化磷酸化來供能，所以足細(xì)胞中線粒體功能紊亂也在DN進(jìn)程中起重要的作用。很多研究表明，組蛋白去乙酰酶6（histone deacetylase Sirtuin 6，Sirt6）在一些疾病中能影響線粒體的形態(tài)和功能，使線粒體發(fā)生腫脹、空泡化和線粒體嵴消失，并且線粒體膜電位降低以及凋亡引起數(shù)量減少［13-14］。Sirt6在DN病理過程中起重要作用，能通過激活腺苷酸激酶（AMP kinase，AMPK）調(diào)控線粒體的生物合成和降解從而對線粒體起到保護(hù)作用。當(dāng)Sirt6過表達(dá)時，高糖處理過的足細(xì)胞的p-AMPK表達(dá)增加，足細(xì)胞線粒體形態(tài)異常顯著改善，活性氧（reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生降低，足細(xì)胞受損得到改善。鑒于Sirt6和AMPK在調(diào)控自噬活性中起重要作用，高糖環(huán)境下Sirt6和AMPK受抑制則會引起線粒體形態(tài)異常并最終引起線粒體自噬受抑制，從而在DN發(fā)病機制中起重要作用［15］。

高糖環(huán)境下及DN模型中，足細(xì)胞的PINK1，Parkin和LC3表達(dá)顯著下降，而P62的表達(dá)顯著升高，表明足細(xì)胞的線粒體自噬受到抑制［16-18］。研究發(fā)現(xiàn)，在足細(xì)胞核中叉頭盒O1（forkhead-box class O1，F(xiàn)oxO1）能與PINK1基因的啟動子結(jié)合，從而激活PINK1基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)足細(xì)胞線粒體自噬。在高糖環(huán)境下，F(xiàn)oxO1被磷酸化而轉(zhuǎn)移到胞漿中，喪失其轉(zhuǎn)錄活性，線粒體自噬從而受到抑制，線粒體ROS生成增加，線粒體膜電位降低，ATP水平降低。當(dāng)足細(xì)胞中過表達(dá)FoxO1時，F(xiàn)oxO1能與PINK1基因的啟動子相結(jié)合并激活PINK1的轉(zhuǎn)錄，使PINK1表達(dá)增加，從而激活PINK1和Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬。一旦線粒體自噬被激活，則可恢復(fù)線粒體功能并改善足細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而改善DN的病理狀態(tài)［19］。

2 糖尿病腎病中腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的線粒體自噬紊亂

高糖環(huán)境下，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生過度氧化應(yīng)激、細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量過高以及細(xì)胞骨架破壞等，從而導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞選擇透過性降低，引發(fā)蛋白尿的發(fā)生［20-21］。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞是腎小球濾過膜系統(tǒng)的內(nèi)層，其損壞會引發(fā)炎癥和蛋白尿的發(fā)生，故在DN的發(fā)生進(jìn)程中起重要作用［22］。研究表明，在DN小鼠模型和高糖損傷腎小球內(nèi)皮細(xì)胞模型中，線粒體形態(tài)和功能發(fā)生異常，ROS生成增加、線粒體膜電位降低。此外，PINK1和Parkin的表達(dá)降低，線粒體自噬受抑制并且細(xì)胞凋亡增加。而輔酶Q10（coenzyme Q10，CoQ10）能在一定程度上升高腎小球內(nèi)皮細(xì)胞PINK1和Parkin的表達(dá)，激活線粒體自噬，從而在一定程度上改善DN。當(dāng)采用線粒體自噬抑制劑Mdiv或siPINK1作用時，CoQ10的改善作用消失；并且當(dāng)采用核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2）抑制劑ML385作用時，CoQ10的改善作用同樣消失。表明CoQ10是通過Nrf2/抗氧化反應(yīng)元件通路激活線粒體自噬，減少ROS生成，緩解線粒體形態(tài)異常，從而改善DN［23］。

