陳靜 丁潔 沙芮 李瑞賓 牛犇

摘要：采用Gemini C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速為1 mL/min，柱溫40 ℃，波長切換（0～20 min，在370 nm波長下檢測蘆丁，20～30 min，在280 nm波長下檢測槲皮素和橙黃決明素），進(jìn)樣量20 μL，流動(dòng)相為甲醇（A）-水（B）。結(jié)果表明，橙黃決明素在1.977 2～98.860 0 μg/mL（R2=0.999 7）線性關(guān)系良好，平均回收率為98.81%，RSD為2.0 %;蘆丁在1.958 0～97.900 0 μg/mL（R2=0.999 6）線性關(guān)系良好，平均回收率為98.16%，RSD為2.2%;槲皮素在2.283 6～114.18 μg/mL（R2=0.999 6）線性關(guān)系良好，平均回收率為100.44%，RSD為3.0%。藥食同源降脂片中橙黃決明素平均含量0.053 2 mg/g，RSD為1.36%;蘆丁平均含量0.847 0 mg/g，RSD為0.65%;槲皮素平均含量0.040 9 mg/g，RSD為0.80%。該方法操作簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重復(fù)性好，可用于藥食同源降脂片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法（HPLC）;橙黃決明素;蘆丁;槲皮素;藥食同源降脂片

中圖分類號(hào)：S132? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）02-0111-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.02.025? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

據(jù)2017年中國新近公布的流行病學(xué)資料顯示，全國血脂異常的患病率為18.6%，現(xiàn)有患者1.6億人，研究開發(fā)新型純天然中藥降脂類藥物及保健品十分重要。目前臨床上廣泛應(yīng)用他汀類藥物來治療高血脂癥并預(yù)防心腦血管病癥意外發(fā)生，療效較顯著。但長期或大劑量使用他汀類藥物可能會(huì)導(dǎo)致心臟橫肌紋溶解、肝臟組織細(xì)胞生物化學(xué)變化等嚴(yán)重不良反應(yīng)[1，2]。

本研究所用的藥食同源降脂片是由山楂（去核）、決明子、洋蔥、黃瓜和枸杞等純天然物質(zhì)經(jīng)過粉碎、提取、濃縮、干燥、打粉、壓片而制得，具有降血脂、活血通經(jīng)、益精血等作用。其中，決明子中的橙黃決明素[3，4]、山楂中的三萜酸和黃酮[5-8]、枸杞中的多糖和木耳多糖、洋蔥中的蒜氨酸酶[9]等均對降低血脂有顯著功效。且有研究表明，決明子和山楂配合在一起有較好的降血脂作用[10]。

決明子為臨床常用中藥，是國家衛(wèi)生部公布的既是食品又是藥品的中藥材，臨床應(yīng)用表明其降脂作用明確[11]，療效可靠、副作用少，但與其他傳統(tǒng)中藥一樣，存在著成分復(fù)雜、機(jī)理不十分清楚等缺點(diǎn)。據(jù)近年來的研究報(bào)道，決明子中的專屬成分橙黃決明素能顯著增強(qiáng)LDLR基因轉(zhuǎn)錄水平，為決明子中有效降脂成分，已有基于GC-MS的代謝組學(xué)研究了橙黃決明素治療高血脂癥大鼠血漿中代謝物的變化，多元統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)了橙黃決明素可以較好地調(diào)節(jié)高血脂癥大鼠血脂水平。橙黃決明素作用于氨基酸及脂肪酸的代謝通路，能夠達(dá)到較好的調(diào)脂作用。

山楂是一種常用中藥，味酸、甘，性微溫，歸脾、胃、肝經(jīng)，具有消食健胃、行氣散疲功能，用于肉食積滯，胃脘脹滿，瀉痢腹痛，疲血經(jīng)閉，產(chǎn)后疲阻，心腹刺痛，病氣疼痛、高脂血癥等。近年來，更廣泛用于治療心血管疾病和抗菌消炎，引起國內(nèi)外學(xué)者的注意和重視。山楂降壓、增加冠脈血流量、降低血脂、耐缺氧、強(qiáng)心、抗心率不齊的有效成分為黃酮類化合物，其主要成分為蘆丁、金絲桃普、槲皮素等，而黃酮類化合物的藥理研究也顯示降血脂作用[12]。故本研究選擇橙黃決明素、蘆丁和槲皮素作為藥食同源降脂片的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立了HPLC法同時(shí)測定藥食同源降脂片中的橙黃決明素、蘆丁和槲皮素含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

橙黃決明素對照品（52850010）、蘆丁對照品（E2260050）、槲皮素對照品（E3680050）購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司（純度均>98%）;藥食同源降脂片（甘肅省商業(yè)科技研究所，批號(hào)2017010606）;甲醇為色譜純（Amethyst Chemicals，LCB0M02），水為去離子水，其他試劑均為色譜純。

1.2? 試驗(yàn)儀器

UPT-I-20L型落地式純水機(jī)（四川優(yōu)普超純科技）;XS225A型電子分析天平（普利塞斯，瑞士）;LC-20A型高效液相色譜儀（島津）。

1.3? 方法

1.3.1? 工藝流程? 原料→分揀→粉碎→提取→過濾→濃縮→噴霧干燥→干粉→輔料配比→混合→濕法制?！稍铩！偦臁鷫浩b→成品。

1.3.2? 溶液配制

1）對照品溶液。分別精密稱取橙黃決明素、蘆丁和槲皮素對照品0.004 95、0.004 93和0.005 82 g，分別置于10 mL容量瓶中，加入甲醇定容成含橙黃決明素0.494 3 mg/mL，蘆丁0.489 5 mg/mL，槲皮素0.570 9 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液溶液。

