，， ，, 2

絳蟲(chóng)蚴病(Metacestodiasis)是由絳蟲(chóng)的幼蟲(chóng)寄生在動(dòng)物(包括人)體內(nèi)引起的一類寄生蟲(chóng)病。帶科(Taeniidae)的帶屬(Taenia)和棘球?qū)?Echinococcus)絳蟲(chóng)的幼蟲(chóng)危害尤為嚴(yán)重[1-2]，分別稱為囊尾蚴(俗稱囊蟲(chóng))和棘球蚴(俗稱包蟲(chóng))，它們通過(guò)消化道感染宿主，借助血液或者淋巴循環(huán)遷移到寄生部位，廣泛寄生于草食性動(dòng)物或雜食性動(dòng)物(包括人)等的體內(nèi)，分別引起囊尾蚴病(Cysticercosis，俗稱囊蟲(chóng)病)和棘球蚴病(Echinococcosis，俗稱包蟲(chóng)病)。棘球蚴病中危害最嚴(yán)重的是細(xì)粒棘球蚴和多房棘球蚴，分別引起中間宿主(包括人)的囊型棘球蚴病(Cystic echinococcosis, CE)和泡型棘球蚴病(Alveolar echinococcosis, AE)，全球每年因棘球蚴病給畜牧業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失和用于棘球蚴病患者的治療費(fèi)用合計(jì)高達(dá)30億美元，僅囊型棘球蚴病每年可造全球1 000 000～3 000 000的傷殘調(diào)整生命年(DALYs，disability adjusted life years)的損失(http://www.who.int/echinococcosis/epidemiology/en/)；多房棘球蚴病更有“蟲(chóng)癌”之稱，感染后未經(jīng)治療的多房棘球蚴患者的10年病死率可高達(dá)94%[3]。因此，帶科絳蟲(chóng)尤其是棘球絳蟲(chóng)，不但對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展影響巨大，而且嚴(yán)重危害人類身體健康，在公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義[4-5]。

棘球蚴病不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重危害，而且人感染棘球蚴病的報(bào)道也居高不下，為了防治本病，驅(qū)蟲(chóng)藥被大量投入使用，并取得了一定的效果，但是由于長(zhǎng)期使用化學(xué)藥物，出現(xiàn)了耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染等一系列問(wèn)題。而疫苗具有安全、無(wú)殘留、動(dòng)物無(wú)休藥期、符合“預(yù)防為主，治療為輔”工作方針等優(yōu)點(diǎn)，是疫病防控的重要手段之一，同時(shí)現(xiàn)代生活中寵物數(shù)量越來(lái)越多，寵物主人對(duì)寵物的寄生蟲(chóng)防治更傾向疫苗防治，所以研制有效的寄生蟲(chóng)病疫苗對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展和人民生活質(zhì)量提高都有重要意義[6]。

棘球蚴疫苗研制經(jīng)歷了傳統(tǒng)的六鉤蚴、細(xì)胞培養(yǎng)物等組織細(xì)胞疫苗；到新型疫苗的出現(xiàn)，如多肽疫苗、核酸疫苗、基因工程亞單位疫苗、基因工程活載體疫苗、以及利用基因工程技術(shù)開(kāi)發(fā)的轉(zhuǎn)基因植物疫苗等。隨著時(shí)代和技術(shù)的進(jìn)步，更加理想的新型疫苗相信也會(huì)相繼出現(xiàn)。總的來(lái)說(shuō)，尋找具有更加高效、持久、廣譜、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、安全等優(yōu)點(diǎn)的疫苗是疫苗研制發(fā)展的方向[7]，下面對(duì)棘球蚴病疫苗研究進(jìn)展做一綜述。

