崔廣林，李隆云*，譚 均，張 應(yīng)

1重慶市中藥研究院；2 重慶市中藥良種選育與評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心；3中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心重慶分中心，重慶 400065

佛手是蕓香科柑橘屬植物佛手(CitrusmedicaL.var.sarcodactylisSwingler)的干燥果實(shí)，按其產(chǎn)地主要分為川佛手、廣佛手和浙佛手，具有舒肝理氣、和胃止痛、燥濕化痰的功效，用于治療肝胃氣滯，胸脅脹痛，胃脘痞滿，食少嘔吐，咳嗽痰多等病癥[1]。川佛手主要分布在四川盆地邊緣地區(qū)，主產(chǎn)于四川合江 、宜賓、沐川 、犍為、樂山及重慶等地[2]。佛手含香豆素、黃酮和酚酸等活性成分[3]，其中香豆素類化合物包括6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素等，具有抗菌、抗腫瘤、平滑肌松弛、抗凝血和光敏等作用[4]。黃酮類成分中，橙皮苷具有抗氧化、抗炎等藥理活性[5]，《中國(guó)藥典》(2015版)將其作為藥材質(zhì)量控制的主要指標(biāo)成分；槲皮素具有抗癌、抗氧化、抗纖維化和抗炎等作用[6]；木犀草素是一種天然黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗氧化、消和保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等作用[7]。酚酸類成分中，阿魏酸具有很強(qiáng)的抗氧化和抗炎活性[8]。目前，人們對(duì)佛手化學(xué)成分進(jìn)行了一些研究[9-18]，但多集中在廣佛手和金佛手，且涉及指標(biāo)較少。佛手藥材現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡(jiǎn)單，僅以單一成分橙皮苷為佛手藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)，難以全面反映藥材真實(shí)品質(zhì)。且川佛手的產(chǎn)地廣泛，在不同生長(zhǎng)環(huán)境和地理位置，可能導(dǎo)致其質(zhì)量良莠不齊，成分有差異。為了更好的綜合比較、評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地川佛手的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)首次以木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸8種成分為指標(biāo)，進(jìn)行主成分分析和聚類分析，探討不同產(chǎn)地川佛手藥材的質(zhì)量差異，旨在為制定川佛手藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20 AT 型HPLC(包括DGU-20 A5檢測(cè)器、LC-20 AT泵、SIL-20 A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20 A二極管氘燈、CTO-20 A柱溫箱)(日本島津公司)，BS223 S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，GZX-GF型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海龍躍儀器設(shè)備有限公司)；KQ(250DB型數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

對(duì)照品木犀草素(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST(14120224，純度≥99%)、6,7-二甲氧基香豆素(上海源葉生物有限公司，批號(hào)15011524，純度≥98%)、莨菪亭(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-14081804，純度≥98%)、5,7-二甲氧基香豆素(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-14070501，純度≥99%)、7-羥基香豆素(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-14120715，純度≥98%)、橙皮苷(上海源葉生物有限公司，批號(hào)14092432，純度≥97%)、槲皮素(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST(14082610，純度≥98%)、阿魏酸(成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-14012214，純度≥99%)冰醋酸和甲醇為色譜純(TEDIA公司)，其余試劑為分析純，水為純凈水。

1.3 樣品

試驗(yàn)所用藥材樣品2015年采自川佛手主產(chǎn)區(qū)重慶和四川，共48份，采集地信息見表1。每個(gè)采樣點(diǎn)隨機(jī)選擇 10 株無(wú)明顯病蟲害的佛手植株，采集成熟果實(shí)后混勻，洗凈表面的雜質(zhì)，晾干，再切成薄片，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，50 ℃烘干打粉，過 60 目篩備用。全部樣品均由重慶市中藥研究院李隆云研究員鑒定，為蕓香科柑橘屬植物佛手CitrusmedicaL.var.sarcodactylisSwingler 的果實(shí)。

表1 川佛手樣品來源

續(xù)表1(Continued Tab.1)

