王忠明 馬春芳 馬建成

1.寧夏綠健源生物科技有限公司，寧夏吳忠 751101；2.寧夏吳忠市畜牧技術(shù)服務(wù)中心，寧夏吳忠 751100；3.寧夏利通區(qū)畜牧技術(shù)服務(wù)中心，寧夏吳忠 751100

生物飼料作為“十三五”期間新興產(chǎn)業(yè)重點(diǎn)產(chǎn)品，將成為飼料產(chǎn)業(yè)的重要突破口，據(jù)預(yù)測到2025年，我國生物飼料總量將達(dá)到飼料總量的40%，生物發(fā)酵原料的價(jià)值已為行業(yè)廣泛接受。目前，已有部分大型農(nóng)牧飼料和養(yǎng)殖企業(yè)銷售使用自產(chǎn)生物發(fā)酵飼料。但國家和農(nóng)業(yè)部在生物發(fā)酵飼料質(zhì)量控制與產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)方面還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，筆者結(jié)合近幾年在生產(chǎn)發(fā)酵枸杞果渣飼料的過程中對其質(zhì)量控制與產(chǎn)品出廠的檢驗(yàn)，與同行們一起分享。

發(fā)酵枸杞果渣飼料質(zhì)量的檢驗(yàn)主要從以下幾個(gè)方面入手：感官指標(biāo)、營養(yǎng)指標(biāo)、加工質(zhì)量指標(biāo)和衛(wèi)生指標(biāo)。

1 感官指標(biāo)

色澤與氣味。發(fā)酵好的飼料具有發(fā)酵所特有的酸香味，色褐黃色，呈細(xì)粒狀。用帶有呼吸膜的袋裝固態(tài)發(fā)酵枸杞果渣，在15℃以上的溫度存放，基本24 h后就開始需氧菌的發(fā)酵過程，出現(xiàn)發(fā)熱、脹袋，這種狀態(tài)維持1周左右，隨即轉(zhuǎn)入兼性厭氧菌和厭氧菌的發(fā)酵過程，2周后發(fā)酵庫就可嗅到一股酸香味，色澤變成褐色或棕褐色，即可初步判斷已發(fā)酵成熟。

2 常規(guī)理化指標(biāo)

飼料成品的常規(guī)理化指標(biāo)在一般飼料廠都可以完成，通過常規(guī)理化指標(biāo)的檢測和感官指標(biāo)，可以初步判定發(fā)酵飼料質(zhì)量的優(yōu)劣和穩(wěn)定性。

2.1 粗蛋白

粗蛋白含量雖然不是發(fā)酵飼料的主要檢測指標(biāo)，但是通過檢測發(fā)酵飼料粗蛋白含量，一是便于指導(dǎo)養(yǎng)殖場添加時(shí)計(jì)算日糧營養(yǎng)水平，二是也可作為宣傳公司產(chǎn)品的賣點(diǎn)之一。粗蛋白用凱氏定氮法進(jìn)行檢測，所用設(shè)備型號為上海昕瑞KDN-0A，檢測方法依據(jù)國標(biāo)《GB/T 6432-2002》，經(jīng)公司多批產(chǎn)品檢測證實(shí)，發(fā)酵后的粗蛋白較發(fā)酵前提高了8%～10%。

2.2 水分

水是構(gòu)成發(fā)酵基質(zhì)的主要原材料之一。發(fā)酵飼料水分的高低直接影響成品的活菌數(shù)，為了防止城市飲用水的氯制劑對活菌的影響，寧夏綠健源生物科技有限公司利用深井水進(jìn)行生產(chǎn)。水分檢測方法依據(jù)國標(biāo)《GB/T 6435-2006》執(zhí)行，由于受原料水分含量和季節(jié)的影響，各批飼料監(jiān)測水分在35.0%～40.0%之間波動。

2.3 灰分

灰分含量是發(fā)酵果渣類飼料的強(qiáng)制檢測標(biāo)準(zhǔn)，檢測方法依據(jù)國標(biāo)《GB/T 6438-2007》執(zhí)行，公司產(chǎn)品飼料監(jiān)測灰分結(jié)果基本上都在7.2%以下。

2.4 粗纖維

粗纖維含量是發(fā)酵果渣類飼料的強(qiáng)制檢測標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)酵可以有效降解飼料中粗纖維，提高粗纖維的利用率。檢測方法依據(jù)國標(biāo)《GB/T 6438-2007》執(zhí)行，檢測設(shè)備使用上海喬躍電子JOYN-CXW-06粗纖維儀，發(fā)酵枸杞果渣產(chǎn)品粗纖維含量在7.0%左右浮動。