3 糖尿病腎病中腎小球系膜細(xì)胞的線粒體自噬紊亂

腎小球系膜細(xì)胞是腎小球固有的細(xì)胞，腎小球系膜由系膜細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成，細(xì)胞外基質(zhì)包圍細(xì)胞，細(xì)胞外基質(zhì)數(shù)量增多以及發(fā)生肥大在DN進(jìn)程中起重要作用。高糖可誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞中細(xì)胞外基質(zhì)合成［24］，使腎小球系膜細(xì)胞缺血受損而發(fā)展成腎小球硬化［25］，腎小球硬化在DN進(jìn)程中起重要作用。在以臨床樣本為對象的研究中發(fā)現(xiàn)，DN患者腎小球系膜細(xì)胞的PINK1和Parkin的mRNA含量相對正常腎小球系膜細(xì)胞顯著降低，線粒體自噬水平也下降［26］。

在DN模型小鼠和高糖損傷腎小球系膜細(xì)胞模型中，腎小球系膜細(xì)胞線粒體過度分裂碎片化，ROS過度產(chǎn)生，線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔道開放從而使得線粒體依賴性細(xì)胞凋亡被激活［27］。同時，Parkin和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表達(dá)降低，而P62的表達(dá)增加，線粒體自噬受抑制。研究表明，上述變化是由核受體NR4A1（nuclear receptor subfamily 4 group A member 1，NR4A1）通過激活線粒體分裂和抑制PINK1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬引起的。在高糖環(huán)境下，系膜細(xì)胞中NR4A1表達(dá)增加從而激活P53的表達(dá)，而P53則會上調(diào)線粒體分裂因子的表達(dá)，從而激活線粒體分裂并下調(diào)Parkin的表達(dá)，進(jìn)而抑制線粒體自噬。當(dāng)敲除NR4A1基因時，線粒體分裂下降，氧化應(yīng)激水平得以改善，線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔道開放受抑制，促凋亡蛋白進(jìn)入胞漿減少，從而凋亡受到抑制。此外，PINK1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬被激活使受損線粒體得以清除，細(xì)胞穩(wěn)態(tài)得以維持，DN得以改善［28］。

在DN患者中晚期糖基化終末產(chǎn)物（advancedglycation endproducts，AGE）增多且清除降低。研究表明，AGE和高糖能促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞線粒體膜電位去極化，使ROS產(chǎn)生增多，并且膜電位降低激活胱天蛋白酶9，而胱天蛋白酶9反過來激活胱天蛋白酶3從而引發(fā)系膜細(xì)胞凋亡［29］。ROS的過度產(chǎn)生及線粒體膜電位的去極化也會激活自噬及線粒體自噬，從而清除受損的線粒體，降低ROS水平，減少腎小球系膜細(xì)胞凋亡。而線粒體自噬受阻礙會引起系膜細(xì)胞凋亡增加，從而引起系膜細(xì)胞丟失，導(dǎo)致腎小球硬化［25，30］。

4 糖尿病腎病中腎小管上皮細(xì)胞的線粒體自噬紊亂

腎小管上皮細(xì)胞損傷會引起腎間充質(zhì)炎癥和纖維化，從而在DN進(jìn)程中起重要作用。OPTN是線粒體自噬中重要的線粒體自噬受體，它包含泛素結(jié)合序列，能將具有多聚泛素鏈的線粒體和LIR結(jié)合，從而形成自噬體。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3（nucleotide-binding oligomerization domainlike receptor family pyrin domain-containing 3，NLRP3）炎癥小體能促進(jìn)腎間充質(zhì)炎癥，從而在DN發(fā)展中起重要作用［31］。在DN中，線粒體碎片化產(chǎn)生過多的ROS，激活NF-κB信號通路，從而使NLRP3，白介素 1β前體（pro-interleukin-1 beta，pro-IL1β）和白細(xì)胞介素18（interleukin-18，IL-18）轉(zhuǎn)錄增加，NLRP3炎癥小體被激活［32-33］。NLRP3炎癥小體的激活在DN的發(fā)病機制中起重要的作用。研究表明，在高糖存在下，腎小管上皮細(xì)胞中動態(tài)相關(guān)蛋白1（dynamin-related protein-1，Drp-1）表達(dá)增加而線粒體融合蛋白2（mitofusin2，Mfn2）的表達(dá)降低，線粒體碎片化加劇，且線粒體膜電位降低。此外，高糖環(huán)境下，腎小管上皮細(xì)胞的NLRP3炎癥小體表達(dá)增加，PINK1，Parkin和OPTN的表達(dá)下降，P62表達(dá)增加，線粒體自噬受到抑制。當(dāng)過表達(dá)OPTN時，NF-κB信號通路受到抑制，且NLRP3炎癥小體的激活受到抑制，線粒體自噬顯著增加，線粒體ROS顯著減少，受損的線粒體得以清除，DN從而得到改善［34-35］。

