王迪 苗青 王萍

[摘要]目的：檢測白癜風(fēng)患者血清白介素-33（IL-33）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，探討IL-33和TNF-α水平與白癜風(fēng)發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。方法：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗分別對41例白癜風(fēng)患者及35例健康志愿者血清IL-33和TNF-α的水平進(jìn)行檢測，比較不同分期白癜風(fēng)患者與正常對照組血清中IL-33和TNF-α水平。結(jié)果：白癜風(fēng)組血清IL-33、TNF-α水平較健康對照組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;進(jìn)展期、穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者血清IL-33、TNF-α水平高于健康對照組，且進(jìn)展期高于穩(wěn)定期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;白癜風(fēng)患者血清IL-33和TNF-α水平之間存在正相關(guān)性（r=0.904，P<0.05）。結(jié)論：IL-33和TNF-α均作為促炎性因子參與了白癜風(fēng)的發(fā)生、發(fā)展，血清水平可反映疾病進(jìn)展情況。

[關(guān)鍵詞]白癜風(fēng);白細(xì)胞介素-33;腫瘤壞死因子-α;免疫;相關(guān)性

[中圖分類號]R758.4+1? ?[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2019）02-0091-03

Abstract： Objective? To evaluate the serum levels of IL-33 and TNF-α in patients with vitiligo，and to explore the relationship between IL-33 and TNF-α levels and the development of vitiligo. Methods? The concentrations of IL-33 and TNF-α in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） in 41 patients with vitiligo and 35 healthy volunteers. The concentrations of IL-33 and TNF-α in the serum of patients with different stages of vitiligo and normal control were compared. Results? The levels of IL-33 and TNF-α in the serum of patients with vitiligo were higher than those in the healthy control group. The difference was statistically significant （P<0.05）.The levels of serum IL-33 and TNF-α in the advanced and stable phases were higher than those in the healthy control group， and the progression was higher than the stable phase. The difference was statistically significant. （P<0.05）.There was a positive correlation between the expression level of IL-33 and TNF-α（r=0.904，P<0.05）. Conclusion? Vitiligo patients serum IL-33 and TNF-α are all proinflammatory factors involved in the pathogenesis of vitiligo， and serum levels can reflect disease progression.

Key words： vitiligo; interleukin-33; tumor necrosis factor-α; immunity; correlation

白癜風(fēng)是常見的皮膚科疾病之一，發(fā)病機(jī)制尚不明確，其中自身免疫學(xué)說備受學(xué)者們關(guān)注。近幾年研究發(fā)現(xiàn)IL-33、TNF-α可能參與了白癜風(fēng)的發(fā)病過程。IL-33參與多種自身免疫性疾病，銀屑病患者皮損中IL-33表達(dá)增高，能增強(qiáng)肽類物質(zhì)P對肥大細(xì)胞釋放血管內(nèi)皮生長因子的影響，從而增加血管通透性，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[1]。TNF-α水平增高可抑制黑素細(xì)胞的增殖進(jìn)而導(dǎo)致白癜風(fēng)的發(fā)生。目前關(guān)于IL-33在白癜風(fēng)患者血清中的研究較少，而較多研究提示TNF-α作為促炎因子可抑制黑素細(xì)胞的增殖，從而在白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。筆者對41例白癜風(fēng)患者及35例正常對照組血清中IL-33、TNF-α水平進(jìn)行檢測，研究IL-33和TNF-α水平相關(guān)性及不同時期表達(dá)情況，并觀察其在白癜風(fēng)發(fā)病過程中的作用，現(xiàn)報道如下。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：選取2017年1月-2017年11月于筆者科室就診的白癜風(fēng)患者41例，根據(jù)病史、體格檢查及Wood燈確診為白癜風(fēng)。其中男23例，女18例;年齡3～54歲，平均（23.7±12.9）歲;病程1月～20年，平均22.3個月。按《白癜風(fēng)診療共識（2014版）》進(jìn)行分期[2]，其中進(jìn)展期23例，穩(wěn)定期18例。入選標(biāo)準(zhǔn)：具備中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學(xué)組制定的“白癜風(fēng)的診療標(biāo)準(zhǔn)（2010年版）[3]”中描述的白癜風(fēng)典型臨床表現(xiàn)：①后天發(fā)生的形狀不規(guī)則的脫色性白斑、界限清、邊緣色素正?；蚣由?②可發(fā)生于任何皮膚、黏膜部位，可繼發(fā)于外傷后，皮損內(nèi)毛發(fā)也可變白;③排除白色糠疹、炎癥后色素減退斑、無色素痣、貧血痣、特發(fā)性色素減退斑、斑駁病等其他皮膚病;④所有入選患者的Woods燈檢查呈亮白色熒光。另選取健康志愿者35例為正常對照組，其中男21例，女14例;年齡13～48歲，平均（27.4±9.83）歲。兩組患者性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。兩組入選對象均未合并其他免疫性疾病，無外用或系統(tǒng)使用過影響色素生成的藥物，未服用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑等影響免疫功能的藥物。研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑及儀器設(shè)備：人IL-33/TNF-α定量酶聯(lián)免疫分析試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）。酶標(biāo)儀（美國Thermo scientific公司）。

