漆麗萍，李劍美，湯浩綿

(普洱學(xué)院，云南 普洱 665000)

三角梅(BougainvilleaspectabilisWilld.)是紫茉莉科葉子花屬中的一種木質(zhì)藤木狀灌木，又稱九重葛、寶巾花、葉子花等[1]。在屠峰等[2]的研究中較全面地概括了三角梅在園林中的應(yīng)用，三角梅是一種優(yōu)秀實(shí)用的園林綠化花卉。三角梅的繁殖方法有播種法、扦插法、嫁接法、壓條法、組織培養(yǎng)法等，其中最常用的繁殖方法是扦插繁殖、嫁接繁殖及壓條繁殖[3]。三角梅的花管小，天然授粉難，獲得三角梅種子的機(jī)會(huì)極少，所以三角梅很少用播種繁殖[4]。壓條繁殖和嫁接繁殖的技術(shù)要求高，操作過(guò)程十分繁瑣，不易被掌握，繁殖成活率低[5]。扦插繁殖只需有質(zhì)地疏松、保水性好的栽培基質(zhì)，加上合適的濕度、溫度和光照，再適當(dāng)利用生根劑以促進(jìn)根的生長(zhǎng)，會(huì)得到較高的扦插成活率，所以扦插繁殖是三角梅最主要和常用的繁殖方法[6]，但在自然條件下的該繁殖方式的成活率和生根率較低，操作范圍也受到了各種自然條件的限制[5]。所以許多學(xué)者為了提高三角梅扦插繁殖生根率和成活率，進(jìn)行了不少關(guān)于三角梅扦插繁殖的研究，其中林曉紅[7]的研究結(jié)果表明，三角梅的越冬枝條更易成活長(zhǎng)根，在初夏扦插成活效果最好，生根粉、NAA、IAA這3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)三角梅的插條都有很好的促根作用，效果最好的是用100 mg/L NAA浸泡3 h的處理。楊曉盆等[5]的研究結(jié)果表明，三角梅的當(dāng)年生嫩枝無(wú)論哪種處理都很難生根，用IBA和NAA對(duì)1年生木質(zhì)化枝條進(jìn)行混合處理的試驗(yàn)組生根效果最好。徐永艷等[8]的研究結(jié)果表明，對(duì)三角梅生根效果有促進(jìn)作用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的高低順序是IAA、IBA、ABT1、NAA，其中，濃度為200 mg/L的IBA對(duì)三角梅有較好的促根作用，NAA對(duì)三角梅促根效果最佳的濃度是150 mg/L。為讓三角梅在上盆時(shí)盡少傷根，前人還設(shè)計(jì)并試驗(yàn)了一種新的扦插方法——海綿促根法，該方法適合繁殖一些珍貴的品種[9]。

水培花卉屬于無(wú)土栽培中的一種，是一種新型的、清潔的、環(huán)保的花卉栽培方式，是在“綠色革命”后又興起的一場(chǎng)關(guān)于種植的新革命，栽種培養(yǎng)的植物主要是能在水陸生長(zhǎng)的“兩棲植物”[10]，該栽培方式始于國(guó)外，在國(guó)外許多地方已廣泛應(yīng)用水培技術(shù)。我國(guó)在水培研究雖起步稍晚，但現(xiàn)在也已廣泛應(yīng)用到各方面。隨著人民生活水平漸漸提高，水培花卉的商業(yè)前景越來(lái)越好，關(guān)注該方面發(fā)展的人也越來(lái)越多[11]。目前我國(guó)在觀賞植物應(yīng)用水培方面主要研究常集中于草本花卉，對(duì)于木本難生根觀賞植物水培誘導(dǎo)生根研究很少[12]。由于水培技術(shù)便于觀察插條生根情況，在蔬菜和花卉植物的研究繁殖方面得到普遍應(yīng)用后，也逐漸增多了對(duì)木本植物水培生根情況的研究[13]。因水培植物的難點(diǎn)在于如何將植物的土培根系轉(zhuǎn)化為適合水中生長(zhǎng)的根系[14]，雖然水培技術(shù)簡(jiǎn)單、易操作，但前提是選擇好適合水培扦插枝條生長(zhǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、濃度和浸泡處理時(shí)間，否則會(huì)有較高的試驗(yàn)失敗率。目前國(guó)內(nèi)對(duì)三角梅繁殖方式的研究主要是扦插繁殖，鮮見(jiàn)關(guān)于三角梅水培扦插繁殖方式的研究報(bào)道。為此，研究三角梅水培誘導(dǎo)生根技術(shù)，找出三角梅水培最適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及濃度，以期為高效率大面積生產(chǎn)繁殖三角梅種苗滿足市場(chǎng)需求提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)試劑 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為NAA和IBA；快速生根液和濃縮營(yíng)養(yǎng)液選購(gòu)自淘寶網(wǎng)德沃多肥料旗艦店。