2）供試品溶液。取藥食同源降脂片20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉1 g，置10 mL量瓶中，加入淀粉酶溶液1 mL，調(diào)節(jié)pH在4～5。將樣品溶液在室溫下放置7～8 h，使藥片中淀粉水解，加入純甲醇溶液加熱回流4 h，冷卻后揮干溶劑，用甲醇定容至10 mL，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，取濾液為供試品溶液。

1.3.3? 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)? 色譜條件：Gemini C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流速1.0 mL/min，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量20 μL。檢測波長為0～20 min，370 nm;20～30 min，280 nm。流動(dòng)相為水（A）∶甲醇（B）=70∶30。橙黃決明素、蘆丁、槲皮素色譜峰分離良好。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 線性試驗(yàn)

分別精密吸取橙黃決明素、蘆丁、槲皮素混合對照品溶液，稀釋至濃度為2、10、50、80、100 μg/mL。以進(jìn)樣量（μg）對峰面積（A）進(jìn)行線性回歸，得橙黃決明素、蘆丁、槲皮素回歸方程見表1，表明橙黃決明素在1.977 2～98.860 0 μg/mL線性關(guān)系良好，蘆丁在1.958 0～97.900 0 μg/mL線性關(guān)系良好，槲皮素在2.283 6～114.180 0 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.2? 精密度試驗(yàn)

分別吸取橙黃決明素、蘆丁、槲皮素儲(chǔ)備液各10 μL，用甲醇定容至1 mL，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算橙黃決明素、蘆丁和槲皮素峰面積的RSD分別為0.53%、0.64%和0.52%，表明精密度良好。

2.3? 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批藥食同源降脂片，按“1.3.2”方法制備6份供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示橙黃決明素、蘆丁、槲皮素平均含量為0.053 2、0.847 0和0.040 9 mg/g，RSD分別為1.36%、0.65%和0.80%。

2.4? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取樣品細(xì)粉1 g，按“1.3.2”方法制供試品溶液，分別于配制后0、2、8、16和24 h各進(jìn)樣20 μL，得橙黃決明素、蘆丁和槲皮素色譜峰峰面積的RSD分別為1.24%、0.79%和1.46%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5? 加樣回收試驗(yàn)

取己知各成分含量的藥食同源降脂片20片（橙黃決明素含量0.053 2 mg/mL，蘆丁含量0.847 0 mg/mL，槲皮素含量0.040 9 mg/mL），研細(xì)后精密稱取細(xì)粉0.5 g，共6份（相當(dāng)于含橙黃決明素0.026 6 mg、蘆丁0.423 5 mg、槲皮素0.020 4 mg），至10 mL容量瓶中，加入橙黃決明素對照品溶液54 μL（質(zhì)量濃度0.494 3 mg/mL）、蘆丁對照品溶液865 μL（質(zhì)量濃度0.489 5 mg/mL）、槲皮素對照品溶液36 μL（質(zhì)量濃度0.570 9 mg/mL），按“1.3.2”條件配制，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表2。

2.6? 樣品含量測定

取3瓶樣品，每瓶藥品隨機(jī)取3組藥片，按“1.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表3。藥片中橙黃決明素平均含量0.053 2 mg/g，RSD為1.36%;蘆丁平均含量0.847 0 mg/g，RSD為0.65%;槲皮素平均含量0.040 9 mg/g，RSD為0.80%。

3? 討論

關(guān)于高效液相色譜法同時(shí)測定蘆丁和槲皮素含量的文獻(xiàn)[13-15]較多，測定決明子中橙黃決明素含量的文獻(xiàn)[16-18]也不少，但同時(shí)測定橙黃決明素、蘆丁和槲皮素的方法尚未見報(bào)道，本研究通過多次嘗試，根據(jù)3種物質(zhì)的最大吸收波長，最終確定了通過變換波長法同時(shí)測定以上3種物質(zhì)的高效液相色譜條件。關(guān)于流動(dòng)相的選擇問題，其他報(bào)道中測定以上3種成分的流動(dòng)相多為甲醇、磷酸水及乙腈，本研究嘗試采用甲醇和水作為流動(dòng)相，仍然可取得較好的分離效果，達(dá)到了更加安全環(huán)保的成效，并可減少化學(xué)溶劑的使用。

4? 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了高效液相色譜法同時(shí)測定藥食同源降脂片中橙黃決明素、蘆丁和槲皮素含量的方法。結(jié)果表明，流動(dòng)相為水（A）∶甲醇（B）=70∶30的條件下，橙黃決明素、蘆丁和槲皮素可以較好得分離。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性強(qiáng)，經(jīng)測定藥食同源降脂片中橙黃決明素平均含量0.053 2 mg/g，RSD為1.36%;蘆丁平均含量0.847 0 mg/g，RSD為0.65%;槲皮素平均含量0.040 9 mg/g，RSD為0.80%，為藥食同源降脂片的質(zhì)控提供了依據(jù)。

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