劉瑞華，陳靜怡，王麗麗，李 靜，劉惠芬，楊殿林，趙建寧*

（1.天津農(nóng)學院農(nóng)學與資源環(huán)境學院，天津300384；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，天津300191；3.東北農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院，哈爾濱150030；4.農(nóng)業(yè)部產(chǎn)地環(huán)境污染防控重點實驗室/天津市農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全重點實驗室，天津300191）

轉(zhuǎn)基因作物在21 年的全球商業(yè)化進程中，種植面積從1996 年的170 萬hm2上升至2016 年的1.85 億hm2。棉花作為我國種植面積最大的轉(zhuǎn)基因作物，2016 年種植面積約為280 萬hm2，占棉花總播種面積的96%以上[1]。轉(zhuǎn)基因作物的大規(guī)模商業(yè)化種植在給人們帶來收益的同時，其對土壤微生物的影響及對土壤生態(tài)系統(tǒng)帶來的風險越來越引發(fā)人們的關(guān)注[2]。

土壤是植物與其生長環(huán)境之間物質(zhì)循環(huán)和能量轉(zhuǎn)化的重要場所。叢枝菌根真菌是其菌絲與植物根系形成的共生體[3]，也是土壤生態(tài)系統(tǒng)中一種同時具有植物根系和微生物特性的互惠共生體[4]。其容易受到土壤環(huán)境變化的影響，是一種較好的指示微生物，因此近年來吸引了越來越多的研究者對其進行研究和探討。盧鑫萍等[5]研究發(fā)現(xiàn)，土壤鹽分組成類型的不同會對AM 真菌孢子的密度和侵染率有影響；Ndoye 等[6]研究發(fā)現(xiàn)，土壤pH 值及各種無機速效養(yǎng)分含量均對AM 真菌的種屬分布有顯著影響；張海波等[7]研究發(fā)現(xiàn)，AM 真菌物種豐富度、Shannon 多樣性指數(shù)和侵染率受土壤類型與植物種類交互作用的顯著影響。

轉(zhuǎn)基因作物的殘體及根系分泌物皆有可能對土壤中的AM 真菌群落產(chǎn)生影響。王鳳玲等[8]研究表明轉(zhuǎn)Bt 棉葉片腐熟物抑制了AM 真菌在植物根部的定植，降低了AM 真菌的共生效應(yīng)；Turrini 等[9-10]發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)Bt 基因的玉米會影響共生體菌絲生長和侵染，并危害到其附著胞的發(fā)育，最終導致轉(zhuǎn)Bt 基因品種的侵染率遠低于其非轉(zhuǎn)基因親本；但是梁晉剛等[11]對轉(zhuǎn)基因高蛋氨酸大豆的研究并未發(fā)現(xiàn)AM 真菌群落結(jié)構(gòu)與非轉(zhuǎn)基因大豆間存在顯著性差異；Pasonen 等[12]研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物對AM 真菌的定植可能會有一定的影響。目前關(guān)于轉(zhuǎn)基因作物種植對AM 真菌的影響還沒有定論[13]，關(guān)于長期種植轉(zhuǎn)基因作物是否會對AM 真菌產(chǎn)生影響的研究還鮮見報道。因此，本研究利用PCR-DGGE 技術(shù)，以轉(zhuǎn)基因棉花013011（抗旱）、SGK321（抗蟲）和非轉(zhuǎn)基因棉花TH2（抗旱受體）、石遠321（抗蟲受體）為研究材料，探究它們長期種植后對土壤AM 真菌群落多樣性的影響，旨在為轉(zhuǎn)基因棉花種植的土壤環(huán)境安全評價提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

試驗地位于天津市武清區(qū)梅廠鎮(zhèn)周莊村（39°36′71.21″N，117°22′69.65″E），海拔6.3 m。地處華北平原東北部，地勢平緩。年平均氣溫為11.6 ℃，年平均降水量為606 mm，無霜期212 d。供試土壤為潮土，2016 年棉花播種前試驗地基本理化性質(zhì)：全磷含量0.77±0.05 g·kg-1，全氮含量0.65±0.04 g·kg-1，有機質(zhì)含量18±1.02 g·kg-1，pH值8.26±0.06。