1.3 檢測方法：兩組患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘部靜脈血3～5ml，室溫放置2h后，在2 500rpm/min的速度下離心20min，采用精密移液器分離出相應(yīng)上層血清，裝入EP管內(nèi)，編碼標(biāo)記后放置于-80℃的冰箱保存待測。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）測量兩組患者血清中IL-33及TNF-α水平。實驗步驟嚴(yán)格按照定量酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明操作，用酶標(biāo)儀在450nm波長處測量吸光度值，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中IL-33及TNF-α的濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（x?±s）表示，分類變量以百分比表示。計量資料兩組間比較采用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，χ2檢驗用于分類變量之間的比較，Pearson相關(guān)分析用于正態(tài)分布資料。檢驗水準(zhǔn)設(shè)為0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 兩組患者血清IL-33、TNF-α水平比較：白癜風(fēng)組患者血清IL-33及TNF-α水平較健康對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 不同分期白癜風(fēng)組與對照組患者血清IL-33、TNF-α水平比較：采用單因素方差分析后用LSD-t法比較進(jìn)展期、穩(wěn)定期及健康對照組兩兩之間血清IL-33、TNF-α水平，發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期組血清IL-33及TNF-α的水平高于穩(wěn)定期，且穩(wěn)定期高于健康對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2，3。

2.3 白癜風(fēng)患者血清中IL-33與TNF-α的相關(guān)性比較：通過Pearson相關(guān)分析對白癜風(fēng)患者血清中IL-33、TNF-α的水平進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)IL-33和TNF-α水平之間存在正相關(guān)性（r=0.904，P<0.05）。

3? 討論

白癜風(fēng)是臨床上常見的色素脫失性皮膚病，主要表現(xiàn)為境界清楚的色素脫失斑，其發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能與遺傳易感性、神經(jīng)因素、氧化應(yīng)激、黑素細(xì)胞的流失等有關(guān)[4]?，F(xiàn)在研究最受認(rèn)可的是自身免疫機(jī)制，自身免疫功能的紊亂可導(dǎo)致黑色素細(xì)胞的破壞或凋亡，進(jìn)而引起白癜風(fēng)。IL-33是近幾年發(fā)現(xiàn)的促炎因子，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞[5]，在細(xì)胞損傷后釋放。IL-33屬于IL-1細(xì)胞因子家族，是一種具有雙重功能的細(xì)胞因子，它可以作為細(xì)胞內(nèi)核因子抑制轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，也可作為傳統(tǒng)的細(xì)胞因子與受體轉(zhuǎn)硫酶同系物2（ST2）結(jié)合，參與促炎癥反應(yīng)[6]。最新研究還發(fā)現(xiàn)IL-33具有“警報”功能，可快速激活先天性免疫途徑，特別是Th2細(xì)胞的免疫反應(yīng)，說明IL-33在炎癥、感染和自身免疫性疾病中起到了重要作用[7]。近年來IL-33被發(fā)現(xiàn)參與了多種自身免疫性疾病，如銀屑病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥等[8]。Vaccaro[9]等研究表明IL-33是一種炎癥因子，可激活中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞，在白癜風(fēng)患者血清中IL-33水平較健康對照組增加。Zhou J[10]等人的研究也發(fā)現(xiàn)IL-33可直接調(diào)節(jié)表皮黑素細(xì)胞功能。本研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)組患者血清中IL-33水平高于健康對照組，并且在進(jìn)展期組、穩(wěn)定期組、健康對照組中依次降低，提示IL-33作為人體體內(nèi)的炎癥因子參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血清IL-33水平比穩(wěn)定期高，說明IL-33的水平可提示疾病的活動程度，穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者IL-33水平高于健康對照組，提示穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者血清中仍然存在免疫紊亂。

TNF-α也是一種促炎性的細(xì)胞因子，通過激活受體介導(dǎo)的凋亡途徑在細(xì)胞凋亡中起重要作用[11]。它由許多不同類型細(xì)胞產(chǎn)生，包括活化的T細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞。角質(zhì)形成細(xì)胞合成細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-1α、IL-6和轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β），它們是人類黑素細(xì)胞增殖和黑素生成的旁分泌抑制劑。TNF-α還影響黑素細(xì)胞的凋亡途徑，其水平在白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中可能起重要作用[12]。Moretti S及Sushama S等報道了白癜風(fēng)患者表皮中TNF-α的增加使角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致黑素細(xì)胞的消失[13-14]，而尚智偉等也發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者血清中TNF-α的增加抑制黑素細(xì)胞的增殖，降低了酪氨酸酶的活性[15]，Li P等[16]研究發(fā)現(xiàn)TNF-α是黑色素細(xì)胞旁分泌抑制因子，并且與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者組血清中TNF-α的濃度水平高于健康對照組，且進(jìn)展期高于穩(wěn)定期，提示TNF-α也參與了白癜風(fēng)發(fā)病的免疫調(diào)控。Li P等研究表明角質(zhì)形成細(xì)胞來源的IL-33可以結(jié)合角質(zhì)形成細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞上的ST2，并刺激TNF-α的產(chǎn)生，導(dǎo)致色素沉著的喪失或黑素細(xì)胞的喪失。猜測TNF-α同時也可刺激IL-33分泌，這種正反饋回路可能參與白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者血清中IL-33和TNF-α水平呈正相關(guān)，說明IL-33和TNF-α在白癜風(fēng)發(fā)病過程中有一定的聯(lián)系或存在相互調(diào)控的可能，共同參與白癜風(fēng)的發(fā)生、發(fā)展。

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