喬月琴
(東臺市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,江蘇 東臺 224200)
雞新城疫病又稱亞洲雞瘟,由新城疫病毒引起,家禽發(fā)病后致死率較高,給養(yǎng)殖戶造成重大重大的經(jīng)濟損失。中草藥具有良好的抑菌能力,阻斷病毒的吸附、穿入、復(fù)制、轉(zhuǎn)染等環(huán)節(jié)起到直接抗病毒作用,還可調(diào)動機體的應(yīng)激能力、提高機體免疫功能和抗病防御機能。王世英,張登榮等人研究表明中草藥對新城疫疾病的預(yù)防有一定作用,趙永福,吳達琪以及陳松煥等人在臨床實踐中應(yīng)用中草藥治療雞新城疫疾病也得到了很好的作用。
中藥一般副作用較小,不易產(chǎn)生抗藥性,且在機體內(nèi)殘留小、對環(huán)境污染小。筆者希望通過中草藥對雞胚中NDV復(fù)制的抑制實驗,來進一步證實中草藥對NDV的抑制作用,為臨床上預(yù)防和治療提供更為有力度參考依據(jù)。
1.1.1 抗凝劑稱取枸櫞酸鈉3.21g,加去離子水溶解到50ml燒杯中,最后定容到100ml。高溫高壓滅菌后室溫或4℃保存。
1.1.2 PBS KH2PO40.24g,Na2HPO41.44g,NaCl 8g,KCl 0.2g,加去離子水約800ml充分攪拌溶解,后加入濃鹽酸調(diào)pH至7.4,最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫或4℃保存。
1.1.3 1%雞紅細胞吸入抗凝劑約1ml的滅菌采血器,分別采集3只健康成年公雞約5ml,1200轉(zhuǎn)/min離心15min,PBS洗滌3次,去白細胞等以徹底洗凈紅細胞。準確觀察刻度離心管中紅細胞體積,加入99倍體積的PBS,配成1%雞紅細胞,4℃保存,備用。
1.1.4 中草藥液的制備 分別將金銀花、板蘭根、連翹、黃芩加水適量煎煮,煮沸20min后,過濾,再以煮沸蒸發(fā)法濃縮成終濃度為每毫升含生藥1g的藥液,高壓滅菌,備用。
1.1.5 制備病毒液 將NDV用PBS液作1∶5稀釋,并加入青、鏈霉素各1000ū/ml,放置4℃作用1h,備用。
NDV強毒組; NDV強毒+陽性血清組;NDV強毒+藥液組;中草藥液對照組;PBS對照組
表1 各試驗組雞胚死亡情況
雞胚孵化溫度36℃,孵化濕度55%。每12h照蛋一次,并記錄雞胚死亡情況,直到108h試驗結(jié)束。
無菌收集各試驗組所有雞胚尿囊液,按微量凝集法檢測每組雞胚尿囊液內(nèi)病毒的血凝效價。記錄各實驗組尿囊液血凝價,并計算其平均值。
實驗結(jié)果表明黃芩對病毒復(fù)制抑制效果極顯著,金銀花和板蘭根的抑制效果次之,連翹最差(見表1)。
結(jié)果顯示,尿囊液中的病毒含量顯著低于強毒組表明金銀花、板蘭根、黃芩和連翹對病毒的復(fù)制都有很強的抑制作用(見表2)。
實驗結(jié)果能夠表明中草藥在阻斷病毒的吸附、穿入、復(fù)制、轉(zhuǎn)染等環(huán)節(jié)起到直接殺滅病毒的作用。臨床應(yīng)用中結(jié)合中醫(yī)清熱解毒、涼血冷血和西醫(yī)的組織修復(fù),消炎止血等理念,應(yīng)該可以提高新城疫疫病的治療效果。
表2 不同中草藥對雞胚尿囊液中NDV血凝效價的影響