1.2 供試材料

供試棉花品種為4 個品種，分為2 組對照試驗。第1 組：TH2（抗旱受體）和013011（抗旱）；第2 組：石遠321（抗蟲受體）和SGK321（抗蟲）。供試的轉(zhuǎn)基因材料013011 抗旱棉尚屬于研究階段，因此其所轉(zhuǎn)基因不便公布；SGK321為我國自主研發(fā)的雙價抗蟲棉，是將雙價抗蟲基因（Bt+CpTI）導入石遠321 后育成的新品種。供試品種均由中國農(nóng)業(yè)科學研究院棉花研究所提供。

1.3 實驗設(shè)計

本試驗為大田試驗，每個小區(qū)100 m2（20 m×5 m），每種棉花種植3 個小區(qū)即3 次重復(fù)，寬窄行種植，行距分別為90 cm和40 cm。試驗地自2011年開始種植供試品種至今，每個小區(qū)固定種植同一棉花品種，一直采用覆膜種植的方式，每個小區(qū)間種植寬度為5 m 的玉米保護行。施肥量為：氮肥200 kg·hm-2，鉀肥100 kg·hm-2，磷肥60 kg·hm-2。其中氮肥基施60%，追肥40%。磷鉀肥全部作基肥施用，棉花其他田間管理按照常規(guī)管理，不施農(nóng)藥。

1.4 土壤樣品采集

本試驗分別在棉花的花鈴期（2016 年8 月16 日）和吐絮期（2016 年9 月27 日）采集土樣。采用隨機取樣法每個小區(qū)選取3 個點，每個點選5 株相距最近的棉花，去除表面雜草和枯枝落葉，每株距離主根2 cm位置處用直徑3.5 cm 土鉆取20 cm 深土樣，并將3 個采樣點的樣品等比例混合，作為一個重復(fù)放入滅菌塑封袋帶回實驗室放入低溫冰箱（-20 ℃）保存。

1.5 土壤總DNA提出

稱取0.35 g土壤樣品后采用BBI公司（Canada）的EZ-10 Spin Soil DNA Extraction kit 按操作說明提取總DNA，獲得的總DNA 使用Biophotometer（Eppendorf，Germany）進行定量分析，并在1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳，檢測總DNA質(zhì)量。

1.6 PCR擴增

采用巢式PCR（Nested PCR）方法針對AM 真菌的ITS片段進行擴增，引物序列及反應(yīng)程序見表1。

第一輪PCR 反應(yīng)體系：1 μL 每種引物，25 μL Premix Ex Taq（Loading dye mix），2 μL 的模板DNA，終體積為50 μL；第二輪PCR 反應(yīng)體系：1 μL 每種引物，25 μL Premix Ex Taq（Loading dye mix），以2 μL 第一輪PCR 產(chǎn)物為模板，補充無核酸酶水（Nuclease-Free water，Promega）至50 μL。

1.7 變性梯度凝膠電泳（DGGE）檢測

采用DcodeTM通用突變檢測系統(tǒng)（Bio-Rad，USA）按照操作說明進行DGGE分析。丙烯酰胺凝膠（37.5∶1）濃度為8%，變性劑梯度為25%～50%[100%變性劑含有7 mol·L-1尿素和40%（V/V）去離子甲酰胺]，電泳緩沖液為1×TAE。將25 μL PCR 產(chǎn)物和5 μL 6×loading buffer 混合后用微量進樣器加入膠孔中，100 V、60 ℃條件下電泳16 h。電泳結(jié)束后，小心取出凝膠，放在SYBRTMGreen I（1∶10 000）（Invitrogen，USA）染液中染色30 min，然后用Gel Dox XR 凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad，USA）觀察與拍照。

1.8 條帶回收及測序?qū)Ρ?/h3>

選取主要條帶割膠回收，用不帶GC 夾子的引物進行擴增，PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳分析確定為單一條帶后送出進行克隆測序。測序結(jié)果在NCBI 上經(jīng)過Blast對比分析。將其中同源性最高的序列確定為參照菌株。相似性≥97%的序列則視為同一序列型。

