■楊在賓 袁 麗 喬 凱 沈自泉 曲浩杰 于彩云 李軍訓(xùn)

(1.山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，山東泰安 271018；2.山東華盛江泉農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司，山東臨沂 276000；3.山東泰山生力源集團股份有限公司，山東泰安 271018)

在仔豬飼養(yǎng)早期階段日糧中，使用動物源性蛋白質(zhì)原料是配合飼料生產(chǎn)中常用的配方組合。血漿蛋白粉、腸膜蛋白和魚粉是仔豬最常用的動物源性蛋白質(zhì)原料。但是，這些原料的高價格、資源限制、進口依賴等都使它們在配合飼料生產(chǎn)中使用受限。近些年來，動物源性飼料原料對動物潛在的安全隱患越來越受到政府和行業(yè)的重視。尋找能夠替代上述動物源性蛋白質(zhì)原料的植物源性蛋白質(zhì)飼料產(chǎn)品，一直是全球最熱點的問題[1]。有研究表明，對豆粕進行深度發(fā)酵可以大大提高豆粕的營養(yǎng)品質(zhì)和利用價值，改善動物腸道功能[2]，可以根據(jù)動物體的不同需求，使用不同的添加比例替代昂貴的動物源性蛋白原料，比如魚粉等[3]。本研究選用二次深度發(fā)酵豆粕作為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料，以不同比例分別替代仔豬日糧中的血漿蛋白粉、腸膜蛋白粉和魚粉，系統(tǒng)研究了大豆酶解蛋白日糧對斷奶仔豬生長性能、腸道微生物、免疫性能和血清生化指標的影響，證明了大豆酶解蛋白替代血漿蛋白粉、腸膜蛋白粉和魚粉的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

大豆酶解蛋白(ESM，enzymolytic soybean meal)：粗蛋白質(zhì)≥51%，豬消化能≥14.84 MJ/kg，由山東泰山生力源集團股份有限公司提供。

血漿蛋白粉：進口噴霧干燥血漿蛋白粉（BP-SD，Blood plasma，spray dried）。粗蛋白質(zhì)≥78%，山東華盛江泉農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

腸膜蛋白：進口腸膜蛋白（DPS，Dried porcine solubles）。粗蛋白質(zhì)≥50%，山東華盛江泉農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

魚粉：進口魚粉（FM，F(xiàn)ish meal）。粗蛋白質(zhì)≥63%，山東華盛江泉農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

1.2 試驗動物與設(shè)計

哺乳期仔豬：為了獲得條件一致的斷奶仔豬，本研究選用胎次、體重相近的32窩7日齡哺乳期仔豬，隨機分為4個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)2窩豬，進行預(yù)試期，哺乳仔豬采食商品日糧（不含大豆酶解蛋白）至斷奶。28 d斷奶后以窩為單位稱重，按照不同處理組轉(zhuǎn)群，進入斷奶保育期試驗。

保育期仔豬：從上述斷奶仔豬中，采用單因素完全隨機試驗設(shè)計，選擇28 d斷奶的三元雜交（杜×長×大）仔豬320頭，隨機分為4個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)20頭。分別飼喂：處理1組：3%血漿蛋白+3%腸膜蛋白+3%魚粉日糧；處理2組（無血漿蛋白質(zhì)）：9%大豆酶解蛋白+3%腸膜蛋白+3%魚粉日糧；處理3組（無腸膜蛋白）：4%大豆酶解蛋白+3%血漿蛋白+3%魚粉日糧；處理4組（無魚粉）：3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿蛋白+3%腸膜蛋白日糧。4個處理營養(yǎng)水平一致。詳細日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗期28 d。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標

在今年剛剛結(jié)束的中國(昌樂)國際寶石博覽會寶石文化高峰論壇上，中國著名珠寶設(shè)計師王旭曾表示：在雕刻工藝方面，四年前昌樂做的珠寶工藝簡單的居多，經(jīng)過這三四年的發(fā)展，昌樂出現(xiàn)了很多非常精致的雕刻，從細節(jié)到鑲嵌的寶石，再到造型以及文化注入，都有普遍提高，精品越來越多。而且昌樂藍寶石質(zhì)地均勻、潔凈、色帶漂亮，只要在雕刻中把這一獨特優(yōu)勢發(fā)揮出來，那么藍寶石就會散發(fā)獨到魅力，發(fā)展的空間也將更廣。