1.1.2 試驗(yàn)用具 主要試驗(yàn)用具：長(zhǎng)為21.5 cm、寬為14.5 cm的長(zhǎng)方形塑料容器(容器不透明，正好創(chuàng)造了與土壤中相似的光線條件)；片狀海綿；剪成20 cm×20 cm的熱鍍鋅鐵絲網(wǎng)等。

1.1.3 試驗(yàn)插條取材 2017年10月23日，陰天無(wú)風(fēng)，于15：00在普洱學(xué)院小山坡附近生長(zhǎng)良好的三角梅取材，選取充分木質(zhì)化、生長(zhǎng)健壯、沒(méi)有病蟲(chóng)害、直徑為0.8～1.2 cm的三角梅越冬插條。將選取好的插條剪成含2～3個(gè)芽節(jié)、長(zhǎng)度為10 cm、下端斜削成馬蹄形的待水培插條[7]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)處理 試驗(yàn)設(shè)8個(gè)處理，對(duì)照為清水(處理1)，德沃多肥料快速生根液0.5 mL/L(處理2)和參照前人[8]的試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)設(shè)計(jì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度：NAA的濃度為125 mg/L(處理3)、150 mg/L(處理4)和175 mg/L(處理5)，IBA的濃度為175 mg/L(處理6)、200 mg/L(處理7)和225 mg/L(處理8)。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)組30根插條，共720根插條。

1.2.2 水培方法

1) 將剪取好的待水培插條用5%的高錳酸鉀溶液對(duì)其基部進(jìn)行 5 min消毒，并用蒸餾水沖洗干凈[15]，然后進(jìn)行上述8個(gè)處理。清水處理：直接用清水培養(yǎng)，作為對(duì)照組；德沃多肥料快速生根液處理：直接浸泡在調(diào)配好濃度的生根液溶液中，每2～3 d換1次；其余各處理：在不同濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液中浸泡12 h后轉(zhuǎn)入清水培養(yǎng)。由于第1次試驗(yàn)處理生根效果不太明顯，于12月29日將枝條再次用8個(gè)處理進(jìn)行第2次試驗(yàn)，所有的枝條再次用1.2.1的8個(gè)處理浸泡24 h后轉(zhuǎn)入清水中。

2) 插條水培方法參照“海綿促根法”[9]方法進(jìn)行水培試驗(yàn)：將處理好的插條分別插入各片狀海綿的工字孔中，插入深度為2.5 cm，在容器高3 cm處用熱鍍鋅鐵絲網(wǎng)撐起，將插好枝條的片狀海綿放在撐起的包塑鐵絲網(wǎng)上，在每塊海綿上插滿30根待水培插條；在消過(guò)毒的容器中倒入清水，以淹沒(méi)鐵絲網(wǎng)為準(zhǔn)，并剛好讓海綿能吸到水，又不會(huì)浸泡到海綿，容器中水的深度以3 cm為宜。各處理必須按照每3 d的周期交替換水或營(yíng)養(yǎng)液，直至試驗(yàn)結(jié)束。將處理好的所有插條放入溫室(日光溫室，平均溫度 24～27℃)稍遮陰處，之后觀察插條的成活、生根和發(fā)芽情況。

1.2.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄 定期對(duì)整個(gè)水培生根過(guò)程進(jìn)行跟蹤觀察記錄，包括愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間、萌發(fā)新芽枝條數(shù)、生根時(shí)間、數(shù)量和根長(zhǎng)等指標(biāo)。