1.9 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2007 和SPSS 17.0（Duncan′s test）對試驗數(shù)據(jù)進行分析，采用Quantity One 4.6.2 軟件進行數(shù)字化處理并進行聚類分析。各樣品用香農(nóng)-維納指數(shù)（Shannon-Wiener index，H）、均勻度（Evenness index，EH）和豐富度（Richness，S）評價AM 真菌多樣性的變化，其計算公式如下：

H=-ΣPilnPi

EH=H/lnS

式中：H 代表香農(nóng)-威納指數(shù)；Pi代表第i 條帶占總強度的比值；EH代表均勻度；S代表條帶數(shù)量或豐富度。

測序結(jié)果采用Chromas 2.0 軟件進行序列分析，登陸NCBI（National Center for Biotechnology Information）網(wǎng)站下載最相似的菌株序列作為系統(tǒng)發(fā)育樹的參考序列。然后采用MEGA 6.0 軟件，Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，自展數(shù)（Bootstrap）為1000。

2 結(jié)果與分析

2.1 土壤總DNA的提取及PCR擴增

各土壤樣品的總DNA 經(jīng)過1.0%的瓊脂糖凝膠電泳（圖1），所有土壤樣品總DNA 均在9416～23 130 bp，表示所獲得的土壤DNA 質(zhì)量很好。將獲得的土壤DNA 直接用于PCR 擴增（圖2）。擴增后所獲得的片段集中在230 bp左右且條帶清晰片段大小均一，可用于后續(xù)DGGE分析。

表1 PCR反應(yīng)的引物及反應(yīng)條件Table 1 Primers and conditions used for PCR

圖1 棉花土壤樣品花鈴期（a）和吐絮期（b）DNA提取Figure 1 DNA samples extracted from the cotton soil at flowering and boll-setting stage（a）and boll opening stage（b）

圖2 棉花土壤樣品花鈴期（a）和吐絮期（b）AM真菌的ITS片段PCR結(jié)果Figure 2 AM fungi ITS fragment PCR results of the cotton samples at flowering and boll-setting stage（a）and boll opening stage（b）

2.2 DGGE指紋圖譜和AM真菌基因測序結(jié)果分析

DGGE 圖譜能夠直觀地反映出不同棉花品種土壤中AM 真菌群落結(jié)構(gòu)的多樣性。在DGGE 圖譜中，不同位置的條帶代表不同的AM 真菌類群，不同泳道同一橫向位置的不同條帶一般被認為是同一AM 真菌類群?；ㄢ徠诠灿?4條不同條帶，顯示出AM真菌的種類，其中非轉(zhuǎn)基因棉TH2 有18 個條帶，轉(zhuǎn)基因棉013011有20個；非轉(zhuǎn)基因棉石遠321有21個，轉(zhuǎn)基因棉SGK321 有21 個。吐絮期共有27 條不同條帶，顯示出AM真菌的種類，其中非轉(zhuǎn)基因棉TH2有26個條帶，轉(zhuǎn)基因棉013011 有25 個；非轉(zhuǎn)基因棉石遠321 有27個，轉(zhuǎn)基因棉SGK321有26個。

圖3 轉(zhuǎn)基因棉和非轉(zhuǎn)基因棉在花鈴期（a）和吐絮期（b）土壤中AM真菌群落結(jié)構(gòu)DGGE圖譜分析Figure 3 DGGE fingerprint analyses of AM fungi communities planted with GM verus Non-Gm cotton at flowering and boll-setting stage（a）and boll opening stage（b）

