中藥炮制是我國中藥學的精髓,合理的炮制方法能夠充分發(fā)揮藥效,降低毒副作用[1],清代《修事指南》記載:“炮制不明,藥性不確,則湯方無準,而病癥不驗也?!边@說明中藥藥效與炮制的密切關系,炮制能改變中藥四氣、五味、歸經、升降浮沉、毒性等性能,改善中藥的臨床治療效果,實現(xiàn)臨床療效的多樣性[2-3]。當歸為傘形科植物當歸(Angelica Sinensis Coliver)的干燥根,始載于《神農本草經》,是一味具有補血和血、調經止痛、潤腸通便之功效的臨床常用中藥,臨床中使用不同的炮制品,產生不同的效果,酒制升提、炭制止血、土炒收澀[4],本研究對當歸采用酒炙、土炒、炭化炮制方法,觀察不同炮制方法對當歸有效成分含量的影響,為今后的炮制工作提供依據(jù),報道如下。
Agilent1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)、CP225D型電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]、UV-1800型紫外-可見分光光度計(日本島津公司)、MH-2000調溫型電熱套(北京科偉永興儀器有限公司)、SK-1快速混勻器(上海邁皋科學儀器有限公司)、Milli-Q超純水系統(tǒng)(美國Millipore公司)、RE-5203電熱恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)。
當歸(批號:130912)購自安徽豐原銅陵中藥飲片有限公司,按2015年版中國藥典項下要求檢驗均符合標準;甲醇(色譜純,Tedia),其他所用試劑均為分析純,超純水(自制)。
生當歸:稱取當歸藥材2.5 kg,除去雜質,清洗干凈,潤透,切薄片,50℃恒溫干燥。
酒炙當歸:取生當歸500 g,加入黃酒80 g,攪拌均勻,悶透,待酒被吸收后,放置在炒制容器內,用文火將其炒至深黃色,放涼備用。
土炒當歸:細凈黃土150 g,中火炒至滑利狀,加入生當歸500 g,微炒至當歸片掛土,篩去余土,放涼,備用。
當歸炭:生當歸片500 g,置于炒至容器內中火炒至表面微黑存性,噴淋清水少許淬火,取出晾干。
揮發(fā)油含量測定:分別取上述炮制所得當歸飲片200 g,加入1 000 mL的蒸餾水混合后,潤透30 min,連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管,水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)性成分5 h,放置2 h,讀取揮發(fā)油體積,計算各炮制品中揮發(fā)油的含量。
阿魏酸含量測定:精密稱定阿魏酸對照品,放置在10 mL棕色量瓶中,加入甲醇溶解后,采用流動相定容至刻度,獲得100 mg對照品溶液。生當歸、酒炙當歸、土炒當歸、當歸炭研細末過三號篩,精密稱取各0.2 g,加入70%甲醇20 mL,稱量后加熱回流30 min,冷卻后稱定質量,用70%甲醇補足減失的質量,搖勻,靜置,取上清液用0.25 μm微孔濾膜濾過,取濾液,進樣檢測,獲得整體質量。
總鞣質的含量測定:采用《中國藥典》2010年版一部附錄XB項下磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定總鞣質含量。
對生當歸、酒炙當歸、土炒當歸、當歸炭中揮發(fā)油、阿魏酸、總鞣質含量進行測定。
生當歸進過不同炮制方法炮制后,放涼稱重,計算各炮制品的質量變化率,水分測定按甲苯法測定,不同炮制品中含水量均<10%,符合2010年版《中國藥典》要求。當歸不同炮制品質量變化率及含水量。結果見表1。
生當歸進過不同炮制方法炮制后,揮發(fā)油含量以酒炙法中最高,炭化者最低;阿魏酸穩(wěn)定性較差,經加熱后會因分解而降低,另外酒炙法最易溶出,因此酒炙法中阿魏酸含量最高;鞣質含量以炭化炮制法中最含量最高。結果見表2。
當歸,也稱乾歸、山蘄、白蘄,為傘形科植物當歸的干燥根[6],始見于《神農本草經》被列為祛邪補虛的中品,味甘、溫、歸心、肝、脾經,有活血補血、調經止痛、去瘀生新、潤腸通便等功效,是治療婦科疾病的常用藥,素有“十藥九歸”之說[7]。中藥炮制能夠改變藥物性能、引藥歸經,使藥物對機體的作用趨向性發(fā)生改變[8],達到靶向給藥定點的效果,充分地發(fā)揮藥效,減少藥材的浪費,并且可以最大限度地降低中藥的毒副作用,以更好地滿足臨床治療需要[9]。當歸最早的炮制方法見于南齊時代的炒制法,南北朝時期出現(xiàn)了酒浸制法,唐代出現(xiàn)了酒洗,宋代的炮制有熬、酒炙、醋浸等,金元時期首創(chuàng)了酒蒸制法,明代增加了煨煅、制炭等法,到了清代出現(xiàn)了土炒、熬膏及添加黑豆汁、童便等輔料使炮制方法更為豐富[10-11],經歷代的發(fā)展,當歸的炮制方法已達20余種,目前臨床常用的有生當歸、酒當歸、土當歸、當歸炭等。當歸炮制的傳統(tǒng)理論認為生當歸甘溫,取其潤性,補血又潤腸;酒當歸辛溫,取其散性,以增強活活血散瘀之功;土炒當歸苦溫,取其澀性,健脾和血、補血而不滑腸;當歸炭則緩其辛烈之性而專于止血[12]。當歸含有揮發(fā)油、阿魏酸、鞣質、多糖、微量元素、黃酮等多種成分,藥理作用廣泛主要包括造血、抑制血小板聚集、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、清除自由基、增強免疫及保肝等作用[13]。
表1 當歸炮制品質量變化率及含水量比較
表2 當歸炮制品有效成分含量比較
本文結果顯示,揮發(fā)油和阿魏酸在生當歸中含量最高,經不同方式炮制后,揮發(fā)油和阿魏酸含量均有不同程度的降低,含量水平順序為:生當歸>酒當歸>土當歸>當歸炭,這可能是由于炮制過程中揮發(fā)油因高溫揮發(fā)而散失,致使含量降低,阿魏酸穩(wěn)定性較差,炮制處理后會因分解而降低,而總鞣質的含量則隨著炮制溫度的升高而增加,炭化炮制后的鞣質成分接近生當歸的2倍,另外有文獻報道經過酒炙、土炒、炭化炮制后銅、鐵、鋅等多種微量元素的含量也會增加,當歸炮制后不僅體現(xiàn)在有效成分含量的變化上,還產生了一些醛類和酚類物質導致化學組成的改變。