余楊 付艷麗 衛(wèi)瑋 何利珍 孫翔

河南理工大學(xué)第一附屬醫(yī)院（河南省焦作市第二人民醫(yī)院）檢驗(yàn)科（河南焦作454100）

研究表明，近100%的宮頸癌由人乳頭瘤病毒（HPV）感染所致［1-2］，宮頸癌發(fā)生隱匿，緩慢演進(jìn)，癌前病變即宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）階段明顯，不同臨床分期的宮頸癌5年生存率相差極大，Ⅰ～Ⅱ期高達(dá)80%～90%，Ⅲ～Ⅳ期降至30%～40%［3-4］，因此，宮頸癌和CIN 的早期篩查、診療不僅可行且至關(guān)重要。宮頸癌病因明確，但發(fā)病過(guò)程仍有許多不確定因素，發(fā)病機(jī)制尚不完全明了，目前已達(dá)成的共識(shí)：HPV 誘導(dǎo)惡性腫瘤發(fā)生不是病毒生命周期中的必然事件，不能用單一理論確切解釋，有關(guān)宮頸癌的研究多集中于HPV、宿主、環(huán)境這三方面。HPV 的檢測(cè)已經(jīng)由基因分型以降低漏檢率的初篩拓展為病毒復(fù)制、蛋白表達(dá)、表觀修飾等更注重特異性的精準(zhǔn)檢驗(yàn)［5-7］，宮頸局部免疫微環(huán)境研究是基于HPV“非溶細(xì)胞”病毒，具有高度組織特異性等自然特性，由免疫抑制細(xì)胞構(gòu)筑的免疫抑制微環(huán)境可通過(guò)免疫耐受、免疫逃逸等機(jī)制促進(jìn)HPV 持續(xù)感染和宮頸病變進(jìn)展因而備受關(guān)注［8］。調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）是一群發(fā)揮外周耐受和免疫抑制功能獨(dú)特的輔助性T 細(xì)胞亞群，叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3（Foxp3）是Treg 的特征性分子標(biāo)志，在多方面對(duì)腫瘤免疫應(yīng)答從啟動(dòng)識(shí)別到產(chǎn)生效應(yīng)的整個(gè)階段全程調(diào)控，但將腫瘤抗原HPV 的復(fù)制增殖和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）與宮頸癌的發(fā)生進(jìn)行量效聯(lián)系的研究及其診斷閾值確定的報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)分析高危型HPV 載量（HR?HPV DNA）和CD4+CD25+Foxp3+Treg 作為宮頸癌診斷指標(biāo)的可行性，研究?jī)芍笜?biāo)單一和聯(lián)合檢測(cè)的診斷性能，確定高靈敏性和高特異性的最佳閾值，探討最優(yōu)模式在宮頸癌的臨床意義，同時(shí)考慮到HR?HPV 載量是針對(duì)DNA 的檢測(cè)，而HPV E6/E7 mRNA 能較好地反映HPV 致癌基因E6/E7 的表達(dá)［6］，故對(duì)三個(gè)指標(biāo)間的關(guān)系進(jìn)行了簡(jiǎn)單分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2012年1月至2015年9月經(jīng)液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)（TCT）篩查、HPV 基因分型檢測(cè)（PCR-反向點(diǎn)雜交法），最終宮頸病理活檢三階梯程序確診的HR?HPV 持續(xù)性感染的不同宮頸病變病例，包括CIN I 71 例、CIN II 66 例、CIN III 77 例，宮頸癌125 例，年齡范圍34～62 歲，中位年齡46.43 歲，不同宮頸病變組的年齡無(wú)顯著差異，具有可比性。HR?HPV 以16 型、52 型、58 型為主，其次31 型、33 型，其余為少見(jiàn)分型。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）孕婦；（2）合并其他惡性腫瘤或自身免疫性疾??；（3）近期使用過(guò)免疫抑制類藥物；（4）HIV 陽(yáng)性；（5）有放化療史；（6）2 周內(nèi)接受過(guò)局部或全身抗病毒藥物治療。持續(xù)性HR?HPV 感染的定義［9-10］：HR?HPV 感染者第1年隨訪1 次/4 個(gè)月，以后至少1 次/6 個(gè)月，在間隔6～12 個(gè)月的相鄰2 次隨訪中，同一患者的宮頸檢測(cè)樣本均顯示HR?HPV 陽(yáng)性且為同型，持續(xù)時(shí)間2年以上，避免短期內(nèi)重復(fù)取樣，間隔時(shí)間至少2 個(gè)月?；颊咧橥?，隨訪資料完整。