1 組織細(xì)胞疫苗

早期的棘球蚴病疫苗主要是由棘球絳蟲(chóng)分泌物和代謝物、蟲(chóng)卵、六鉤蚴或原頭蚴分泌物、細(xì)胞培養(yǎng)物等制成的，免疫動(dòng)物可以得到強(qiáng)的免疫保護(hù)力，朱興全等[8]和Osborn等[9]分別對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)六鉤蚴分泌物抗原性研究發(fā)現(xiàn)，其免疫保護(hù)力分別可達(dá)96.04%和99.40%，但是因?yàn)榇种瓶乖煞謴?fù)雜，含有多種抗原蛋白[10]，生產(chǎn)成本高，難以進(jìn)行批量生產(chǎn)[11]，并且飼養(yǎng)犬只可能會(huì)造成工作人員被感染，存在有公共衛(wèi)生隱患等問(wèn)題。所以隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，組織細(xì)胞疫苗不可避免地已被其他類型的疫苗所代替。

2 合成肽疫苗

棘球蚴病合成肽疫苗是根據(jù)棘球蚴的有效保護(hù)性免疫抗原中已知或預(yù)測(cè)的某段抗原表位的氨基酸序列，通過(guò)人工設(shè)計(jì)和合成的具有免疫原性的多肽疫苗。目前寄生蟲(chóng)病中研究較多的主要是瘧疾和血吸蟲(chóng)病合成肽疫苗，合成肽疫苗在棘球蚴病和囊尾蚴病方面也有研究和應(yīng)用。

Eg95蛋白廣泛存在于細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)六鉤蚴、育囊生發(fā)層、原頭蚴以及成蟲(chóng)體表[12]，在細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育中必不可少，這提示Eg95蛋白能夠誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫保護(hù)。Woollard等[13]對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的保護(hù)性抗原Eg95進(jìn)行抗原表位分析，根據(jù)分析結(jié)果人工合成4條短肽，免疫羔羊試驗(yàn)顯示這4條短肽僅具有免疫原性，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生明顯的特異性抗體，但沒(méi)有反應(yīng)原性，免疫保護(hù)力(0%)遠(yuǎn)不如Eg95(保護(hù)力高達(dá)99.8%)，說(shuō)明兩種抗體之間存在著差異，這些多肽和Eg95疫苗對(duì)宿主免疫保護(hù)的關(guān)系還需后續(xù)研究。Woollard等[14]也對(duì)重組疫苗抗原Eg95的保護(hù)性多肽做了定位分析，結(jié)果表明Eg95疫苗誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的主要部位是構(gòu)象表位，宿主的保護(hù)性抗原表位也是構(gòu)象表位，這為棘球蚴病合成肽疫苗的研制提供了理論依據(jù)。

合成肽疫苗完全是人工合成，不含核酸，能夠克服常規(guī)疫苗的一些缺陷，被認(rèn)為是一種更加高效、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)的疫苗，但是合成肽疫苗的抗原性及其免疫原性受自身組成及宿主免疫系統(tǒng)等多種因素的影響，并且發(fā)現(xiàn)免疫力不能垂直傳遞，新生仔豬對(duì)囊尾蚴仍易感，需要再次免疫[15]，還有中和表位多為構(gòu)象表位，這些問(wèn)題都給合成肽疫苗的研制和推廣應(yīng)用帶來(lái)了阻力。目前合成肽疫苗是預(yù)防和控制感染性疾病和惡性腫瘤的主要新型疫苗研制方向之一，在棘球蚴病中研究較少，所以更加有效、實(shí)用的棘球蚴病合成肽疫苗需要進(jìn)一步的探究。

3 基因工程重組疫苗

基因工程重組疫苗是運(yùn)用DNA重組技術(shù)，將編碼病原保護(hù)性抗原的基因?qū)朐嘶蛘婧吮磉_(dá)系統(tǒng)，使其高效表達(dá)，提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程重組疫苗。與傳統(tǒng)疫苗相比，基因工程疫苗具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)可大量生產(chǎn)，降低生產(chǎn)陳本；2)可以研制多價(jià)疫苗，達(dá)到一針?lè)蓝嗖〉哪康模?)安全性好?？偟脕?lái)說(shuō)，絳蟲(chóng)的保護(hù)性抗原主要有以下4類，即16K、18K、45W和Eg95(如表1所示)，其保護(hù)率多高于95%[16]，這些保護(hù)性抗原主要在絳蟲(chóng)六鉤蚴時(shí)期表達(dá)，能夠誘導(dǎo)宿主很好的免疫保護(hù)力，其中部分疫苗(如細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)疫苗Eg95)已經(jīng)商業(yè)化，所以有效的保護(hù)性抗原研究對(duì)疫苗制備至關(guān)重要。