1.2.4 數(shù)據(jù)測(cè)定方法 愈傷組織：用肉眼觀察確定；萌發(fā)新芽枝條數(shù)(即成活數(shù))、生根時(shí)間和生根數(shù)目：3 d觀察1次并記錄。生根根長(zhǎng)：尺子測(cè)量，精確到0.1 cm。

成活率=成活數(shù)/總枝條數(shù)×100%

生根率=生根插條/每個(gè)處理的插條總數(shù)×100%

平均每枝生根數(shù)(條)=生根總根數(shù)/生根總枝數(shù)

總根長(zhǎng)=每處理長(zhǎng)出的所有根的總長(zhǎng)度

平均每枝總根長(zhǎng)=總根長(zhǎng)/生根總枝數(shù)(枝)

平均根長(zhǎng)=每組總根長(zhǎng)/生根總根數(shù)

有效成活率=既長(zhǎng)根又長(zhǎng)芽枝數(shù)/總枝條數(shù)×100%

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 利用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，8個(gè)處理間多重比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)三角梅水培插條成活的影響

在取材時(shí)出于方便，剪取的枝條并沒(méi)有留下葉片，當(dāng)水培插條萌發(fā)新芽時(shí)，即可認(rèn)定其成活了，故表1中的成活數(shù)數(shù)據(jù)亦是萌發(fā)新芽數(shù)。從表1看出，11月10日各不同處理試驗(yàn)組均開(kāi)始萌發(fā)新芽。其中，萌發(fā)新芽最早且成活數(shù)最多的是生根液組。除清水處理外，生根液處理組的成活率與其他處理組差異顯著；在第2次試驗(yàn)中，濃度為225 mg/L的IBA處理只有1個(gè)重復(fù)組有成活數(shù)?？梢?jiàn)，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度影響水培插條的成活和發(fā)芽情況，生根液的處理有利于提高水培三角梅的成活率。

2.2 三角梅水培插條形成的愈傷組織類型

插條水培4 d左右，浸入水中的枝條皮部開(kāi)始長(zhǎng)白色小點(diǎn)，后面慢慢變成淡黃色、質(zhì)地疏松的愈傷組織。這些愈傷組織有的一直都是顆粒狀、點(diǎn)狀(圖1A)，有的則逐漸伸長(zhǎng)，連成一片(圖1B)。經(jīng)過(guò)后期水培試驗(yàn)觀察，參照王海波[16]對(duì)愈傷組織的3種分類(結(jié)構(gòu)致密、生長(zhǎng)較慢的愈傷組織稱為保守分裂型；結(jié)構(gòu)脆生、色澤漂亮、長(zhǎng)勢(shì)良好的愈傷組織稱為亢進(jìn)分裂型；質(zhì)地疏松、色澤暗淡、生長(zhǎng)速度最慢的愈傷組織稱為衰敗型)，圖1A和圖1B的三角梅愈傷組織健康、色澤鮮艷、質(zhì)地松軟，屬于較容易生根的愈傷組織，即亢進(jìn)分裂型；圖1C的淡黃色愈傷組織隨著水培時(shí)間的推移，逐漸變色，甚至變成黑色，其愈傷組織結(jié)構(gòu)致密，不易出根，為保守分裂型。

表1 不同處理三角梅水培插條的成活率Table 1 Survival rate of B.spectabilis under different treatment in water culture

注：同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)；無(wú)小寫(xiě)字母的表明僅采集到1個(gè)重復(fù)組數(shù)據(jù)(下同)。
Note: Different lowercase letters in the same column indicate significance of difference atP< 0.05 level.The absence of lowercase leffers indicates that only one group of data was collected.The same below.

圖1 三角梅水培插條產(chǎn)生的愈傷組織類型Fig.1 Callus types produced by B.spectabilis cuttings in water culture

2.3 不同處理對(duì)三角梅水培插條生根的影響

水培培養(yǎng)的第25天，在IBA 200 mg/L處理中最先發(fā)現(xiàn)插條的皮層部分長(zhǎng)出白色小突起物，后期這些小突起物逐漸發(fā)育伸長(zhǎng)變成根(圖2A)。隨著水培時(shí)間的延長(zhǎng)，新生根越來(lái)越多，其多生長(zhǎng)于插條下切口四周靠近皮層部位，也有少數(shù)生長(zhǎng)在枝條浸水的皮層部分。但在第1次水培試驗(yàn)中，由于保守分裂型和衰敗型的愈傷組織占比高，所以第1次試驗(yàn)生根效果不太理想(圖2B)。在進(jìn)行第2次試驗(yàn)處理后，生根情況得到很好的改善(圖2C、D)。