1.2 主要儀器與試劑 采用美國(guó)BD FACS Calibur雙激光流式細(xì)胞儀，配有BD CellQuest 軟件。鼠抗人FITC?CD4 單克隆抗體、鼠抗人PE?CD25 單克隆抗體、鼠抗人PE?Cy5?Foxp3 單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)eBioscience 公司。PCR 擴(kuò)增儀DA7600 型和HR?HPV 核酸定量（16、18、31、33、45、52、56、58 共8 型）檢測(cè)試劑盒均由中山大學(xué)達(dá)安基因公司提供。QuantiVirusTM便攜式冷光儀和HR?HPV E6/E7 mRNA（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 共14 型）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自科蒂亞（新鄉(xiāng)）生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 采用宮頸刷檢物制備宮頸病變單細(xì)胞懸液 選擇月經(jīng)后半周期進(jìn)行取樣，用陰道窺器充分暴露宮頸陰道部，干棉球拭凈宮頸口過(guò)多的黏液、分泌物和血液，觀察宮頸，將刷頭置于宮頸管，其中央較長(zhǎng)的刷絲針對(duì)新鮮病變部位，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5 圈，取下刷頭，并將其浸泡在含液基細(xì)胞學(xué)保存液的瓶中，用溶血?jiǎng)┤コ?，再?00 目尼龍網(wǎng)過(guò)濾雜質(zhì)，標(biāo)本轉(zhuǎn)入試管離心5 min（402×g），棄上清液，PBS 洗滌，密度梯度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，≥106個(gè)。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)單細(xì)胞懸液中Treg 細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度至（1～2）× 107個(gè)/mL，用PBS 洗滌、重懸，取上述細(xì)胞100 μL，加入FITC?CD4、PE?CD25各5 μL，混勻，室溫避光20 min，加冷固定破膜劑1 mL，4 ℃避光孵育30 min，加破膜緩沖液2 mL，洗滌2 次，棄上清，加PE?Cy5?Foxp3 抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，4 h 內(nèi)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。用空白管調(diào)節(jié)電壓，以CD25 同型對(duì)照調(diào)節(jié)補(bǔ)償，確定CD4+CD25+細(xì)胞群，再以CD4+CD25+細(xì)胞設(shè)門，以Foxp3 同型對(duì)照確定陽(yáng)性信號(hào)，最后測(cè)定CD4CD25Foxp3 管，檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞中的百分率。

1.3.3 HPV DNA 定量檢測(cè) 無(wú)菌條件下采用宮頸刷插入宮頸內(nèi)，旋轉(zhuǎn)數(shù)周后停留片刻取出，將宮頸刷置入無(wú)菌管，采集的宮頸分泌物及時(shí)送檢或4 ℃保存，1 周內(nèi)檢測(cè)。DNA 提取和PCR 擴(kuò)增按其說(shuō)明書(shū)（PCR 熒光法）進(jìn)行具體操作。判斷標(biāo)準(zhǔn)：HPV?DNA＞103copies/mL 為陽(yáng)性。

1.3.4 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè) 取樣同HPV DNA，采用支鏈DNA（branch?DNA，bDNA）信號(hào)擴(kuò)增法，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行如下操作，先將樣品離心5 min（1 610×g），棄上清，加入2 mL 雙蒸水清洗，再次離心，棄上清，加入裂解液混勻，再加入蛋白酶K，65 ℃孵育1 h，留取上清，再經(jīng)過(guò)布板、信號(hào)放大、添加底物等過(guò)程后放置冷光儀檢測(cè)，得到光子數(shù)后經(jīng)軟件轉(zhuǎn)化為mRNA 拷貝數(shù)，以mRNA 拷貝數(shù)≥1 copy/mL 為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。病毒載量經(jīng)log 轉(zhuǎn)換，兩指標(biāo)聯(lián)合包括并聯(lián)（任一指標(biāo)陽(yáng)性）和串聯(lián)（兩指標(biāo)同時(shí)陽(yáng)性），計(jì)算公式：（1）靈敏度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（真陰性＋假陽(yáng)性）×100%；（2）并聯(lián)：靈敏度=A 靈敏度+（1-A 靈敏度）×B 靈敏度，特異度=A 特異度×B 特異度；（3）串聯(lián)：靈敏度=A 靈敏度×B 靈敏度，特異度=A 特異度+（1-A 特異度）×B 特異度。以病理組織活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制受試者工作特性曲線（ROC），比較HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 單獨(dú)和聯(lián)合診斷宮頸癌的曲線下面積（AUC），確定最佳閾值，采用診斷試驗(yàn)四格表法計(jì)算評(píng)價(jià)指標(biāo)（靈敏度和特異度），預(yù)測(cè)指標(biāo)（陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值）和綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)（正確率、陽(yáng)性似然比、陰性似然比、Youden 指數(shù)）。采用Pearson 線性相關(guān)分析上述兩指標(biāo)與HPV E6/E7mRNA 表達(dá)水平之間的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 繪制HR?HPV DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線 PCR熒光法閾值設(shè)定原則是值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線（圖1）的最高點(diǎn)，且循環(huán)閾值（Ct）不出現(xiàn)任何數(shù)值。以標(biāo)準(zhǔn)品4個(gè)濃度（1×103～1×106copies/mL）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，Ct 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）。Ct 值與樣本起始模板的拷貝數(shù)呈正相關(guān)，與起始模板拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值間有嚴(yán)格的線性反比關(guān)系。