表1 帶科絳蟲(chóng)常見(jiàn)保護(hù)性抗原
Tab.1 The common protective antigens ofTaeniidaecestode

蟲(chóng)種保護(hù)性抗原羊帶絳蟲(chóng)To16、To18、To45S、To45W等牛帶絳蟲(chóng)TSA45W、TSA18、TSA9等豬帶絳蟲(chóng)TSOL18、TSOL16、TSOL45-1、TSOL45W、KETc1、KETc7、KETc12、AgB、Cc1等多頭帶絳蟲(chóng)Tm45W、TM16、TM18等棘球絳蟲(chóng)Eg95(以及其同源蛋白EgA31、EM95和EgM)、熱休克蛋白70(HSP70)、親肌肉抗原myophilinc、EgG1Y162、Eg14-3-3、Em14-3-3、EmP29、Em-TSP1、Em-TSP3等其他Prx(抗氧化酶系)、TPx(硫氧化還原蛋白過(guò)氧化物酶)、SOD(超氧歧化酶)等

3.1 基因工程重組蛋白疫苗

3.1.1針對(duì)中間宿主的疫苗 近年來(lái)，隨著組學(xué)和大數(shù)據(jù)時(shí)代的到來(lái)，多種棘球絳蟲(chóng)抗原靶分子被挖掘發(fā)現(xiàn)，其中，棘球絳蟲(chóng)Eg95重組蛋白的研究一直是棘球絳蟲(chóng)疫苗研究的熱點(diǎn)，并取得了很大的進(jìn)展，目前，重組蛋白的獲取有多種途徑，如大腸桿菌原核表達(dá)、酵母真核表達(dá)、昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)等，不同的方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，真核表達(dá)系統(tǒng)具有分泌性高效表達(dá)外源蛋白、可對(duì)蛋白進(jìn)行加工修飾(如糖基化、磷酸化和形成二硫鍵等功能)、蛋白更加接近天然狀態(tài)等原核系統(tǒng)所不具備的諸多優(yōu)點(diǎn)[17-18]，在將來(lái)，真核表達(dá)系統(tǒng)將具有原核表達(dá)系統(tǒng)不可比擬的研究和開(kāi)發(fā)潛力。

Eg95是迄今發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)最有效的保護(hù)性抗原，三次免疫接種能誘導(dǎo)綿羊高達(dá)99%的保護(hù)率，免疫保護(hù)時(shí)間能長(zhǎng)達(dá)11個(gè)月[19]；細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(EgTPx)在保護(hù)蟲(chóng)體免受宿主氧化損傷過(guò)程中起著關(guān)鍵的抗氧化作用，對(duì)蟲(chóng)體在人和其他中間宿主體內(nèi)穩(wěn)定寄生、生長(zhǎng)和存活十分必要，王慧等[20]對(duì)EgTPx的編碼基因進(jìn)行原核表達(dá)，通過(guò)免疫小鼠，成功制備了EgTPx抗體(抗體效價(jià)高達(dá)1∶256 000)，為包蟲(chóng)病疫苗和相關(guān)診斷試劑盒的研制奠定了一定的基礎(chǔ)，也對(duì)疫苗研制提供了一個(gè)新的思路。

作者所在的實(shí)驗(yàn)室已獲得畢赤酵母系統(tǒng)高效表達(dá)Eg95重組蛋白國(guó)家技術(shù)發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)枺篊N201210103512.1)，高密度發(fā)酵時(shí)上清中目的蛋白表達(dá)量在2 g/L以上，純度超過(guò)90%，產(chǎn)業(yè)化前景十分誘人。王慧等[21]將細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的TPx基因在畢赤酵母中成功表達(dá)，獲得了具有高效表達(dá)能力的EgTPx基因工程真核表達(dá)菌株，并檢測(cè)到產(chǎn)物具有免疫反應(yīng)性和抗氧化活性。目前，關(guān)于絳蟲(chóng)代謝的抗氧化酶系的報(bào)道較少，但是依據(jù)抗氧化酶系在其他寄生蟲(chóng)上的重要性推測(cè)，Prx或TPx在絳蟲(chóng)的抗氧化作用中起清除過(guò)氧化氫等方面將有開(kāi)拓性的發(fā)現(xiàn)[22]。

桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)最突出的特點(diǎn)就是能夠獲得高水平的蛋白表達(dá)，目的蛋白表達(dá)量最高可達(dá)到細(xì)胞總蛋白的50%[23]，同時(shí)還具有安全性好、能同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因、重組蛋白翻譯后加工完整等特點(diǎn)。于琳琳等[24]成功構(gòu)建獲得了Eg95-(C3d)3重組桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，并且重組蛋白具有良好的免疫原性，同時(shí)證明用該重組蛋白檢測(cè)羊棘球蚴抗體有良好的敏感性和特異性。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)雖然其表達(dá)產(chǎn)量相對(duì)其他真核表達(dá)系統(tǒng)低，但是翻譯后加工更加精細(xì)，表達(dá)的蛋白質(zhì)更加接近天然蛋白質(zhì)，目前已成為多種生物藥物的首選宿主細(xì)胞[25]，王昌源等[26]成功構(gòu)建了多房棘球絳蟲(chóng)elp基因的真核細(xì)胞COS7表達(dá)系統(tǒng)，絳蟲(chóng)蚴病疫苗在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的研究工作相對(duì)較少，技術(shù)尚不成熟，有待進(jìn)一步研究。

3.1.2針對(duì)終末宿主的疫苗 相對(duì)棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)危害來(lái)說(shuō)，棘球蚴對(duì)畜牧發(fā)展和人類健康造成的威脅遠(yuǎn)大于成蟲(chóng)，但是，成蟲(chóng)大量寄生在犬等終末宿主腸道，終末宿主可以向外界排放大量的蟲(chóng)卵，這使得犬等終末宿主成為棘球蚴病的主要傳染源，所以研制針對(duì)棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)病的疫苗對(duì)絳蟲(chóng)蚴病的防治也有重要的意義。EgA31是細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)發(fā)育調(diào)控的重要抗原蛋白之一，與原頭蚴和成蟲(chóng)發(fā)育有密切關(guān)系，是疫病診斷和犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)蚴病的疫苗研制的候選抗原[27]，Petavy等[28]用沙門(mén)氏菌弱毒株成功制備了EgA31和EgTrp口服重組疫苗，對(duì)犬口服免疫，感染26～29 d后剖檢十二指腸發(fā)現(xiàn)，免疫犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的荷蟲(chóng)量減少了70%～80%，并減緩了蟲(chóng)體發(fā)育的速度；EgM家族重組蛋白可以抑制了蟲(chóng)體生長(zhǎng)，尤其是蟲(chóng)卵和胚胎的發(fā)育，由egm4、egm9和egm123三種蛋白編碼基因構(gòu)建的重組疫苗，用原頭節(jié)對(duì)犬攻蟲(chóng)，這三種蛋白可以誘導(dǎo)犬高達(dá)97%～100%的保護(hù)率[29]。

3.2基因工程重組病毒載體活疫苗 重組病毒載體活疫苗是人類免疫接種中應(yīng)用最廣泛的疫苗，在天花、狂犬病、鼠疫等疫病的防控中起了重要作用，重組病毒載體活疫苗具有重組體用量少，抗體不需要純化，載體本身可發(fā)揮佐劑的作用等優(yōu)點(diǎn)，同樣也具有一定的缺點(diǎn)：如感染或者接種過(guò)該病毒的動(dòng)物或者人，對(duì)該載體病毒具有了免疫記憶，會(huì)影響免疫接種效果。