生長性能：以每個重復(fù)為單位，在試驗正式期的始末對仔豬進行稱重，計算仔豬日增重，統(tǒng)計仔豬每日采食量，計算斷奶仔豬日平均采食量，并計算料重比。

腹瀉率：試驗期間，每天觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉個體，并計算腹瀉率。

腹瀉率(%)=（腹瀉仔豬頭數(shù)×仔豬腹瀉天數(shù)）/（試驗仔豬頭數(shù)×正式試驗天數(shù)）×100

腸道菌群：在正式期的第14 d，取仔豬直腸新鮮糞樣，測定腸道微生物。

免疫球蛋白：試驗第28 d，每個重復(fù)選擇2只豬，采血，測定血清免疫球蛋白濃度（lgM、lgA、lgG）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計軟件進行方差分析，采用Duncan's法多重比較處理平均值，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長性能比較

表2 哺乳仔豬生長性能比較分析

不同比例大豆酶解蛋白替代斷奶仔豬日糧中血漿蛋白粉、腸膜蛋白粉和魚粉后，對生長性能的影響見表3。統(tǒng)計分析表明：與常規(guī)的血漿-腸膜-魚粉日糧相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉的無血漿蛋白粉日糧，可以獲得與其相同的增重和腹瀉率（P＞0.05），但是，采食量和料重比均顯著降低（P＜0.05）；4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉的無腸膜蛋白日糧處理顯著提高了日增重，降低了料重比和腹瀉率（P＜0.05）；3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜的無魚粉日糧處理生長性能表現(xiàn)最好，試驗期末體重、日增重和日采食量顯著增加，料重比和腹瀉率均顯著降低（P＜0.05），處理之間仔豬成活率沒有顯著差異（P＞0.05）。由此證明，使用9%的大豆酶解蛋白可替代日糧中3%的血漿蛋白粉、4%的大豆酶解蛋白可替代日糧3%的腸膜蛋白質(zhì)、3.5%大豆酶解蛋白可替代日糧中3%的魚粉。

表3 斷奶仔豬生長性能比較分析

與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬試驗期末體重分別增加了1.2%、3.3%和7.0%；日增重分別提高了1.7%、5.4%和13.3%；料重比降低了5.7%、4.4%和4.1%。9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉處理仔豬采食量降低了5.3%；3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬采食量增加了8.6%；4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬腹瀉率分別降低了27.4%和33.0%。

2.2 腸道微生物比較

仔豬轉(zhuǎn)群后，試驗至14 d，直腸取糞樣進行微生物測定的結(jié)果見表4。不同處理間需氧菌總數(shù)無差異（P＞0.05），大腸桿菌總數(shù)和乳酸菌總數(shù)有改變的趨勢。4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉的日糧組獲得了最低的大腸桿菌總數(shù)，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉組獲得了最高的乳酸菌總數(shù)。無大豆酶解蛋白日糧組的大腸桿菌總數(shù)最多，乳酸菌總數(shù)最少。由此說明，大豆酶解蛋白可能有改善仔豬腸道有益菌數(shù)量的趨勢。

表4 斷奶仔豬糞便細菌數(shù)統(tǒng)計分析(lgCFU/g)

與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬糞便大腸桿菌總數(shù)分別降低了0.7%、10.2%和5.4%；乳酸菌總數(shù)分別增加了2.5%、1.2%和0.4%。

2.3 免疫功能比較

仔豬轉(zhuǎn)群后，飼喂大豆酶解蛋白飼料至28 d，對血清免疫抗體測定的結(jié)果見表5。不同處理間IgG無顯著差異（P＞0.05），IgA和IgM水平第1、2組間差異顯著（P＜0.05）。9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉組獲得了最高的IgA和IgM抗體水平。由此說明，大豆酶解蛋白有改善仔豬免疫功能的功效。

表5 斷奶仔豬血清免疫抗體指標分析(mg/ml)

與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的IgA水平分別提高了16.1%、6.5%和4.8%；IgM水平分別增加了17.1%、1.9%和2.5%。

3 討論

大豆酶解蛋白是豆粕經(jīng)過滅菌、好氧發(fā)酵、厭氧發(fā)酵后，制備而成的一種特殊的小肽。其同時具備發(fā)酵飼料和小肽的優(yōu)點。前人研究報道，豆粕在發(fā)酵過程中可以消除抗營養(yǎng)因子，還能產(chǎn)生豐富的煙酸、葉酸等維生素，促進動物體內(nèi)益生菌的生長繁殖，有利于動物腸道發(fā)育，促進腸道健康[4-5]。陳勇等[6]和Boza等[7]指出，小肽能促進游離氨基酸的轉(zhuǎn)運，消除氨基酸之間的吸收競爭，可通過動物腸道黏膜直接吸收，耗能低、速度快、不易飽和；且蛋白質(zhì)以小肽的形式供給，可以使利用率顯著提高。