樣品號(hào)Sample No.產(chǎn)地Areas樣品號(hào)Sample No.產(chǎn)地Areas12重慶市江津區(qū)石塻鎮(zhèn)36四川省石棉縣天灣鄉(xiāng)幸福村13四川省合江縣白鹿鎮(zhèn)37四川省瀘定縣得妥鄉(xiāng)14四川省合江縣石龍鎮(zhèn)38四川省漢源縣洪福鄉(xiāng)15四川省安岳縣龍臺(tái)鎮(zhèn)龍西村39四川省滎經(jīng)縣新添鄉(xiāng)16四川省安岳縣天馬鄉(xiāng)40四川省德陽(yáng)市中江縣太平鄉(xiāng)17四川省合川縣草街鎮(zhèn)41四川省綿陽(yáng)安縣花該鎮(zhèn)18四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)42四川省南充南部縣永紅鄉(xiāng)19四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)大坪村43四川省南充市順慶區(qū)燈臺(tái)鄉(xiāng)20四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)正華村44重慶市云陽(yáng)縣養(yǎng)鹿新合村21四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)石坪村45重慶市云陽(yáng)縣龍角鎮(zhèn)22四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)后壩村46重慶市云陽(yáng)縣養(yǎng)鹿同發(fā)村23四川省宜賓市屏山縣屏山鎮(zhèn)金象村47重慶市云陽(yáng)縣養(yǎng)鹿桐林村24四川省宜賓市屏山縣富榮鎮(zhèn)撕栗村48重慶市云陽(yáng)縣養(yǎng)鹿中山村

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18(250 mm× 4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為0.2%冰醋酸水溶液(A)-甲醇(B)，梯度洗脫(0～5 min，90% A；5～10 min，90%～75% A；10～18 min，75% A；18～30 min，75%～70% A；30～40 min，70%～60% A；40～60 min，60%～30% A； 90% A，保持5 min)，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)322 nm。色譜圖見圖1。

圖1 混合對(duì)照品(A)與樣品(B)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixed standards ( A) and sample ( B)注：1.7-羥基香豆素 2.莨菪亭 3.阿魏酸 4.6,7-二甲氧基香豆素 5.橙皮苷 6.槲皮素 7.5,7-二甲氧基香豆素 8.木犀草素。Note:1.7-hydroxy coumarin 2.Scopoletin 3.Ferulic acid 4.6,7-dimethoxy coumarin 5.Hesperidin 6.Quercetin 7.5,7-dimethoxy coumarin 8.Luteolin.

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸對(duì)照品各3 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，靜置，得質(zhì)量濃度為0.3 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取佛手粉末(過100目篩)約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇，密塞，稱定質(zhì)量；靜置1 h，超聲提取40 min，冷卻，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取2.2項(xiàng)下木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸對(duì)照品溶液各1 mL，置于10加容量瓶中，定容至刻度，混勻，靜置，制樣。分別以4、8、12、16、20 μL按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為Y縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各被測(cè)成分回歸方程和線性范圍見表2。結(jié)果表明，8種成分在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸峰面積的RSD分別為4.526%、2.946%、1.971%、2.455%、0.805%、3.728%、1.10%、1.321%，表明精密度較好。

表2 川佛手中8種成分的線性關(guān)系考察

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于 2、4、6、8、12 h按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸的峰面積的RSD分別為4.514%、1.161%、2.148%、4.148%、0.941%、4.921%、1.303%、2.098%，說明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取佛手粉末約0.5 g，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸含量的RSD分別為4.088%、3.048%、1.915%、4.427%、1.525%、4.936%、3.074%、3.103%，說明方法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取35號(hào)佛手樣品6份，每份約0.5 g，精密稱取7-羥基香豆素、莨菪亭、阿魏酸、6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素、木犀草素分別為4、2、1.6、1.0、13.2、3.5、27.5、8.5 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算各成分的平均加樣回收率，結(jié)果見表3，表明本方法的回收率良好。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表3(Continued Tab.3)

