張鄖芳,郭 蕊,劉永麗,潘桂萍
作者單位:(442000)中國湖北省十堰市太和醫(yī)院眼科
青光眼的臨床病理特征主要包括視神經(jīng)凹陷性萎縮以及視野缺損,引發(fā)青光眼視神經(jīng)病變的危險(xiǎn)因素有病理性眼壓增高以及眼內(nèi)微循環(huán)失調(diào)引起的視乳頭血流灌注不足造成的局部缺血[1-3]。閉角型青光眼是青光眼中較為常見的類型之一,主要由于前房角關(guān)閉阻止了眼內(nèi)房水的排出導(dǎo)致[4-5]。早年間有學(xué)者提出,閉角型青光眼的急性發(fā)作能夠引發(fā)機(jī)體急性應(yīng)激反應(yīng),從而影響機(jī)體的免疫功能。隨著研究的不斷深入,眼科醫(yī)師發(fā)現(xiàn)青光眼的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞免疫密切相關(guān),且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)青光眼患者紅細(xì)胞免疫功能明顯低于眼部健康人群。對紅細(xì)胞功能的研究發(fā)現(xiàn),紅細(xì)胞除了可粘附并識別抗原,還能夠向淋巴細(xì)胞遞呈抗原,以促進(jìn)T細(xì)胞的依賴性反應(yīng)增強(qiáng)。故而對紅細(xì)胞免疫功能進(jìn)行研究可能有利于提高青光眼的治療效果并改善預(yù)后。促紅細(xì)胞生成素(EPO)是一種糖蛋白,主要分泌于腎臟,可通過對骨髓紅細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生作用進(jìn)而對紅細(xì)胞的產(chǎn)生與成熟起到促進(jìn)作用[6]。近年來,研究人員提出,內(nèi)皮素-1(ET-1)也與眼部生理調(diào)節(jié)密切相關(guān),其通過調(diào)節(jié)眼血管張力影響眼壓及眼血流量,還能夠調(diào)控視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞及其周邊細(xì)胞的增殖以及視覺傳遞等生理過程[7]。本研究以閉角型青光眼患者為研究對象,旨在探討紅細(xì)胞免疫功能與EPO、ET-1濃度之間的相關(guān)性。
表1 兩組受試者血流變指標(biāo)比較
表1 兩組受試者血流變指標(biāo)比較
注:對照組:眼部正常者;病例組:閉角型青光眼患者。
組別 例數(shù) 全血粘度(mPa·s)低切 高切 全血漿粘度(mPa·s) 纖維蛋白原(g/L) 紅細(xì)胞壓積(L/L)對照組 30 12.84±2.10 5.18±1.08 1.43±0.28 3.15±0.58 0.37±0.06病例組 30 14.49±2.23 6.04±1.15 1.74±0.31 4.05±0.64 0.44±0.08 t 2.950 2.986 4.065 5.707 3.834 P<0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
1.1 對象 選取2017-06/10期間我院收治的閉角型青光眼患者30例30眼為作為病例組,其中男17例,女13例,年齡42~68(平均53.5±4.7)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)具有青光眼視乳頭改變者;(2)房角狹窄至關(guān)閉,或者在高眼壓狀態(tài)下關(guān)閉者;(3)影響血流及血管的藥物停用超過2wk者;(4)具有典型的中、晚期青光眼性視野缺損者;(5)臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)患有其它眼部疾病者;(2)心血管、肝、腎功能嚴(yán)重受損者;(3)絕對期青光眼患者;(4)合并惡性腫瘤者;(5)哺乳期、妊娠期女性患者;(6)臨床資料不全者。選取同期入院進(jìn)行體檢的眼部正常者30例30眼作為對照組,其中男19例,女11例,年齡41~69(平均53.6±4.5)歲。兩組研究對象性別構(gòu)成比、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)同意,告知研究對象本研究的意義及主要方法,征得同意。
1.2 方法
1.2.1 紅細(xì)胞免疫功能測定 通過測定兩組受試者紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率、紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率評估其紅細(xì)胞免疫功能。采集受試者靜脈血2mL(病例組受試者于給藥前采集),經(jīng)肝素抗凝加入等體積的生理鹽水,以Ficocl為分離液進(jìn)行水平離心,使紅細(xì)胞沉淀稀釋成紅細(xì)胞密度為1.25×107/mL的紅細(xì)胞懸液,保存待測。采用郭氏法進(jìn)行紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)試驗(yàn)和紅細(xì)胞免復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn),操作步驟:將紅細(xì)胞懸液以生理鹽水洗滌3次,C3b受體花環(huán)試驗(yàn)和紅細(xì)胞免復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn)分別加入5滴致敏酵母液、5滴非致敏酵母液,在試管中混勻,37℃條件下水浴30min,采用0.25%戊二醛固定,涂片,行瑞氏染色;于高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)2個(gè)以上酵母菌的紅細(xì)胞花環(huán)數(shù),計(jì)算百分率。
