張麗紅 方曉婷 董學(xué)君

肺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，其腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯高于黑色素瘤、乳腺癌、腎癌及結(jié)直腸癌[1]，20%～65%的肺癌患者在病程中會(huì)發(fā)生腦轉(zhuǎn)移，是腦轉(zhuǎn)移性腫瘤中最常見的類型，如不經(jīng)任何治療，其自然生存時(shí)間僅1.5～9.5個(gè)月[2～5]。因此，早期診斷、及時(shí)治療是減輕患者痛苦、延長(zhǎng)患者生命的關(guān)鍵。目前對(duì)于腦轉(zhuǎn)移的診斷基本依靠磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、計(jì)算機(jī)斷層掃描(computed tomography，CT)等影像學(xué)技術(shù)。但是，影像學(xué)檢查往往難以準(zhǔn)確地判斷病灶微小的腦轉(zhuǎn)移，且由于費(fèi)用昂貴、患者不易走動(dòng)等原因，連續(xù)的影像學(xué)檢查受到限制，不能動(dòng)態(tài)觀察患者的病情。因此，尋找一項(xiàng)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)肺癌腦轉(zhuǎn)移的早期診斷、療效觀察及預(yù)后評(píng)估意義重大。近年來，S100B蛋白在惡性腫瘤中的應(yīng)用成為研究熱點(diǎn)，S100B蛋白可能成為部分惡性腫瘤腦轉(zhuǎn)移患者早期診斷、療效判斷的標(biāo)志物[6,7]。本研究檢測(cè)肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清S100B蛋白水平，探討其對(duì)肺癌腦轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。

資料與方法

1.病例資料與分組：收集浙江省腫瘤醫(yī)院及筆者醫(yī)院2016年6月～2017年12月經(jīng)影像學(xué)及病理確診的肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清111例，設(shè)為肺癌腦轉(zhuǎn)移組(包括肺腺癌62例、肺鱗癌29例、小細(xì)胞肺癌15例、神經(jīng)內(nèi)分泌癌3例、大細(xì)胞肺癌2例)；另設(shè)肺癌無轉(zhuǎn)移組62例(包括肺腺癌36例、肺鱗癌21例；小細(xì)胞肺癌3例，神經(jīng)內(nèi)分泌癌1例、肺母細(xì)胞癌1例)、肺癌其他轉(zhuǎn)移組33例(包括肺癌骨轉(zhuǎn)移21例、肺癌肝轉(zhuǎn)移6例、肺癌縱膈淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例)、健康對(duì)照組38例。具體病例資料見表1。

表1 標(biāo)本的臨床資料

2.方法:(1)樣本收集與保存：所有受試者清晨空腹抽取靜脈血3ml入真空采血管，4000r/min離心5min，收集血清，分裝后于-20℃保存。(2)試劑：S100B蛋白檢測(cè)試劑購(gòu)自Arigo生物科技公司。(3)S100B蛋白檢測(cè)：方法參照說明書，每塊板均以試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度與實(shí)際所測(cè)的吸光度(A)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，將樣品的A值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，進(jìn)行板間差異校正。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，4組人群血清S100B濃度資料均為偏態(tài)分布，以P50(P25～P75)表示，兩組間差異比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，多組間差異比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

肺癌腦轉(zhuǎn)移組、肺癌無轉(zhuǎn)移組、其他轉(zhuǎn)移組、健康對(duì)照組4組人群血清S100B蛋白水平比較，詳見表2。

表2 各組人群S100B蛋白水平比較[P50(P25～P75),ng/ml]

由表1可以看出，肺癌腦轉(zhuǎn)移組S100B水平高于肺癌無轉(zhuǎn)移組、肺癌其他轉(zhuǎn)移組和健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.000、0.001、0.000)；肺癌無轉(zhuǎn)移組與肺癌其他轉(zhuǎn)移組、健康對(duì)照組S100B水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.684、0.109)。S100B水平與病理分型、腫瘤年限、年齡、性別、吸煙史均無關(guān)(P分別為0.285、0.819、0.397、0.744、0.207)。

2.應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件繪制S100B蛋白診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的受試者工作曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)，計(jì)算曲線下面積(area under the curve，AUC)，選擇約登指數(shù)最大處為最佳篩查陽性界值(cut-off)，得到S100B蛋白診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的AUC為0.701，敏感度為45.0%，特異性為91.0%，詳見圖1。