劉海燕等[8]研究表明，發(fā)酵豆粕對乳仔豬生長性能的改善具有積極作用。在飼糧中使用14.27%和28.54%的發(fā)酵豆粕可以使仔豬的日增重顯著提高(P＜0.05)，腹瀉率極顯著降低(P＜0.01)，且仔豬對飼糧中的粗蛋白、干物質(zhì)和有機物利用率得到顯著提高(P＜0.05)。用發(fā)酵豆粕飼喂斷奶仔豬的試驗結(jié)果表明，仔豬料重比和腹瀉指數(shù)可分別降低8.39%(P＜0.05)和39.96%(P＜0.01)[9]。以8%的發(fā)酵豆粕“肽多樂”替代普通日糧中的魚粉和膨化大豆，加工成等氮日糧，同時對40日齡的斷奶仔豬進行飼喂試驗，結(jié)果表明，發(fā)酵豆粕可以顯著降低仔豬的死淘率和腹瀉率(P＜0.05)，雖然生長性能沒有顯著差異，卻提高了整體經(jīng)濟效益[10]。本研究結(jié)果表明，不同比例大豆酶解蛋白替代血漿蛋白粉、腸膜蛋白和魚粉，均不同程度地降低了仔豬料重比和腹瀉率，這與前人研究結(jié)果類似，也證實了大豆酶解蛋白在斷奶仔豬上應(yīng)用的可行性和功能性。

腸道菌群平衡對動物的健康和生長性能具有重要的意義[11]。俞曉輝[12]和Amato等[13]研究報道，仔豬日糧中添加發(fā)酵豆粕，可以使腸道內(nèi)菌群多樣性和相似性顯著提高，外界因素變化時，腸道菌群不容易失調(diào)，也能反映仔豬的健康。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，大豆酶解蛋白有改善仔豬腸道有益菌數(shù)量的趨勢，分析其原因可能是微生物發(fā)酵可以減少豆粕中的蛋白酶抑制因子，大分子蛋白被降解成為更容易被吸收的小肽，發(fā)酵過程產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物能夠抑制大腸桿菌的繁殖，促進乳酸菌的生長，從而改善腸道內(nèi)菌群平衡[14-17]，同時也減少了氨氣、硫化氫和腐胺的產(chǎn)生[18]。

本研究結(jié)果還表明，大豆酶解蛋白能顯著提高斷奶仔豬的血清抗體水平，從而增強免疫力。究其原因可能是豆粕發(fā)酵過程中，有效降解了抗原蛋白，使仔豬的免疫刺激效應(yīng)減少；給仔豬飼喂發(fā)酵豆粕能使其腸系膜淋巴細胞指數(shù)顯著增加，對免疫器官的生長起到正向促進作用，從而增加機體免疫功能。

4 結(jié)論

4.1 與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬試驗期末體重分別為增加了1.2%、3.3%和7.0%；日增重分別提高了1.7%、5.4%和13.3%；料重比降低了5.7%、4.4%和4.1%。9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉處理仔豬采食量降低了5.3%；3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬采食量增加了8.6%；4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬腹瀉率分別降低了27.4%和33.0%。

4.2 使用9%的大豆酶解蛋白可以替代日糧中3%的血漿蛋白粉，4%的大豆酶解蛋白可以替代日糧3%的腸膜蛋白粉，3.5%大豆酶解蛋白可以替代日糧中3%的魚粉。大豆酶解蛋白可能有改善仔豬腸道有益菌數(shù)量的趨勢。

4.3 與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的仔豬糞便大腸桿菌總數(shù)分別降低了0.7%、10.2%和5.4%；乳酸菌總數(shù)分別增加了2.5%、1.2%和0.4%。

4.4 與3%血漿+3%腸膜+3%魚粉日糧組相比，9%大豆酶解蛋白+3%腸膜+3%魚粉、4%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%魚粉和3.5%大豆酶解蛋白+3%血漿+3%腸膜組的IgA分別提高了16.1%、6.5%和4.8%；IgM分別增加了17.1%、1.9%和2.5%。

4.5 仔豬飼喂添加3.5%、4%、9%大豆酶解蛋白日糧，可以不同程度地改善斷奶仔豬的生長性能、飼料效率；改善腸道健康；增加免疫力。