1.2.2 血清EPO和血漿ET-1濃度測定 于清晨靜息狀態(tài)下,采集受試者靜脈血2mL,置入含抑肽酶的試管中,充分混合;4℃、3000r/min離心10min,取血漿保存于-70℃冰箱中待測。將血漿樣本置于常溫條件下復(fù)融,4℃、3000r/min離心5min,取上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)測定血清EPO濃度,采用GC-1200γ放射免疫計(jì)數(shù)儀測定血漿ET-1濃度。
1.2.3 眼動脈血流指標(biāo)測定 采用彩色多普勒超聲儀(GE-LOGIQ9,美國)測定受試者眼動脈血流指標(biāo),高頻探頭10MHz、取樣容積2mm。測定當(dāng)日確保受試者眼壓不超過3.25kPa(24mmHg),測定前休息15~30min,當(dāng)心臟功能處于較大限度穩(wěn)定條件下開始測量。受檢者取仰臥位,輕輕閉目,將少許藕合劑涂抹于眼瞼表面,眼瞼上紡織探頭,確保其不對眼球產(chǎn)生加壓,對聲束及眼動脈進(jìn)行調(diào)整,確保睫狀后短動脈與視網(wǎng)膜中央動脈血流方向保持一致。測定收縮期峰值流速(PSV)、舒張末期流速(EDV),并計(jì)算阻力指數(shù)(RI),RI=(PSV-EDV)/PSV。
1.2.4 血流變指標(biāo)測定 取晨間血2mL,放置試管中混勻離心,取血漿,采用全自動血液流變儀(ZL9000PLUS型)測定全血粘度、全血漿粘度、血漿纖維蛋白原、紅細(xì)胞壓積等指標(biāo)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用百分率(%)表示,組間比較采用卡方檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 兩組受試者紅細(xì)胞免疫功能比較 病例組受試者紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率明顯低于對照組(10.81%±2.01%vs 18.06%±3.44%),紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率明顯高于對照組(17.21±3.49%vs 11.74±2.14%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.967、7.318,均 P<0.05)。
2.2 兩組受試者血清EPO和血漿ET-1濃度比較 病例組受試者血清EPO濃度明顯高于對照組(26.10±5.22 mU/mL vs 22.68±4.06mU/mL),血漿 ET-1濃度明顯高于對照組(70.85±7.16ng/L vs 58.43±5.09ng/L),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.833、7.744,均 P<0.05)。
2.3 兩組受試者眼動脈血流指標(biāo)比較 病例組受試者EDV明顯低于對照組(8.66±1.59cm/s vs 10.68±2.12cm/s),RI明顯高于對照組(0.73±0.04 vs 0.64±0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.175、7.699,均 P<0.05);兩組受試者 PSV(31.65±1.38cm/s vs 31.02±1.20cm/s)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.887,P>0.05)。
2.4 兩組受試者血流變指標(biāo)比較 病例組受試者低切和高切全血粘度、全血漿粘度、纖維蛋白原、紅細(xì)胞壓積均明顯高于對照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。
2.5 紅細(xì)胞C3b受體表達(dá)與血清EPO和血漿ET-1濃度的相關(guān)性 閉角型青光眼患者紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率與血清EPO濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.271,P<0.05),而與血漿 ET-1濃度無相關(guān)性(r=0.508,P>0.05)。
青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而出現(xiàn)的不可逆性眼部疾病,眼壓升高后視神經(jīng)、視網(wǎng)膜無法承受高壓的壓迫從而導(dǎo)致視功能損害[7]。青光眼對于視神經(jīng)功能危害性極大,一般分為先天性、原發(fā)性和繼發(fā)性三種青光眼類型,其中原發(fā)性青光眼根據(jù)房角形態(tài)不同又分為閉角型和開角型。原發(fā)性閉角型青光眼是指由于前房角被周邊虹膜組織機(jī)械性阻塞導(dǎo)致房水流出受阻,造成眼壓升高、視神經(jīng)損害的一類青光眼。青光眼是我國主要的致盲原因之一,而且青光眼引起的視功能損傷是不可逆的,后果極為嚴(yán)重。理論上來講青光眼是不能預(yù)防的,但早期發(fā)現(xiàn)、合理治療,絕大多數(shù)患者可終生保持一定的視功能。因此,青光眼的防治必須強(qiáng)調(diào)早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療。