2.5 酸 度

發(fā)酵飼料乳酸含量的高低是判斷微生物發(fā)酵飼料品質(zhì)優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)?？偹岫鹊臏y定采用酚酞指示劑法，有效酸度采用比色法進(jìn)行測定。發(fā)酵枸杞果渣產(chǎn)品酸度在4.0～4.8之間波動。

3 加工質(zhì)量指標(biāo)

3.1 成品粒度

飼料粉碎粒度不僅對動物對于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收有很大影響，而且對發(fā)酵過程中微生物的發(fā)酵程度有重要的關(guān)系。一般粒度愈小，發(fā)酵程度愈高，但由于產(chǎn)品枸杞渣的特殊性，只能使用孔徑0.84 mm篩，粒度為0.9 mm。按照國標(biāo)《GB/T6435-2006》進(jìn)行檢測，固定每個(gè)月抽檢2個(gè)批次的飼料產(chǎn)品，臨時(shí)檢測在更換篩片后進(jìn)行1次監(jiān)測。

3.2 混合均勻度

發(fā)酵枸杞果渣飼料的混合均勻度檢測方法比較特殊，要在加入菌液前進(jìn)行采樣監(jiān)測。如果在加入菌液后甲基紫完全溶解，影響檢驗(yàn)結(jié)果，依據(jù)《GB/T 5918-2008》進(jìn)行檢驗(yàn)。將甲基紫充分研磨，過孔徑0.104 mm篩后，按混合機(jī)飼料量的十萬分之一用量加入，在混合到規(guī)定的時(shí)間后從混合機(jī)的兩邊的觀察孔各取10份樣品，每份樣品約200 g，稱取試料10.00 g，放在150 mL的燒瓶中，加入30 mL無水乙醇攪動混勻后，在燒瓶上蓋一表面皿放置30 min后，用中速定性濾紙過濾，設(shè)722S型分光光度計(jì)波長為590 nm，以無水乙醇作空白調(diào)分光光度計(jì)的零點(diǎn)，用5 mm比色皿測定濾液的吸光度。枸杞果渣由于糖分高，粘性大，粉碎時(shí)需加入一定比例的輔料進(jìn)行粉碎，粉碎后加入小料后進(jìn)入混合機(jī)進(jìn)行混合，這樣粉碎加混合的多次混勻，使得發(fā)酵枸杞果渣產(chǎn)品的混合均勻度變異系數(shù)平均值CV≤1.0%，完全符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

4 衛(wèi)生指標(biāo)

飼料中天然、次生、外源性污染、有毒有害物質(zhì)及病原微生物的安全限量。

霉菌數(shù)檢驗(yàn)。無菌稱取已發(fā)酵好的檢樣25 g，放入含有225 mL滅菌稀釋液的三角燒瓶中，置振蕩器中振蕩30 min或渦旋混勻器上混勻3 min，即為1∶10的稀釋液。再做1∶10倍稀釋2次，每稀釋1次都吸取1 mL加入滅菌平皿中并注入約46℃±的高鹽察式培養(yǎng)基，充分混勻待培養(yǎng)基凝固后倒置，放入25～28℃±溫箱中培養(yǎng)3 d觀察，結(jié)果判定依據(jù)《GB/T13092-2006》執(zhí)行。公司生產(chǎn)的發(fā)酵枸杞果渣檢出數(shù)≤2×102個(gè)/g。

5 總菌數(shù)檢測

1）樣品的處理。用經(jīng)120℃干燥滅菌的牛皮紙取樣袋和取樣勺從已發(fā)酵好的、3個(gè)不同位置貯存的3袋飼料中取出2 000 g被檢樣品送入無菌間混合均勻后，檢測。

2）試樣稀釋與培養(yǎng)。無菌稱取試樣10 g，放于含有90 mL稀釋液的滅菌三角燒瓶中（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠），置振蕩器上振蕩30 min。經(jīng)充分振搖后，制成1∶10的均勻稀釋液，并在渦旋混勻器上8 000～10 000 r/min的速度處理1 min。

3）用1 mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1 mL，沿管壁慢慢注入含有99 mL滅菌稀釋液的三角燒瓶中（注意吸管不要觸及管內(nèi)稀釋液），放渦旋混勻器上，混合1 min，混合均勻制成1∶1 000的稀釋液。在稀釋的同時(shí)，取該稀釋度菌液1 mL注入2個(gè)平皿中，加入15 mL高鹽察氏培養(yǎng)基，快速混勻待凝固后倒置，放入（30±1）℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。

4）另取1只1 mL滅菌吸管，按上述操作方法，作100倍遞增稀釋，如此每遞增稀釋1次，即更換1次滅菌吸管。根據(jù)飼料產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，寧夏綠健源生物科技有限公司的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是活菌數(shù)≥1.0×108CFU/g，因此我們選擇 106、107、108、1094 個(gè)稀釋度，分別在作100倍遞增稀釋的同時(shí)，以吸取該稀釋度的吸管移1 mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作2個(gè)培養(yǎng)皿。