水培插條的生根時(shí)間與植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度有著非常密切的關(guān)系。從表2看出，在第1次試驗(yàn)中，只有3個(gè)處理組生根；水培插條最早生根的是IBA 200 mg/L的處理(11月22日開(kāi)始生根)。第2次試驗(yàn)中，全部處理組均能生根，其中，生根最快、最多的是IBA 200 mg/L的處理(表2)；僅IBA 200 mg/L處理的平均每枝生根數(shù)與生根液和清水處理間差異顯著，說(shuō)明IBA 200 mg/L對(duì)三角梅水培插條生根有較好的促進(jìn)作用。

圖2 三角梅水培插條的生根表現(xiàn)Fig.2 Rooting performance of B.spectabilis in water culture

表2 不同處理三角梅水培插條的生根情況Table 2 Rooting situation of B.spectabilis cuttings under different treatment in water culture

注：第2次試驗(yàn)的生根時(shí)間由于寒假期間，沒(méi)能及時(shí)觀察到。
Note：The rooting time ofB.spectabiliscuttings in the second test was not observed in time due to the winter vacation.

2.3.1 水培插條的生根率 從表3看出，在第2次試驗(yàn)中，IBA 200 mg/L處理的生根率最高，其與NAA處理組、清水(CK)間差異顯著，表明IBA 200 mg/L對(duì)促進(jìn)三角梅水培插條的促根作用最好。從第2次試驗(yàn)整體數(shù)據(jù)看，NAA處理組的生根率均低于清水(CK)，原因可能是濃度設(shè)置不合理而抑制水培插條的生根效果，說(shuō)明濃度的設(shè)置對(duì)水培插條具有極其重要的意義。從2次試驗(yàn)結(jié)果看，IBA 200 mg/L處理的生根枝條數(shù)第2次比第1次少，其原因主要是冬天低溫導(dǎo)致第1次試驗(yàn)中已經(jīng)生根的枝條發(fā)生死亡。

表3 不同處理三角梅水培插條的生根率Table 3 Rooting rate of B.spectabilis cuttings under different treatment in water culture

2.3.2 水培插條生根的根長(zhǎng) 由于第1次試驗(yàn)生根效果不好，根長(zhǎng)數(shù)值過(guò)小，故表4中的數(shù)據(jù)為第2次試驗(yàn)記錄數(shù)據(jù)。從表4看出，各處理間的總根長(zhǎng)差異不明顯；NAA 175 mg/L處理的平均每枝總根長(zhǎng)與NAA 150 mg/L處理、生根液處理間差異顯著；NAA 175 mg/L處理的平均根長(zhǎng)與IBA 200 mg/L處理、NAA 150 mg/L處理間差異顯著。說(shuō)明，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理對(duì)三角梅水培插條的生根影響效果不同，NAA 175 mg/L處理對(duì)三角梅水培插條生根長(zhǎng)度有促進(jìn)作用。

2.4 不同處理對(duì)三角梅水培插條有效成活率的影響

從表5看出，各處理間的有效成活率差異均不顯著；第2次試驗(yàn)中有效成活率最大的是生根液處理組，其次是IBA 200 mg/L的處理。結(jié)合上述分析結(jié)果：生根液有助于提高水培三角梅插條的成活率和有效成活率；IBA 200 mg/L處理的成活率雖沒(méi)有生根液處理和清水(CK)的高，但其有效成活率高于清水(CK)，表明BA 200 mg/L處理可以促進(jìn)三角梅根芽的生長(zhǎng)發(fā)育，且生根效果比生根液處理的好。

表4 不同處理三角梅水培插條生根的根長(zhǎng)Table 4 Root length of B.spectabilis cuttings under different treatment in water culture

表5 不同處理對(duì)三角梅水培插條的有效成活率Table 5 Effective survival rate of B.spectabilis cuttings under different treatment in water culture