痘病毒常作為重組疫苗病毒(Recombinant vaccinia virus, VACV)載體，在基因工程重組載體病毒活疫苗中有廣泛應(yīng)用。羊口瘡病毒(Orf virus)屬于痘病毒科副痘病毒屬的雙鏈DNA病毒，能夠引起綿羊、山羊和人嚴(yán)重的皮膚病變。Tan等[30]用羊口瘡病毒作為VACA，構(gòu)建Eg95載體病毒活疫苗，目的是獲得雙價(jià)疫苗，結(jié)果產(chǎn)生針對(duì)羊口瘡病毒和針對(duì)Eg95的兩種特異性抗體，并且針對(duì)Eg95抗原的抗體水平與用純化抗原制備的疫苗水平相當(dāng)，此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羊口瘡病毒活載體疫苗有望成為新一代的二聯(lián)重組疫苗。同樣，Dutton等[31]將重VACA作為Eg95蛋白的傳輸載體，將Eg95蛋白的編碼基因插入VACV中，成功構(gòu)建了重組痘病毒疫苗VV399，綿羊和小鼠試驗(yàn)結(jié)果顯示該疫苗可以誘導(dǎo)免疫動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體，并且免疫后的動(dòng)物血清對(duì)六鉤蚴也有一定的殺傷作用。

3.3基因工程重組細(xì)菌載體活疫苗 同重組病毒載體活疫苗一樣，重組細(xì)菌載體活疫苗也有上述類似的優(yōu)缺點(diǎn)。減毒沙門(mén)氏菌載體作為口服活疫苗載體具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是新型疫苗研究的熱點(diǎn)之一[32]，王志昇等[33]成功構(gòu)建了以減毒鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonellatyphimurium)為載體的細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95蛋白的口服活載體疫苗，通過(guò)灌胃BALB/c小鼠四周后抗體水平高達(dá)1∶1 700，并且安全性實(shí)驗(yàn)顯示安全性良好，說(shuō)明該細(xì)菌載體活疫苗具有良好的免疫原性和安全性。

4 核酸疫苗

核酸疫苗又稱DNA疫苗，是通過(guò)宿主接種編碼特定抗原蛋白的核酸，使其在宿主體內(nèi)表達(dá)，刺激宿主對(duì)該抗原蛋白產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。核酸疫苗是繼滅活疫苗、減毒疫苗、基因工程重組亞單位疫苗之后的“第三代”疫苗，目前瘧疾、弓形蟲(chóng)病、血吸蟲(chóng)病、棘球蚴病、囊尾蚴病等寄生蟲(chóng)病的預(yù)防也開(kāi)始應(yīng)用核酸疫苗，并顯示有廣闊的應(yīng)用前景[34]。

林仁勇等[35]用pcDNA3-Eg95核酸疫苗免疫BALB/c小鼠，探討其誘導(dǎo)小鼠的體液和細(xì)胞免疫效果，結(jié)果顯示此核酸疫苗能夠在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生明顯的免疫反應(yīng)。丁劍冰等[36]用細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的Eg95核酸疫苗與Eg95重組亞單位疫苗做了比較，發(fā)現(xiàn)用前者免疫接種的小鼠產(chǎn)生IgG抗體滴度水平(1∶3 200)低于后者(1∶25 600)，但I(xiàn)gG2a亞類抗體水平卻明顯高于重組蛋白免疫實(shí)驗(yàn)組，這證明了細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95重組抗原和核酸疫苗均可誘發(fā)小鼠產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。楊嬌馥等[37]將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pcDNA3·1-eg95轉(zhuǎn)染綿羊胎兒成纖維細(xì)胞，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)eg95基因在綿羊胎兒成纖維細(xì)胞中得到了轉(zhuǎn)錄，這為利用pcDNA3·1-eg95制備實(shí)用的棘球蚴病核酸疫苗提供了科學(xué)依據(jù)。

總之，核酸疫苗與普通疫苗相比具有更加快速、方便、特異性高、無(wú)危害性等優(yōu)點(diǎn)，除此之外，核酸疫苗因其經(jīng)濟(jì)成本較低，易與運(yùn)輸和儲(chǔ)存，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生全面的免疫反應(yīng)，有制備多價(jià)苗的潛力(對(duì)不同亞型的病原體有交叉防御作用)，并且核酸疫苗可以在免疫動(dòng)物體內(nèi)直接表達(dá)，具有很好的應(yīng)用前景[38]，但是絳蟲(chóng)蚴病核酸疫苗研究較少，技術(shù)路線尚不成熟，安全性評(píng)估還存在很多的問(wèn)題[39]，還需要進(jìn)一步的研究。