圖1 PCR 熒光法檢測(cè)HR?HPV DNA 的擴(kuò)增曲線Fig.1 Amplification curve of HR?HPV DNA detection by PCR fluorescence method

圖2 PCR 熒光法檢測(cè)HR?HPV DNA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of HR?HPV DNA detection by PCR fluorescence method

2.2 HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)宮頸癌的診斷效能評(píng)價(jià) 以HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)合為檢驗(yàn)變量，隨訪期限內(nèi)是否發(fā)生宮頸癌為狀態(tài)變量，繪制ROC 曲線（圖3），HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)檢的AUC 分別為0.615、0.805 和0.825（均P＜0.05，表1）。不同水平的HR?HPV DNA 和CD4+CD25+Foxp3+Treg 診斷宮頸癌的準(zhǔn)確性參數(shù)見(jiàn)表2，其最佳閾值（靈敏度+特異度最大）分別為6.015 和7.995%，以此為截?cái)帱c(diǎn)，HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg、兩項(xiàng)并聯(lián)和串聯(lián)診斷宮頸癌的效能評(píng)價(jià)：（1）真實(shí)性：靈敏度分別為56.0%、80.8%、93.3%和47.5%，特異度分別為78.5%、74.3%、58.3%和94.5%，陽(yáng)性似然比分別為2.605、3.144、2.237 和8.636，陰性似然比分別為0.561、0.258、0.115 和0.556，YI 分別為0.345、0.591、0.516 和0.420。（2）收益性：陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為60.3%、64.8%、56.3%和83.1%，陰性預(yù)測(cè)值分別為75.3%、89.3%、93.2%和75.4%。（3）可靠性：正確率分別為72.3%、80.0%、72.9%和79.3%（表3）。

圖3 HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)檢診斷宮頸癌的ROC 曲線Fig.3 ROC Curve of HR?HPV DNA，CD4+CD25+Foxp3+Treg and the combined diagnosis of cervical cancer

表1 HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)檢診斷宮頸癌的AUCTab.1 Area under the curve of HR?HPV DNA，CD4+CD25+Foxp3+Treg and the combined diagnosis of cervical cancer

2.3 線性相關(guān)分析結(jié)果 經(jīng)Pearson 線性相關(guān)分析，HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)水平與HR?HPV DNA 和CD4+CD25+Foxp3+Treg 均具有正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)依次為0.583 和0.601，均P=0.000。

表2 不同水平的HR?HPV DNA 和CD4+CD25+Foxp3+Treg 診斷宮頸癌的準(zhǔn)確性參數(shù)Tab.2 Accuracy parameters of HR?HPV DNA and CD4+CD25+Foxp3+Treg in the diagnosis of cervical cancer at different levels

表3 HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸癌的效能評(píng)價(jià)比較Tab.3 Effectiveness evaluation comparison among HR?HPV DNA，CD4+CD25+Foxp3+Treg and the two indicators in the diagnosis of cervical cancer