根據(jù)AM 真菌DGGE 指紋圖譜（圖3）選擇DGGE膠上易于區(qū)分的條帶進行克隆測序。在花鈴期樣品中選取24 條條帶，在吐絮期樣品中選取27 條條帶，分別進行測序。測序結(jié)果登陸美國國家生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI），得到條帶所代表的AM 真菌類型。分析所得序列的歸屬（表2、表3）以及樣品的指紋圖譜（圖3）發(fā)現(xiàn)，花鈴期測序的樣品條帶中兩組對照TH2 和013011（抗旱）、石遠321 和SGK321（抗蟲）多為共有條帶，均包含有Uncultured Glomus（球囊霉屬）、Uncultured Glomeraceae（球囊霉科）、Uncultured Glomeromycota（球囊菌門）、Uncultured Rhizophagus（根孢囊霉屬）和Glomus sp.，且亮度較高的條帶大多為Uncultured Glomus（球囊霉屬），因此Uncultured Glomus（球囊霉屬）為共同優(yōu)勢屬。對比TH2 和013011（抗旱）樣品指紋圖譜（圖3）發(fā)現(xiàn)條帶18 和條帶24 為轉(zhuǎn)基因棉013011（抗旱）特有條帶，分別屬于Uncultured Glo?mus（球囊霉屬）和Uncultured Glomeromycota clone（球囊霉科）；條帶13 為非轉(zhuǎn)基因棉TH2 特有條帶，屬于Uncultured Rhizophagus（根孢囊霉屬）。對比石遠321和SGK321（抗蟲）樣品指紋圖譜（圖3）發(fā)現(xiàn)條帶13為轉(zhuǎn)基因棉SGK321 特有條帶，屬于Uncultured Rhizoph?agus（根孢囊霉屬）；條帶24為非轉(zhuǎn)基因棉石遠321特有條帶，屬于Uncultured Glomeromycota（球囊菌門）。未能在GenBank 收錄相似的AM 真菌分類中找到與條帶17 相似的分類。吐絮期測序的樣品條帶中兩組對照TH2 和013011（抗旱）、石遠321 和SGK321（抗蟲）多為共有條帶，均包含有Uncultured Rhizophagus（根孢囊霉屬）、Uncultured Glomeraceae（球囊霉科）、Uncultured Glomus（球囊霉屬）、Rhizophagus sp.、Uncultured Diversispora（多孢囊霉屬）、Uncultured Glomeromycotina 和Uncultured Claroideoglomus（幼 套近明囊屬），且亮度較高的條帶大多為Uncultured Clo?mus（球囊霉屬），因此Uncultured Clomus（球囊霉屬）為共同優(yōu)勢屬。對比TH2 和013011（抗旱）樣品指紋圖譜（圖3）發(fā)現(xiàn)條帶18為非轉(zhuǎn)基因棉TH2特有條帶，屬于Uncultured Glomus（球囊霉屬），條帶15為轉(zhuǎn)基因棉013011 特有條帶，屬于Rhizophagus sp.（根孢囊霉屬）。對比石遠321 和SGK321（抗蟲）樣品指紋圖譜（圖3）發(fā)現(xiàn)全為共有條帶。未能在GenBank收錄相似的AM 真菌分類中找到與條帶16、20、21、23、24 相似的分類。

表2 花鈴期序列鑒定和同源性分析結(jié)果Table 2 Sequence identification and homology analysis of flowering and boll-setting period

表3 吐絮期序列鑒定和同源性分析結(jié)果Table 3 Sequence identification and homology analysis of boll opening stage

2.3 土壤AM真菌多樣性分析

AM 真菌的多樣性指數(shù)是研究其群落物種數(shù)、個體數(shù)以及均勻度的綜合指標。一般可用香農(nóng)-威納指數(shù)（H），均勻度（EH）和豐富度（S）表現(xiàn)。根據(jù)DGGE指紋圖譜中每條條帶的灰度比率對香農(nóng)-威納指數(shù)（H）、均勻度（EH）和豐富度（S）進行分析。

結(jié)果表明土壤中AM 真菌的香農(nóng)-威納指數(shù)僅在吐絮期石遠321 顯著低于SGK321，其余均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異；TH2、013011 和石遠321、SGK321 的土壤AM 真菌豐富度在各生長期內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異；土壤中AM 真菌的均勻度僅在吐絮期TH2 顯著高于013011，其余均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（表4）。