成分Component樣品中含量Original amount ( mg)加入量Added amount (mg)測(cè)得量Detected amount回收率Recovery平均回收率Average recoveryRSD莨菪亭Scopoletin0.20.20 0.38 92.4791.222.120.210.20 0.39 90.870.20.20 0.38 87.850.190.20 0.37 90.560.20.20 0.38 92.410.20.20 0.39 93.15阿魏酸Ferulic acid0.160.16 0.30 90.2193.294.910.170.16 0.32 94.130.160.16 0.32 101.250.160.16 0.31 90.870.170.16 0.32 94.790.160.16 0.30 88.496,7-二甲氧基香豆素6,7-Dimethoxy coumarin0.10.10 0.20 96.5196.523.310.110.10 0.21 98.140.10.10 0.19 93.480.10.10 0.19 92.760.10.10 0.20 101.510.10.10 0.20 96.72橙皮苷Hesperidin1.321.32 2.59 96.5493.532.661.331.32 2.55 92.781.321.32 2.59 96.421.311.32 2.51 90.761.321.32 2.55 93.461.321.32 2.52 91.22槲皮素Quercetin0.350.35 0.69 96.6693.122.310.360.35 0.69 95.20.350.35 0.69 97.410.350.35 0.65 86.740.350.35 0.66 89.540.350.35 0.68 93.155,7-二甲氧基香豆素5,7- Dimethoxy coumarin2.752.75 5.40 96.5196.364.522.752.755.38 95.742.752.755.45 98.142.752.755.32 93.482.752.755.30 92.762.752.755.54 101.51木犀草素 Luteolin0.850.85 1.65 94.5293.082.280.860.85 1.65 93.130.850.85 1.62 90.750.850.85 1.67 96.420.850.85 1.63 91.210.850.851.64 92.45

2.9 樣品含量測(cè)定

按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定不同產(chǎn)地川佛手樣品中7-羥基香豆素、莨菪亭、阿魏酸、6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素、木犀草素的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，48批來自不同產(chǎn)地的川佛手藥材中8 種有效成分的含量存在差異，其中5,7-二甲氧基香豆素和橙皮苷在樣品中含量較高，6,7-二甲氧基香豆素在樣品中含量較低。具體如表4所示。

表4 48個(gè)產(chǎn)地川佛手中8種成分含量測(cè)定結(jié)果(mg/g, n=3)

續(xù)表4(Continued Tab.5)

樣品號(hào)Sample No.7-羥基香豆素7-hydroxy coumarin莨菪亭Scopoletin阿魏酸Ferulic acid6,7-二甲氧基香豆素6,7-Dimethoxy coumarin橙皮苷Hesperidin槲皮素Quercetin5,7-二甲氧基香豆素5,7-Dimethoxy coumarin木犀草素Luteolin350.680.350.560.399.250.705.790.36360.760.130.230.152.900.424.550.56370.400.110.100.141.530.172.040.86380.460.290.570.091.990.504.250.37390.680.060.330.193.140.6411.030.64400.270.080.420.091.640.170.610.49410.440.130.850.132.500.493.960.44421.350.180.240.407.570.5313.280.55430.450.150.270.264.280.367.580.47440.240.120.250.041.120.220.700.58450.870.230.200.256.070.276.000.51460.830.240.190.286.440.295.590.64470.440.140.110.112.020.185.910.98480.550.150.110.131.940.296.730.60

2.10 川佛手中8種化學(xué)成分之間相關(guān)性分析

以川佛手樣品中 8 化學(xué)成分的含量為數(shù)據(jù)，組建數(shù)據(jù)矩陣，采用 DPS v16.05數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見表5。結(jié)果表明：7-羥基香豆素與6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素；阿魏酸與6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素；6,7-二甲氧基香豆素與橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素；橙皮苷與槲皮素；槲皮素與5,7-二甲氧基香豆素呈極顯著正相關(guān)，橙皮苷與木犀草素呈極顯著負(fù)相關(guān)，7-羥基香豆素與阿魏酸呈顯著正相關(guān)，木犀草素與7-羥基香豆素、阿魏酸、6,7-二甲氧基香豆素、槲皮素呈顯著負(fù)相關(guān)，化學(xué)成分間相關(guān)性較強(qiáng)，表明此類化學(xué)成分可能在川佛手生長(zhǎng)過程中存在內(nèi)在的相關(guān)關(guān)系。