5 轉(zhuǎn)基因植物疫苗

轉(zhuǎn)基因植物疫苗具有易運(yùn)輸、可大規(guī)模生產(chǎn)、成本低廉、易獲得多價(jià)苗、使用方便(直接食用就可以較強(qiáng)的體液和黏膜免疫反應(yīng))等優(yōu)點(diǎn)，苜蓿是草食性動(dòng)物主要的飼料來(lái)源，并且蛋白含量高，營(yíng)養(yǎng)豐富，所以常被選作是轉(zhuǎn)基因植物疫苗的對(duì)象。周輝等[40]對(duì)轉(zhuǎn)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗載體進(jìn)行了成功的構(gòu)建，葉艷菊等[41-42]在其基礎(chǔ)上研究了該疫苗的保護(hù)力及其免疫機(jī)制，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因苜蓿葉的蛋白提取液經(jīng)口服和滴鼻接種都能誘導(dǎo)免疫鼠產(chǎn)生一定的保護(hù)力，并且Th1型免疫應(yīng)答在免疫保護(hù)機(jī)制中起重要作用。

6 多價(jià)苗和聯(lián)苗

多價(jià)疫苗和聯(lián)苗對(duì)疫病的防控實(shí)施有重要的意義，多價(jià)苗和聯(lián)苗可以避免多次免疫，降低基層工作壓力，減少人力、物力的消耗，減少被接種動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)次數(shù)，到達(dá)一針?lè)蓝嗖〉哪康??；蚬こ桃呙绾秃怂嵋呙缍季哂卸鄡r(jià)苗和聯(lián)苗研制的潛力，所以有很大的發(fā)展空間，如上文描述的基因工程重組羊口瘡病毒活疫苗，就是一種對(duì)羊口瘡病毒和細(xì)粒棘球蚴感染同時(shí)有免疫預(yù)防作用的二聯(lián)苗[30]；細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)種內(nèi)變異現(xiàn)象非常突出，G1(綿羊株)和G6(駱駝株，現(xiàn)命名為加拿大棘球絳蟲(chóng)，E.canadensis)基因型在家畜中分布最為廣泛，pET30a-EgA31-Eg95重組質(zhì)粒的成功構(gòu)建[43]，對(duì)棘球蚴病多價(jià)疫苗的開(kāi)發(fā)有重要指導(dǎo)作用，如可以研制棘球蚴病Eg95-Ec95基因工程重組亞單位雙價(jià)疫苗；pTc-sp7核酸疫苗就是一種對(duì)肥頭絳蟲(chóng)和豬帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)及其六鉤蚴有高保護(hù)率的聯(lián)苗[44]?？偟脕?lái)說(shuō)，絳蟲(chóng)蚴病種類繁多，危害嚴(yán)重，研制有效的聯(lián)苗和多價(jià)苗是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。

7 其 他

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和研究的不斷深入，絳蟲(chóng)蚴病疫苗除了以上所述外，新型疫苗也會(huì)層出不窮：1)重組噬菌體疫苗作為新型疫苗，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高的免疫保護(hù)力，并且生產(chǎn)成本低，具有普通疫苗沒(méi)有的優(yōu)點(diǎn)，是理想的新型疫苗之一，已有試驗(yàn)證明噬菌體可以誘導(dǎo)豬的體液免疫和細(xì)胞免疫[45]；2)微膠囊可控緩釋疫苗使用微膠囊技術(shù)將特定的抗原包裹后制成的疫苗，緩沖胃酸等消化液的消化，絳蟲(chóng)成蟲(chóng)又多寄生在腸道，這對(duì)絳蟲(chóng)蚴病(包括棘球蚴病)疫苗的研制有一定的指導(dǎo)作用；3)樹(shù)突狀疫苗在腫瘤免疫中取得了一定的成功，多房棘球蚴病生長(zhǎng)為浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，與腫瘤相似，有“蟲(chóng)癌”之稱，相信不久的將來(lái)樹(shù)突狀疫苗也會(huì)在包括棘球蚴病在內(nèi)的絳蟲(chóng)蚴病中得到應(yīng)用。