3 討論

宮頸癌的生物標(biāo)志物多種多樣，臨床常規(guī)項(xiàng)目的HPV 基因型檢測(cè)具有高靈敏度（優(yōu)于TCT 92.6%vs.66.0%）［11］、高陰性預(yù)測(cè)度、高檢測(cè)效率的優(yōu)勢(shì)，可明顯降低宮頸癌的漏診率，但HPV 感染的普遍性和自限性特點(diǎn)，使得HPV 檢測(cè)特異度低，陽(yáng)性預(yù)測(cè)度不高，僅能提示感染，更適合初篩，不能確定是否宮頸病變，更無(wú)法對(duì)宮頸病變的嚴(yán)重程度、發(fā)展轉(zhuǎn)歸方向提供精準(zhǔn)信息，可能造成或盲目或過(guò)度的治療，而缺乏前瞻性預(yù)判很可能錯(cuò)過(guò)CIN到浸潤(rùn)癌的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。宮頸癌發(fā)生發(fā)展是多因素調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，僅僅HPV 誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)DNA 突變是不夠的，還需在慢性炎癥的持續(xù)刺激下不斷累積變異，再加上微環(huán)境改變腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，促發(fā)惡性特征轉(zhuǎn)化的強(qiáng)大激活信號(hào)，基因組、微環(huán)境、炎癥和免疫體系發(fā)生改變的綜合結(jié)果導(dǎo)致了癌變的風(fēng)險(xiǎn)［12-13］，因此，基于HPV 感染并能方便無(wú)創(chuàng)、準(zhǔn)確量化地反映宮頸癌生物學(xué)行為變化趨勢(shì)的標(biāo)志物是臨床重點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：HR?HPV DNA、CD4+CD25+Foxp3+Treg 和兩指標(biāo)聯(lián)檢的AUC，均具有對(duì)宮頸癌的預(yù)測(cè)價(jià)值（均P＜0.05），但HR?HPV DNA 的AUC在0.6～0.8之間，準(zhǔn)確性中等偏下，明顯低于Treg，提示HR?HPV DNA 在宮頸癌診斷上存在一定局限。HR?HPV DNA 與宮頸癌的關(guān)系上尚存一定的爭(zhēng)議，有的研究認(rèn)為HPV 載量與宮頸癌正向相關(guān)［5］，但也有不同的報(bào)道認(rèn)為HR?HPV 病毒載量與CIN和宮頸癌發(fā)生有關(guān)，但與病變的嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)［14］，除外HR?HPV 類型和單一/多重感染的復(fù)雜性，機(jī)體的反應(yīng)差異性，一方面病毒復(fù)制不一定與樣本采集恰在同一時(shí)間點(diǎn)，且HR?HPV 病毒檢測(cè)多是游離和整合狀態(tài)下總的HPV，不能完全反映HPV病毒的整合狀態(tài)，另一方面在高載量慢性病毒感染性疾病中，T 細(xì)胞發(fā)生表型及功能的缺陷，最終出現(xiàn)T 細(xì)胞耗竭，因此病變進(jìn)展到高級(jí)別CIN 和宮頸癌階段后，細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化可能不再依賴高載量的HR?HPV，反而是免疫抑制狀態(tài)下HPV 拷貝數(shù)有增加的可能［15-16］，而由本實(shí)驗(yàn)上述兩指標(biāo)聯(lián)合后準(zhǔn)確性并未大幅提升也可看出HR?HPV DNA的診斷效能欠佳以及宮頸局部免疫抑制作用較HR?HPV 持續(xù)感染的重大，HR?HPV 持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的啟動(dòng)因素，同時(shí)還需其他因素協(xié)同維持。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，HR?HPV DNA 在最佳閾值時(shí)有相對(duì)略高的診斷特異度，靈敏度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較低，若以6.241 為截?cái)帱c(diǎn)，靈敏度和特異度與最佳閾值時(shí)相差不大，而在6.375 截?cái)帱c(diǎn)，特異度雖有上升，但靈敏度降至46.4%，顯示患癌者和非癌者區(qū)間較易發(fā)生重疊，整體而言HR?HPV DNA不是準(zhǔn)確預(yù)測(cè)宮頸癌發(fā)生很好的指標(biāo)，但在略高的病毒載量小范圍仍有預(yù)警作用，陰性預(yù)測(cè)值僅為中等偏下水平，不是排除宮頸癌的可靠指標(biāo)，有證據(jù)表明［17-18］，慢性炎癥可觸發(fā)促炎介質(zhì)和免疫抑制細(xì)胞的積聚，激活或加重免疫抑制，誘導(dǎo)和促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展，且本研究發(fā)現(xiàn)HR?HPV DNA 與反映HPV 致癌基因惡性轉(zhuǎn)化的HPV E6/E7 顯著正相關(guān)，因此，筆者認(rèn)為高載量的HR?HPV 更易誘發(fā)慢性炎癥，增加細(xì)胞惡化的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)較高載量的病毒攜帶者應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)。