表5 相關(guān)性分析結(jié)果

注：*P<0.05，變量相關(guān)關(guān)系顯著；**P<0.01，變量相關(guān)關(guān)系極顯著(均為雙側(cè)檢驗(yàn))。

Note:*P<0.05,significant correlation;**P<0.01,extremely significant correlation．

2.11 同產(chǎn)地川佛手品質(zhì)的主成分分析

2.11.1 主成分分析

以48份川佛手藥材的8種化學(xué)成分檢測(cè)結(jié)果為基礎(chǔ)，通過DPS v16.05數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，采用主成分分析法得到各個(gè)主成分的特征值、方差貢獻(xiàn)率、 累計(jì)方差貢獻(xiàn)率及對(duì)應(yīng)的特征向量(表6)。其中特征值表示了對(duì)應(yīng)主成分能夠描述原有信息的多少，由表6可知主成1和主成分2特征值均大于1，其中第1主成分的方差貢獻(xiàn)率為49.53%，第2主成分的方差貢獻(xiàn)率為15.59%，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率達(dá)65.12 %，具有較強(qiáng)的信息代表性，因此，提取前2個(gè)主成分代替原8個(gè)成分指標(biāo)評(píng)價(jià)川佛手藥材的品質(zhì)，以達(dá)到降維的目的。決定第一主成分大小的主要是6,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、槲皮素和橙皮苷4個(gè)性狀分量，其中6,7-二甲氧基香豆素特征向量達(dá)0.447，是佛手藥材質(zhì)量分級(jí)的最主要指標(biāo)。決定第二主成分大小的主要是木犀草素和5,7-二甲氧基香豆素。由此可以看出，6,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、槲皮素、橙皮苷、木犀草素和5,7-二甲氧基香豆素6種成分是川佛手的特征成分。

表6 8個(gè)主成分的特征向量、特征值、貢獻(xiàn)率及累積貢獻(xiàn)率

2.11.2 不同產(chǎn)地川佛手品質(zhì)的綜合評(píng)價(jià)

以特征向量為權(quán)重構(gòu)建2個(gè)主成分的表達(dá)函數(shù)式：

F1=0.443X1+0.180X2+0.341X3+0.447X4+0.390X5+0.416X6+0.278X7-0.230X8

F2=0.053X1-0.082X2+0.059X3+0.001X4-0.232X5+0.089X6+0.663X7+0.697X8

2個(gè)表達(dá)式中，X1為7-羥基香豆素、X2為莨菪亭、X3為阿魏酸、X4為6,7-二甲氧基香豆素、X5為橙皮苷、X6為槲皮素、X7為5,7-二甲氧基香豆素、X8為木犀草素。

以各個(gè)主成分對(duì)應(yīng)的方差貢獻(xiàn)率作為權(quán)重，由主成分得分和對(duì)應(yīng)的權(quán)重線性加權(quán)求和得到綜合評(píng)價(jià)函數(shù)。

F= 0.495Z1+0.156Z2

根據(jù)主成分綜合得分模型，可計(jì)算出48個(gè)產(chǎn)地川佛手的綜合得分值和排序結(jié)果(表7)。綜合排序的名次越前，表明就該 8 項(xiàng)指標(biāo)而言，該樣品的質(zhì)量較好，反之，質(zhì)量就較差。四川省宜賓市長(zhǎng)寧縣老翁鎮(zhèn)(26號(hào))佛手樣品綜合得分最高，藥材質(zhì)量最優(yōu)，其次為四川省樂山市犍為縣新民鎮(zhèn)(32號(hào))佛手樣品，重慶市云陽(yáng)縣養(yǎng)鹿新合村(44號(hào))佛手樣品綜合得分最低，藥材質(zhì)量最差。