3 結(jié)論與討論

在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，三角梅在水培中出現(xiàn)的2種愈傷組織與鄭蓉等[17]在研究中提到的馬尾松在水培條件下出現(xiàn)的2種愈傷組織類型相似。三角梅水培插條的發(fā)根部位也與馬尾松水培生根一致，生根部位多位于枝條下切口處，但在下切口形成的愈傷組織不一定都能生根。在第1次試驗(yàn)中，許多三角梅水培枝條泡水部分皮部腐爛變黑，然后木質(zhì)部變褐色，接著插條上部表現(xiàn)缺水直至死亡。謝志南等[18]的研究也提到有關(guān)插條變黑腐爛直至死亡的情況，會(huì)發(fā)生這種情況的原因可能是在即將水培前枝條消毒不充分，導(dǎo)致下切口進(jìn)入病原體；或是水培插條泡入水中長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng)；也有可能是枝條選擇不當(dāng)。在總結(jié)經(jīng)驗(yàn)后，第2次試驗(yàn)中并沒(méi)有再次發(fā)生這種情況。

IBA 225 mg/L處理的成活數(shù)越來(lái)越少，用NAA、IBA不同濃度處理的成活率也沒(méi)有清水(CK)的高，分析原因可能是濃度的設(shè)置不利于水培插條的生長(zhǎng)發(fā)育。且三角梅不耐寒，喜歡充足光照的環(huán)境和溫暖濕潤(rùn)的氣候，試驗(yàn)中的成活率第2次試驗(yàn)明顯低于第1次試驗(yàn)，其原因可能是第2次水培時(shí)間正值普洱的冬季，溫度大幅度降低，導(dǎo)致水培三角梅中的發(fā)芽枝條不適應(yīng)而被凍死。

第1次試驗(yàn)只有IBA處理的水培插條出根，說(shuō)明在研究中IBA最適宜三角梅插條水培生根；而不同濃度的IBA處理試驗(yàn)組生根有差異，表明植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的不同濃度對(duì)三角梅水培生根有很大影響，濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于三角梅水培生根。第2次試驗(yàn)生根情況較好，而且每個(gè)處理均能長(zhǎng)根，清水也能生根。究其原因，有可能是三角梅水培生根所需時(shí)間較長(zhǎng)，也有可能是再一次的浸泡處理加快了三角梅的生根速度，說(shuō)明植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的反復(fù)處理對(duì)水培生根可能也有一定的促進(jìn)作用；另溫度的升高也可能是水培根生長(zhǎng)好轉(zhuǎn)的原因。

氧氣有利于愈傷組織和根系的生長(zhǎng)，植物的生長(zhǎng)發(fā)育都需要氧，水中的溶氧量較少，不利于插條根系的生長(zhǎng)。水培扦插的關(guān)鍵是誘導(dǎo)出水生根系，懸空水培法[19]正好能增加水中的溶氧量，幫助加快植物根系的生長(zhǎng)，試驗(yàn)生根情況不理想也有可能是水中的溶氧量不足所致。在朱玉球等[20]的研究中提到，植物生長(zhǎng)發(fā)育最適溫度是20～25℃，在此溫度下進(jìn)行水培扦插，其生根時(shí)間不但可以縮短，而且整個(gè)試驗(yàn)也能事半功倍。但是20～25℃也是各種病菌、病原體滋生的適宜溫度，所以要做好消毒工作。試驗(yàn)生根不理想的原因方方面面，這些原因與問(wèn)題有待進(jìn)一步探究與改善，但總體而言，水培扦插育苗具有一定的實(shí)用意義[17]，其操作容易，水培不受自然條件因素的限制，水培溫度可以控制，再加上病蟲(chóng)害少，發(fā)根后可直接移栽，中間直接省略了除草開(kāi)墾等許多工作，是較優(yōu)的繁殖方式。但還需進(jìn)一步探討關(guān)于三角梅水培扦插藥劑的種類、濃度和浸泡時(shí)間等。

綜上所述，不同處理對(duì)三角梅水培插條生根情況的影響不同，IBA有利于促進(jìn)三角梅水培插條生根，NAA對(duì)于三角梅水培插條生根的根長(zhǎng)也有促進(jìn)作用。IBA 200 mg/L處理對(duì)三角梅水培插條的促根效果最好，后期三角梅水培生根趨勢(shì)變好，說(shuō)明三角梅適合用水培扦插繁殖。