CD4+CD25+Foxp3+Treg 預(yù)測(cè)宮頸癌的準(zhǔn)確性較高，診斷宮頸癌的最佳閾值為7.995，在此截?cái)帱c(diǎn)有較高的診斷靈敏度和陰性預(yù)測(cè)值，特異度略低于HR?HPV DNA，它的正確率和YI 均高于病毒載量和兩指標(biāo)聯(lián)檢，顯現(xiàn)了其作為診斷指標(biāo)的可靠性和正確符合率。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境具有的異質(zhì)性，不僅影響CD4+CD25+Foxp3+Treg 的表達(dá)水平，且發(fā)揮的生物學(xué)功能存在致病性差異，一方面免疫逃逸導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫無(wú)應(yīng)答或免疫反應(yīng)低下，廣泛抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)［19］；另一方面，對(duì)持續(xù)炎癥刺激形成保護(hù)性生理防御反應(yīng)，在防止過(guò)強(qiáng)的免疫損傷和清除病原體之間維持平衡，在病毒感染過(guò)程中可使組織損傷程度最小化［20-21］。本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象為HR?HPV 持續(xù)感染者，高度的炎性環(huán)境也可上調(diào)Treg 的表達(dá)，這可能是其特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值不高的原因，雖不能反映病情的嚴(yán)重程度，但能靈敏地提示免疫調(diào)控趨勢(shì)變化與宮頸癌的關(guān)系，適合監(jiān)測(cè)評(píng)估癌癥發(fā)展進(jìn)程和機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。若以8.250 0 為截?cái)帱c(diǎn)，預(yù)測(cè)宮頸癌的靈敏度和特異度有明顯變化，分別為70.8%和88.8%，特異度顯著提升，靈敏度亦在可接受的中等水平范圍內(nèi)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值78.6%，陰性預(yù)測(cè)值83.7%，正確率、YI 分別為82.9%和0.596，綜合評(píng)價(jià)診斷價(jià)值高于最佳閾值。選擇最佳靈敏度-特異度平衡所產(chǎn)生的臨界點(diǎn)7.995 抑或更高特異性兼顧敏感度的臨界點(diǎn)8.250 作為CD4+CD25+Foxp3+Treg 的陽(yáng)性臨界值，筆者建議一是將7.995～8.250 設(shè)為灰區(qū)，結(jié)合其他生物學(xué)指標(biāo)，定期復(fù)檢；二是對(duì)一過(guò)性感染者可選擇較低的7.995 0，以增加靈敏度，減少漏診率，對(duì)持續(xù)感染者可選擇較高的8.250 0，以增加特異度，減少誤診和過(guò)度診療的可能。文獻(xiàn)報(bào)道也有相近的結(jié)論，持續(xù)感染者較一過(guò)性感染者Treg 細(xì)胞數(shù)量增加更明顯，其細(xì)胞免疫受抑制的程度更顯著［22-23］，在臨床實(shí)際工作中，應(yīng)結(jié)合受試人群特征（如年齡、發(fā)病率等）、不同篩檢目的設(shè)置一個(gè)相對(duì)合理的臨界點(diǎn)，或偏重靈敏度或偏重特異度，以提高檢測(cè)的相對(duì)準(zhǔn)確性。

腫瘤細(xì)胞發(fā)展過(guò)程中不可避免地表達(dá)一些抗原，這些抗原或通過(guò)免疫監(jiān)視被清除，或通過(guò)免疫逃逸形成持續(xù)性感染，均會(huì)觸發(fā)機(jī)體抗瘤/抑瘤兩種截然不同的免疫應(yīng)答，這是本實(shí)驗(yàn)將HR?HPV DNA 和Treg 聯(lián)合檢驗(yàn)的理論依據(jù)，樣本均來(lái)自同一微環(huán)境，減少了異質(zhì)性的干擾，對(duì)抗原和免疫狀態(tài)進(jìn)行同步監(jiān)測(cè)，反應(yīng)了兩者相互作用導(dǎo)致的病變消長(zhǎng)，結(jié)果顯示：兩指標(biāo)并聯(lián)時(shí)的靈敏度高達(dá)93.3%，陰性預(yù)測(cè)值93.2%，串聯(lián)時(shí)的特異度高達(dá)94.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值83.1%，因此，在實(shí)際工作中有兩指標(biāo)聯(lián)檢的必要性，選擇并聯(lián)還是串聯(lián)，可適具體情況而定，在特定人群的篩查上可選擇靈敏度高的并聯(lián)實(shí)驗(yàn)以減少漏診率，其極高的陰性預(yù)測(cè)值高說(shuō)明在排除疾病方面是合理和可靠的方法，若是作為確診指標(biāo)串聯(lián)實(shí)驗(yàn)為最佳模式。