表7 主成分得分、綜合得分及排序

續(xù)表7(Continued Tab.7)

樣品號(hào)Sample No.F1F2綜合得分FComprehensive F排序Sorting390.03640.42680.0851640-2.0861-1.3845-1.2494641-0.2245-1.0456-0.27426422.5872-0.09621.266743-0.1942-0.8756-0.2332444-2.4986-1.1005-1.40848450.5011-1.17860.06418460.4887-0.87080.1061547-2.17750.6647-0.9744448-1.3431-0.3714-0.72336

2.12 不同產(chǎn)地佛手化學(xué)成分的聚類分析

聚類分析是將樣品按照品質(zhì)特性相似程度逐漸聚合在一起， 相似度最大的優(yōu)先聚合在一起，最終按照類別的綜合性質(zhì)多個(gè)品種聚合，從而完成聚類分析的過程[19]。而系統(tǒng)聚類則是把相似的樣品或變量歸類的有效方法。因此，本實(shí)驗(yàn)使用 SPSS Statistics 20對(duì)不同產(chǎn)地川佛手中7-羥基香豆素、莨菪亭、阿魏酸、6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素、木犀草素的含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)聚類，以8種有效成分含量為聚類的變量，采用平方歐氏距離(squared Euclidean distance)獲得聚類分析樹狀圖，結(jié)果見圖2。由圖2可知，當(dāng)閾值為10時(shí)，48個(gè)不同產(chǎn)地川佛手樣品被聚為3類，其中1、47、3、48、6、33、34、38、41、36、17、40、44、13、37、16、43、27、20、30、45、46、5、19、8、15、9、11、14、18、23、31、39、28聚為一類，該類樣品主要產(chǎn)自四川大部分地區(qū)及重慶市云陽(yáng)縣，樣品特征為各化學(xué)成分含量較平均；29(四川省樂山市沐川縣新凡鄉(xiāng))、35(四川省石棉縣田灣鄉(xiāng))聚為一類，該類特征為橙皮苷含量較高；25、26、7、24、32、22、42、21、4、10、2、12聚為一類，該類樣品主要產(chǎn)自四川省宜賓市及重慶少部分地區(qū)，樣品特征為5,7-二甲氧基香豆素和木犀草素含量較高。

3 討論

佛手為2015年版中國(guó)藥典收載品種，其含量測(cè)定項(xiàng)下以橙皮苷含量為考察指標(biāo)。本研究采集了48個(gè)川佛手產(chǎn)區(qū)的藥材樣品，采用HPLC技術(shù)同時(shí)測(cè)定了7-羥基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、6,7-二甲氧基香豆素、槲皮素、橙皮苷、阿魏酸和木犀草素共8個(gè)化學(xué)成分指標(biāo)，該方法操作簡(jiǎn)便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于川佛手藥材中8種成分含量的同時(shí)測(cè)定，可以為全面評(píng)價(jià)川佛手藥材的質(zhì)量提供一種切實(shí)可行的參考根據(jù)。在實(shí)驗(yàn)中，通過全波長(zhǎng)掃描(190～400 nm)確定了8種待測(cè)成分在322 nm處均有最大吸收。在最大波長(zhǎng)下測(cè)定，提高了檢測(cè)的靈敏度，另外，在同一波長(zhǎng)條件下完成川佛手中8種成分的含量測(cè)定，方法快捷。

圖2 48批川佛手樣品的聚類樹狀圖Fig.2 Results of dendrogram from 48 batches Fructus Citris Sarcodactylis