2.4 條帶相似性分析及系統(tǒng)發(fā)育樹分析

利用相似性矩陣數(shù)據(jù)，通過未加權(quán)算術(shù)平均對群法（The unweighted pair-group method with arithmetic averages，UPGMA）進行聚類分析。一般認為相似度大于0.60 就說明兩個群體具有較好的相似性。本研究中花鈴期4 種不同土壤樣品的最小相似度為0.65（圖4），在吐絮期4 種不同土壤樣品的最小相似度為0.61（圖4）。說明轉(zhuǎn)基因棉與常規(guī)棉土壤中AM 真菌群落結(jié)構(gòu)在花鈴期和吐絮期差異不顯著。

結(jié)果表明，花鈴期測序序列與數(shù)據(jù)庫中的已知序列相似度在99%～100%；吐絮期測序序列與數(shù)據(jù)庫中的已知序列相似度在98%～100%。將測序獲得的基因序列與相似序列對比，采用MEGA6 軟件Neighbor-Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并進行系統(tǒng)發(fā)育分析（圖5和圖6）。花鈴期樣品根據(jù)進化上親緣關(guān)系的相似度，條帶1、3、4、6、7、9、10、11、12、14、21、22 形成了第1 類群；條帶2、5、15 形成了第2 類群；條帶8、16、18、19、20、23、24 形成了第3 類群；條帶13 為第4 類群。由圖6 可知，吐絮期樣品根據(jù)進化上親緣關(guān)系的相似度，條帶4、5、6、7、9、10、18、19 形成第1 類群；條帶1、2、3、12、15、17 形成第2 類群；條帶8、11、13、14、22、25、26、27形成了第3類群。

表4 DGGE圖譜多樣性指數(shù)分析Table 4 DGGE profiles diversity index analysis

圖4 轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉在花鈴期（a）和吐絮期（b）土壤樣品AM真菌群落結(jié)構(gòu)聚類分析Figure 4 Dendrogram of AM fungi communities at flowering and boll-setting（a）and boll opening stage（b）based on DGGE fingerprint

3 討論

本研究采用了PCR-DGGE 技術(shù)分析轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉土壤中AM 真菌群落結(jié)構(gòu)，直觀地反映出花鈴期和吐絮期兩組對照樣品中AM 真菌群落結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)同一時期轉(zhuǎn)基因樣品與非轉(zhuǎn)基因樣品之間DGGE 指紋圖譜有很強的相似性，且各條帶的亮度差異較小。一般認為條帶的多少代表群落的多樣性，條帶的亮度代表微生物的量[14]。這說明同一生育時期AM 真菌的群落多樣性和群落構(gòu)成比較穩(wěn)定，沒有因為轉(zhuǎn)基因棉花的種植而發(fā)生變化。而Castaldini 等[15]和Turrini 等[10]的研究表明轉(zhuǎn)基因作物的種植會對AM 真菌造成負面的影響，Blackwood等[16]采用Biolog 方法發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)Bt 玉米種植的土壤中真菌的含量要高于常規(guī)玉米，這些結(jié)果與本研究結(jié)果存在一定的差異，可能是由于所選生境及植物的種類不同而造成的。本研究中，花鈴期和吐絮期土壤樣品中AM 真菌群落結(jié)構(gòu)的最小相似度均大于0.6，優(yōu)勢屬均為Glomus（球囊霉屬），進一步證明了轉(zhuǎn)基因棉的種植未對AM 真菌群落產(chǎn)生顯著影響，這一結(jié)果與Knox等[17]的研究結(jié)果相似，其結(jié)果也表明了轉(zhuǎn)基因植物的種植對AM 真菌無影響或影響甚微，Daniell 等[18]的研究結(jié)果表明Glomus（球囊霉屬）是根際叢枝菌根真菌群落的重要組分，這也與本研究結(jié)果相一致。同時還可以發(fā)現(xiàn)兩組棉花對照土壤樣品并不是以轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因分布在聚類圖的上下兩側(cè)，而是根據(jù)品種的不同分在了聚類圖的上下兩側(cè)，這說明品種間的差異要大于轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因之間的差異。另外同一組對照之間轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉聚類結(jié)果大多沒有完全分開，可能是由于轉(zhuǎn)基因的導入使棉花根系分泌物發(fā)生了一定變化，從而導致土壤中AM 真菌的生長發(fā)育過程受到了一定的影響[29]。