5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至（48±1）℃的培養(yǎng)基（可放置在（48±1）℃水浴鍋內(nèi)保溫）注入培養(yǎng)皿約15 mL，小心轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿使試樣與培養(yǎng)基充分混勻，從稀釋試樣到傾注培養(yǎng)基之間，時(shí)間不要超過30 min。如估計(jì)試樣中所含微生物可能在培養(yǎng)基表面生長時(shí)，待培養(yǎng)基完全凝固后，可在培養(yǎng)基表面傾注至（46±1）℃的水瓊脂培養(yǎng)基4 mL。待瓊脂凝固后，倒置平皿于（30±1）℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（72±3）h取出，計(jì)算平板內(nèi)細(xì)菌總數(shù)，細(xì)菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得每克試樣所含細(xì)菌總數(shù)。

6）細(xì)菌總數(shù)計(jì)算方法。做平板細(xì)菌總數(shù)計(jì)算時(shí)，可用菌落計(jì)數(shù)器或肉眼觀察，如菌落形態(tài)小時(shí)，可借助于放大鏡檢查，以防遺漏。在計(jì)算出各平板細(xì)菌總數(shù)后，求出同稀釋度的2個(gè)平板菌落的平均值。細(xì)菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得每克試樣所含細(xì)菌總數(shù)。

7）細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)的報(bào)告。細(xì)菌總數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用2位有效數(shù)字，在2位有效后面的數(shù)值，以四舍五入方法修約。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，可用10的指數(shù)表示。

①平板總數(shù)細(xì)菌總數(shù)的選擇。選擇細(xì)菌總數(shù)在30～300之間的平板作為細(xì)菌總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)，每一稀釋度使用2個(gè)平板菌落的平均數(shù)。2個(gè)平板其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板菌落的平均數(shù)作為該稀釋度的細(xì)菌總數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，以代表全平皿細(xì)菌總數(shù)。

②稀釋度的選擇。應(yīng)選擇平板細(xì)菌總數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有2個(gè)稀釋度，其生長的細(xì)菌總數(shù)在30～300之間，則視二者之比來決定。若其之比≤2，應(yīng)報(bào)告其平均值；若＞2則報(bào)告其中較小的數(shù)字。若所有稀釋度的平均細(xì)菌總數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均細(xì)菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；若所有稀釋度的平均細(xì)菌總數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均細(xì)菌總數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋度報(bào)告之。

6 小結(jié)

1）采用高效呼吸膜固態(tài)發(fā)酵核心技術(shù)，該技術(shù)關(guān)鍵創(chuàng)新點(diǎn)在于發(fā)明了一種能使微生物有益菌在自然狀態(tài)下保持高活性生長代謝的生命呼吸裝置——呼吸膜，它可以使活菌（主要是乳酸桿菌和酵母菌）在自然條件下長期保持高活性。較好地解決了微生物固態(tài)發(fā)酵散熱、厭氧控制，以及包裝、儲運(yùn)、穩(wěn)定性等難題。

2）把控住以上幾個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，生產(chǎn)出的發(fā)酵枸杞果渣產(chǎn)品完全符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有發(fā)酵飼料所應(yīng)有的酸、香味，適口性好。

3）產(chǎn)品總菌數(shù)超過企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，飼喂畜禽后，食欲增加，降低畜禽腹瀉率，畜禽舍空氣質(zhì)量好轉(zhuǎn)，比不喂發(fā)酵飼料的畜禽增重快、經(jīng)濟(jì)效益高，在使用過的養(yǎng)殖場得到廣泛的認(rèn)可。

4）發(fā)酵飼料的總菌數(shù)檢測，操作上不能完全套用《GB/T 13093-2006》的方法進(jìn)行，建議在首次進(jìn)行10倍稀釋后，可直接進(jìn)行2次100倍稀釋后，再進(jìn)行3～4個(gè)10倍稀釋，進(jìn)行接種培養(yǎng)，出來的結(jié)果更接近于發(fā)酵飼料的實(shí)際菌數(shù)檢測值。

5）樣品稀釋后的混勻，使用均質(zhì)器或渦旋混勻器更方便，更易混勻，也更節(jié)省檢測時(shí)間。

6）培養(yǎng)基的水浴溫度冬季最好保持在49～50℃，否則會造成稀釋液與培養(yǎng)基尚未混勻，培養(yǎng)基就已凝固的狀況。

通過對產(chǎn)品的pH值、總酸度、水分、粗蛋白含量、粗纖維、總菌數(shù)、霉菌數(shù)和大腸菌群數(shù)等基礎(chǔ)指標(biāo)的檢測，可以有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，評價(jià)發(fā)酵飼料的安全性。