相關(guān)性分析旨在研究2個(gè)變量之間的變化趨勢(shì)，本研究對(duì)川佛手藥材中的 8 個(gè)成分進(jìn)行了相關(guān)性分析，由相關(guān)性分析結(jié)果可知，7-羥基香豆素、6,7-二甲氧基香豆素、橙皮苷、槲皮素、5,7-二甲氧基香豆素和阿魏酸之間顯著正相關(guān)，表明此類化學(xué)成分可能在川佛手生長(zhǎng)過程中存在內(nèi)在的相關(guān)關(guān)系。

主成分分析是一種多指標(biāo)的綜合評(píng)價(jià)方法， 旨在利用降維的思想把多指標(biāo)轉(zhuǎn)化為少數(shù)幾個(gè)綜合指標(biāo)，現(xiàn)已廣泛用于中藥研究領(lǐng)域[20]。本研究以48份川佛手藥材的8種化學(xué)成分檢測(cè)結(jié)果為基礎(chǔ)，采用主成分分析法得到2個(gè)主成分因子。決定第一主成分大小的主要是6,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、槲皮素和橙皮苷4個(gè)性狀分量，其中6,7-二甲氧基香豆素是佛手藥材質(zhì)量分級(jí)的最主要指標(biāo)。決定第二主成分大小的主要是木犀草素和5,7-二甲氧基香豆素。因此，建議使用6,7-二甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、槲皮素、橙皮苷、木犀草素和5,7-二甲氧基香豆素6個(gè)指標(biāo)作為川佛手質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，從而進(jìn)一步彌補(bǔ)其藥典中單一橙皮苷成分進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)的不足。

本研究結(jié)果顯示，48份藥材樣品的橙皮苷含量都達(dá)到0.003%的《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。不同產(chǎn)地川佛手藥材具有一定的差異性，其中5,7-二甲氧基香豆素和橙皮苷在樣品中含量較高，6,7-二甲氧基香豆素在樣品中含量較低。7-羥基香豆素含量最高的為四川省宜賓市長(zhǎng)寧縣老翁鎮(zhèn)(26號(hào)樣品)；莨菪亭含量最高為四川省樂山市沐川縣高筍鄉(xiāng)(27號(hào)樣品)；阿魏酸含量最高為四川省樂山市犍為縣新民鎮(zhèn)(32號(hào)樣品)；6,7-二甲氧基香豆素含量最高為四川省宜賓市長(zhǎng)寧縣老翁鎮(zhèn)(26號(hào)樣品)；橙皮苷含量最高為四川省石棉縣田灣鄉(xiāng)(35號(hào)樣品)；槲皮素含量最高為四川省宜賓市宜賓縣蕨溪鎮(zhèn)石坪村(21號(hào)樣品)；5,7-二甲氧基香豆素含量最高為四川省樂山市犍為縣新民鎮(zhèn)(32號(hào)樣品)；木犀草素含量最高為重慶市萬(wàn)州區(qū)甘寧鎮(zhèn)(2號(hào)樣品)。

聚類分析是一種可將一組數(shù)據(jù)按照本身內(nèi)在的規(guī)律較合理地分為幾類的探索性的分類方法，此方法可以大大縮小了以往全憑主觀判斷所造成的誤差，使數(shù)據(jù)分析結(jié)果客觀性更強(qiáng)[21]。本文以 8種化學(xué)成分的含量為指標(biāo)對(duì)48個(gè)不同產(chǎn)地的川佛手樣品進(jìn)行聚類分析，聚類分析結(jié)果將不同產(chǎn)地分為3類：29(四川省樂山市沐川縣新凡鄉(xiāng))、35(四川省石棉縣田灣鄉(xiāng))歸為一類，該類特征為橙皮苷含量較高；25、26、7、24、32、22、42、21、4、10、2、12歸為一類，該類樣品主要產(chǎn)自四川省宜賓市及重慶少部分地區(qū)，樣品特征為5,7-二甲氧基香豆素和木犀草素含量較高；其余產(chǎn)地歸為第三類，該類樣品主要產(chǎn)自四川大部分地區(qū)及重慶市云陽(yáng)縣，樣品特征為各化學(xué)成分含量較平均。