8 小結(jié)與展望

棘球蚴病是一類嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病。隨著對(duì)抗寄生蟲(chóng)藥物耐藥性和藥物殘留等副作用的逐漸關(guān)注和重視，抗寄生蟲(chóng)疫苗被廣泛接受和研發(fā)，疫苗作為有效防治疫病的手段之一，具有很好的應(yīng)用前景。雖然絳蟲(chóng)(蚴)病(包括棘球蚴病)疫苗已有組織細(xì)胞疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、基因工程疫苗、轉(zhuǎn)基因苜蓿疫苗、以及重組雙歧桿菌疫苗等多種類型疫苗的研究，對(duì)絳蟲(chóng)蚴病的防控、畜牧業(yè)發(fā)展、食品安全以及人類身體健康等有重要意義，但是更加有效、實(shí)用、安全的絳蟲(chóng)(蚴)病疫苗的研制還有很長(zhǎng)的路要走。

目前，棘球蚴病疫苗還存在眾多問(wèn)題。一、疫苗研制中宿主動(dòng)物數(shù)量是否符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的可靠性有重要作用，許多已發(fā)表的試驗(yàn)結(jié)果不能有效、明確的評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的優(yōu)劣[46]；二、目前絳蟲(chóng)(蚴)病疫苗針對(duì)性單一，大多數(shù)研究對(duì)象是絳蟲(chóng)六鉤蚴時(shí)期的保護(hù)性抗原(如16K、18K、45W和Eg95四類抗原)，而對(duì)參與絳蟲(chóng)代謝的抗氧化酶系、水解酶等研究較少，并且，目前絳蟲(chóng)(蚴)病疫苗的研制多為只針對(duì)某一種病，所以研制針對(duì)寄生蟲(chóng)多個(gè)階段的多價(jià)疫苗和同時(shí)可以預(yù)防多種寄生蟲(chóng)的多聯(lián)疫苗，都是值得思考的問(wèn)題；三、表達(dá)系統(tǒng)的問(wèn)題，真核和原核表達(dá)都存在各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)[17, 47]，所以說(shuō)，如何選擇有效的表達(dá)系統(tǒng)，是實(shí)驗(yàn)前必須考慮的問(wèn)題，表達(dá)量高、成本低、蛋白更接近天然構(gòu)象的表達(dá)系統(tǒng)是亟待解決的問(wèn)題之一；四、目前棘球蚴病疫苗僅限于獸用疫苗的研制，還沒(méi)有人用疫苗被研制成功，所以在未來(lái)，研制有效的人用棘球蚴病疫苗，在高危人群中使用，對(duì)廣大牧民以及從事相關(guān)工作人員的身體健康具有重要的公共衛(wèi)生意義。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，棘球蚴病疫苗的研究有了更多的思路和方法。首先，通過(guò)人工化學(xué)合成技術(shù)制備疫苗，可以有效解決一些病原體不能在體外培養(yǎng)獲得足夠抗原的困境，在未來(lái)疫苗領(lǐng)域有很大的應(yīng)用空間；其次，隨著測(cè)序和高通量篩選技術(shù)的發(fā)展，為靶抗原的篩選提供了有力的技術(shù)支撐，以及長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)、微小核糖核酸(MicroRNAs, miRNAs)等非編碼序列的廣泛研究為疫病疫苗的研制提供了新的思路[48]；而且，高效基因編輯技術(shù)(CRISPR/Cas9)的出現(xiàn)和廣泛應(yīng)用，一方面為新基因功能研究和疫苗候選分子篩選開(kāi)啟了新的道路，另一方面，通過(guò)基因編輯改良的家畜新品種和動(dòng)物模型研究成為可能(已有抗朊病毒的基因缺陷牛模型[49])，這些對(duì)疫病防控、畜牧業(yè)發(fā)展、公共衛(wèi)生等都有重要的意義。

利益沖突：無(wú)