紅細(xì)胞能夠?qū)τ泻Φ拿庖邚?fù)合物起到轉(zhuǎn)運(yùn)功能,可通過紅細(xì)胞膜上的C3b受體對抗原-抗體-補(bǔ)體復(fù)合物進(jìn)行識別,從而發(fā)揮保護(hù)性的免疫緩沖功能,此功能在加快清除有害免疫復(fù)合物的同時(shí),還有效降低了免疫復(fù)合物在組織內(nèi)滯積所造成的免疫病理損傷。通過對慢性腎功能衰竭患者紅細(xì)胞免疫功能的研究發(fā)現(xiàn),慢性腎功能衰竭患者C3b受體花環(huán)試驗(yàn)陽性率明顯低于正常人,紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率明顯高于正常人。本研究中,閉角型青光眼患者眼動脈血流指標(biāo)(EDV、RI)及血流變指標(biāo)異常,紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率降低,紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率升高,且與眼部正常者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明閉角型青光眼患者紅細(xì)胞免疫功能顯著下降,分析原因可能是由于閉角型青光眼患者眼血管血流動力學(xué)指標(biāo)發(fā)生變化,導(dǎo)致視神經(jīng)發(fā)生了嚴(yán)重的缺血缺氧損傷,從而對紅細(xì)胞代謝產(chǎn)生影響,降低了紅細(xì)胞C3b受體的粘附功能,無法對有害免疫復(fù)合物進(jìn)行及時(shí)、有效地清除,使得有害免疫復(fù)合物沉積量增加,進(jìn)一步造成視神經(jīng)局部的病理性損傷。
EPO是一種十分重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺氧/缺血性腦損傷以及培養(yǎng)的神經(jīng)元中具有抗自由基、抗細(xì)胞凋亡及抗氧化等作用[8-10]。目前臨床中已采用EPO對慢性腎功能衰竭進(jìn)行治療,以提高患者血紅蛋白含量,改善其貧血狀況[11]。Aktas 等[12]學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),慢性腎功能衰竭患者EPO治療8wk后,其紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率明顯提升,且提升效果隨著治療時(shí)間的延長而增加,而紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率明顯降低,推測EPO可能通過降低氧自由基含量、對紅細(xì)胞膜起到穩(wěn)定作用以增加紅細(xì)胞壽命,避免其它因子損傷C3b受體,增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能[13-14]。目前關(guān)于EPO的研究主要針對慢性腎功能衰竭患者,在青光眼患者中較為少見。本研究中,病例組受試者血清中EPO濃度明顯高于對照組(P<0.05),且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),閉角型青光眼患者紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率與血清EPO濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.271,P<0.05)。
近年研究指出,內(nèi)皮素在眼部生理病理調(diào)節(jié)過程中扮演重要角色,與部分眼部疾病的發(fā)生發(fā)展具有一定的關(guān)聯(lián)性[15-17]。本研究中,閉角型青光眼患者的血漿 ET-1水平明顯高于眼部健康人群(P<0.05),與其它同類型研究結(jié)論相一致,提示血漿ET-1可能參與閉角型青光眼造成的視神經(jīng)損害,具體機(jī)制包括以下幾個(gè)方面[18-20]:(1)血漿ET-1可通過收縮微血管引發(fā)局部組織缺血、缺氧,上調(diào)天冬氨酸與谷氨酸等興奮性氨基酸含量,產(chǎn)生視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞毒性,最終對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡起到促進(jìn)作用;(2)血漿ET-1可通過對視神經(jīng)的逆向軸漿運(yùn)輸過程產(chǎn)生抑制,影響腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子從腦部向視網(wǎng)膜的運(yùn)輸,最終引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡;(3)血漿ET-1濃度過高可能通過活化星形膠質(zhì)細(xì)胞參與青光眼視神經(jīng)的病理損傷。
綜上所述,閉角型青光眼患者紅細(xì)胞免疫功能下降,血清EPO和血漿ET-1濃度升高,且閉角型青光眼患者紅細(xì)胞免疫功能與EPO濃度呈正相關(guān),與血漿ET-1濃度無相關(guān)性。