圖1 血清S100B診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的ROC曲線

討 論

S100B蛋白屬于S100蛋白家族，是一類低分子量的EF手型鈣離子結(jié)合蛋白，主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星狀膠質(zhì)細(xì)胞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的施萬細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞內(nèi)，是神經(jīng)系統(tǒng)的特異性蛋白，也是腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞完整性的特異性標(biāo)志蛋白[8，9]。血液中S100B蛋白含量相對(duì)穩(wěn)定，與年齡和性別無關(guān)，它通過腎臟代謝和排泄，半衰期估計(jì)為30～130min[10]。S100B釋放到血液中的機(jī)制仍未明確，最廣為接受的理論是，當(dāng)腦損傷或血-腦脊液屏障受損時(shí)，腦脊液內(nèi)S100B迅速升高，通過血-腦脊液屏障進(jìn)入外周血，因此血清S100B蛋白可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損的早期標(biāo)志物[11～14]。近來有研究認(rèn)為腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中與轉(zhuǎn)移部位的細(xì)胞間存在信息交流，循環(huán)腫瘤細(xì)胞腦轉(zhuǎn)移過程中，功能失調(diào)的星形膠質(zhì)細(xì)胞也可能起到促進(jìn)腦轉(zhuǎn)移發(fā)生的作用[15,16]。在腫瘤未發(fā)生轉(zhuǎn)移前，星形膠質(zhì)細(xì)胞防止癌細(xì)胞進(jìn)入腦組織，對(duì)腦組織具有保護(hù)作用，一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移即起到促進(jìn)作用[17]。S100B蛋白作為腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的特異性蛋白，在腦內(nèi)轉(zhuǎn)移性癌組織生長(zhǎng)時(shí)大量釋放到腦脊液中，可以通過被破壞的血-腦脊液屏障，分泌到血液中，使血清S100B水平作為癌癥腦轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物成為可能。

本實(shí)驗(yàn)采用ELISA方法檢測(cè)肺癌腦轉(zhuǎn)移、肺癌無轉(zhuǎn)移、肺癌其他轉(zhuǎn)移患者及健康對(duì)照者血清S100B蛋白水平，結(jié)果顯示,肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清S100B蛋白水平高于肺癌無轉(zhuǎn)移患者、肺癌其他部位轉(zhuǎn)移患者和健康對(duì)照者；肺癌無轉(zhuǎn)移患者、肺癌其他部位轉(zhuǎn)移患者、健康對(duì)照者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不同病理分型亞組和不同腫瘤年限亞組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示S100B蛋白在肺癌腦轉(zhuǎn)移患者中特異性升高且與病理分型和腫瘤年限無關(guān)，而在肺癌未轉(zhuǎn)移及肺癌骨、肝等其他器官轉(zhuǎn)移患者中不升高，可以作為肺癌腦轉(zhuǎn)移患者的血清蛋白標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)還分析了肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清S100B水平與年齡、性別、有無吸煙史的關(guān)系，得到S100B水平與上述肺癌高危因素均無關(guān)。應(yīng)用SPSS 19.0繪制S100B蛋白診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的ROC曲線，選擇約登(Youden)指數(shù)最大處為最佳篩查陽性界值(cut-off)，得到S100B蛋白診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移的敏感度為45.0%，特異性為91.0%。目前，臨床上尚缺乏敏感且特異的肺癌腦轉(zhuǎn)移診斷標(biāo)志物。有研究證實(shí)肺癌腦轉(zhuǎn)移患者血清CYFRA21-1、CEA、SCC等經(jīng)典肺癌標(biāo)志物水平高于肺癌無轉(zhuǎn)移患者，但是這些標(biāo)志物敏感度較低，不同的病理分型患者中差異較大，且無法區(qū)分肺癌腦轉(zhuǎn)移和肺癌其他部位轉(zhuǎn)移，因此，CYFRA21-1、CEA、SCC等標(biāo)志物多用于肺癌腦轉(zhuǎn)移的預(yù)后判斷和療效觀察，用于診斷的意義不大[18，19]。S100B蛋白診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移具有一定的敏感度和較高的特異性，且不受病理分型的影響，能很好地區(qū)分肺癌腦轉(zhuǎn)移和其他部位的轉(zhuǎn)移，具有較大的臨床價(jià)值。

血清S100B蛋白具有采樣方便、價(jià)格便宜、對(duì)人體損傷小等優(yōu)點(diǎn)，且臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)于血清S100B蛋白的檢測(cè)已較成熟，具有良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。綜上所述，血清S100B蛋白對(duì)肺癌腦轉(zhuǎn)移的診斷具有較大價(jià)值，可以作為潛在的肺癌腦轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物。