對土壤樣品AM 真菌的香農(nóng)-威納指數(shù)、豐富度、均勻度研究發(fā)現(xiàn)吐絮期的數(shù)值均要高于花鈴期，這種微生物數(shù)量與植株生長發(fā)育呈正相關(guān)的現(xiàn)象在其他文獻中也有相似報道[20-21]。香農(nóng)-威納指數(shù)僅在吐絮期石遠321 顯著低于SGK321，均勻度僅在吐絮期TH2顯著高于013011，這種顯著性差異從整體結(jié)果來看相差甚微，且其余結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。由于在自然環(huán)境中影響微生物群落多樣性的因素很多，作物的生長期的不同、作物和土壤類型的差異、土壤養(yǎng)分因子、作物根系分泌物和農(nóng)業(yè)管理等都會影響微生物的群落結(jié)構(gòu)[22]。因此對于這種短暫的、不持續(xù)的差異性，本研究認為是由于生育期的不同和種植地點的差異引起的。這也與Meyer等[23]發(fā)現(xiàn)影響真菌群落結(jié)構(gòu)的主要因素是作物生育期、種植地點及季節(jié)的觀點相符合。本研究還發(fā)現(xiàn)，同一生育期同一特有條帶在兩組對照實驗中出現(xiàn)在一組的轉(zhuǎn)基因棉中同時也出現(xiàn)在另一組非轉(zhuǎn)基因棉中，因此認為這種特異性并不是由于轉(zhuǎn)基因棉的種植而引起的，可能是由于品種的不同而造成，Bouffaud 等[24]對玉米土壤微生物的研究也表明不同玉米品種的種植會對其根際微生物群落組成產(chǎn)生一定的影響。在不同的生育期兩組對照實驗的特異性條帶差異較大。因此可以認為生育期的不同對土壤AM 真菌的群落結(jié)構(gòu)有一定的影響[25]，類似地，Liu 等[26]和Guadarrama 等[27]的研究也認為季節(jié)變化以及生育期的不同對AM 真菌群落結(jié)構(gòu)有較大的影響。從系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果分析可知吐絮期AM 真菌的類群與花鈴期相比發(fā)生了變化，這與本研究認為AM 真菌的類群差異是由于生育期的不同而造成的相一致。

圖5 花鈴期系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 5 Phylogenetic tree of flowering and boll-setting period

任馨[28]對轉(zhuǎn)Bt 基因水稻種植的土壤研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)Bt 基因水稻的種植沒有對土壤中的AM 真菌造成影響，劉華等[29]對多年種植轉(zhuǎn)基因棉的研究也未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因的種植對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)造成影響。本實驗室其他研究者用不同方法對與本研究相同試驗地種植的轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉土壤中酶活性、養(yǎng)分含量、微生物群落、細菌群落以及古菌群落結(jié)構(gòu)進行研究，其研究結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因棉的種植會對以上指標造成顯著性的影響[30-34]。這也與本研究結(jié)果認為轉(zhuǎn)基因棉的種植并未對土壤AM 真菌群落結(jié)構(gòu)造成顯著性影響相一致。另外，本研究檢測出的大多數(shù)AM 真菌屬于不可培養(yǎng)微生物，且大部分分類地位仍未知，要確定其具體種屬和功能特性還需要進一步研究。

4 結(jié)論

（1）轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉土壤AM 真菌DGGE指紋圖譜在同一生長時期多為共有條帶，同一生長時期土壤AM 真菌群落結(jié)構(gòu)相似性較高，花鈴期和吐絮期優(yōu)勢屬均為Glomus（球囊霉屬）。

圖6 吐絮期系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 6 Phylogenetic tree of boll opening stage

（2）轉(zhuǎn)基因棉與非轉(zhuǎn)基因棉的種植對土壤AM 真菌香農(nóng)-威納指數(shù)（H）、均勻度（EH）和豐富度（S）幾乎沒有產(chǎn)生顯著性影響。

因此，本研究認為轉(zhuǎn)基因棉的種植對土壤AM 真菌群落多樣性沒有產(chǎn)生顯著影響。