損壞的線粒體會產(chǎn)生過量ROS，造成線粒體氧化應(yīng)激，并引起促凋亡因子釋放而造成細(xì)胞凋亡，同樣過量ROS和高糖環(huán)境也會抑制線粒體自噬途徑，使細(xì)胞不能清除受損的線粒體，從而產(chǎn)生更多的ROS［36］。MitoQ是靶向線粒體的抗氧化劑，研究發(fā)現(xiàn)，其能增強高糖引起的腎小管上皮細(xì)胞的線粒體自噬缺陷，從而發(fā)揮對腎小管上皮細(xì)胞的保護(hù)作用，并且這種作用是通過Nrf/PINK1途徑調(diào)控的［37-38］。在高糖環(huán)境下，腎小管上皮細(xì)胞中的Drp-1表達(dá)顯著升高，而Mfn2的表達(dá)顯著降低，此外線粒體的膜電位和ATP的活性也都降低，這表明線粒體受損，線粒體過度分裂，并且線粒體融合受到抑制。同時腎小管上皮細(xì)胞中LC3Ⅱ，PINK1，Parkin和Nrf2的表達(dá)顯著下降，P62和Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein，Keap1）表達(dá)顯著升高，而細(xì)胞內(nèi)和線粒體中的ROS顯著增加，表明線粒體自噬受到抑制。當(dāng)MitoQ處理高糖環(huán)境中的腎小管上皮細(xì)胞時，PINK1和Parkin表達(dá)升高，線粒體自噬水平升高，細(xì)胞損傷得到改善。而當(dāng)沉默Keap1時，線粒體自噬水平升高作用增強；當(dāng)沉默Nrf2時，線粒體自噬水平升高作用減弱，表明MitoQ是通過Nrf/PINK1途徑調(diào)控PIN1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬，從而增強線粒體自噬水平，改善腎小管上皮細(xì)胞損傷［39］。

5 結(jié)語

本綜述從線粒體自噬在DN發(fā)病機制中的重要作用出發(fā)，介紹了哺乳動物中主要由PINK1和Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬的具體機制。此外，還介紹了DN中腎組織各細(xì)胞中所發(fā)生的線粒體自噬紊亂，造成細(xì)胞損傷甚至死亡，最終促進(jìn)DN的發(fā)生發(fā)展（圖1）。雖已確定線粒體自噬在DN發(fā)病機制中起重要作用，但其在腎組織各細(xì)胞中的具體機制仍不明確，有待進(jìn)一步探究。

圖1 腎組織中足細(xì)胞、腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞4種細(xì)胞線粒體自噬紊亂.

DN發(fā)病早期難以診斷。目前，診斷DN的標(biāo)志物是蛋白尿，但由于有些DN患者并未出現(xiàn)蛋白尿，使DN的診斷變得更加困難。目前，臨床上用于治療DN的藥物主要包括降低心血管風(fēng)險、控制血糖、控制血壓及抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)的藥物，但它們只能延緩DN的進(jìn)展，并不能逆轉(zhuǎn)DN所引起的病理變化。所以，現(xiàn)在迫切需要發(fā)現(xiàn)治療DN的新靶點，旨在根治DN，降低DN的高發(fā)生率和死亡率。

線粒體為細(xì)胞提供生命所必需的能量，線粒體自噬紊亂會引起損傷的線粒體清除障礙，造成線粒體的形態(tài)異常和功能紊亂，從而引發(fā)機體疾病。增強線粒體自噬可恢復(fù)線粒體正常的形態(tài)和功能，并改善腎細(xì)胞的功能形態(tài)。所以，將線粒體自噬作為治療DN的新靶點可能為治療DN帶來新的曙光。但當(dāng)前由于線粒體自噬中的具體信號通路及作用機制還未闡明，所以目前通過改善線粒體自噬來治療DN還有待繼續(xù)研究。