樸艷， 于暢， 金英今， 李熙峰*

( 1.龍井市環(huán)境監(jiān)測(cè)站， 吉林 龍井 133400; 2.延邊大學(xué) 理學(xué)院， 吉林 延吉 133002 )

尾葉香茶菜(Isodonexcisa(Maxin.)Hara)為唇形科香茶菜屬植物，又名龜葉草、野蘇子，性涼味甘，為多年生草本植物，在我國(guó)的吉林、遼寧及河南等地廣泛分布[1].尾葉香茶菜全草入藥，具有清熱解毒、健胃、活血止痛等功效，民間常用于抗菌、消炎和止痛[2].近年來(lái)，隨著對(duì)尾葉香茶菜的藥理作用及化學(xué)成分研究的不斷深入，其在臨床的應(yīng)用愈來(lái)愈廣泛[3-4].目前，有關(guān)尾葉香茶菜對(duì)酪氨酸酶的抑制活性尚未見(jiàn)報(bào)道.為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用尾葉香茶菜的藥用資源，本文對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)尾葉香茶菜的化學(xué)成分及其活性進(jìn)行研究.

1 儀器與材料

1200RRLC -6410B型高效液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC -MC)，Agilent； AV-500型和AV-300型核磁共振儀，Bruker； LC -6AD型高效液相色譜儀(HPLC)，Shimadzu； 手提式紫外檢測(cè)器(254 nm)，上海顧村電光儀器廠； 酶標(biāo)儀，Molecular Devices； Prestige -21型紅外光譜儀(IR)，Shimadzu； U-3010型紫外光譜儀(UV)，Shimadzu； 維生素C，Sigma -Aldrich； 1,1-二苯基苦?；诫?DPPH)，Sigma -Aldrich； Na2HPO4和NaH2PO4，Amresco； 柱色譜用硅膠(74～148 μm)，青島海洋化工廠； 反相色譜硅膠(ODS -A)，YMC*GEL； 色譜柱(ODS -AM,250 mm×10 mm,5 μm)，YMC -Pack； 薄層色譜板(TLC，Silica gel 60 F254)，MERCK； 96孔板，海門市生物技術(shù)研究所； 甲醇(色譜純)，F(xiàn)isher； 甲醇、氯仿、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷均為分析純； 尾葉香茶菜采自吉林省延吉市市郊.

2 提取分離

將干燥的尾葉香茶菜的葉子(1.5 kg)用甲醇浸泡后提取3次，每次超聲30 min；靜置過(guò)夜，過(guò)濾，將3次的濾液合并后減壓濃縮得粗提物I (236.8 g).將粗提物用少量蒸餾水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行液-液分配，得64.8 g石油醚萃取物IP、40.6 g乙酸乙酯萃取物IE 和27.8 g正丁醇萃取物IB .

將萃取物IE過(guò)ODS -AM層析柱，依次用體積分?jǐn)?shù)分別為90%、95%、100%的甲醇和100%的丙酮洗脫，得4個(gè)組分(IE1 — IE4).根據(jù)TLC分析結(jié)果，選取組分IE1過(guò)硅膠層析柱，并用二氯甲烷-丙酮為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫;經(jīng)TLC分析，合并相似組分，得8個(gè)組分(IE1a — IE1h).根據(jù)TLC分析結(jié)果和活性篩選結(jié)果，利用ODS -A柱色譜、硅膠柱色譜以及HPLC等方法將組分IE1e進(jìn)行分離純化，得到化合物1 (8.7 mg)、2 (3.9 mg)、4 (13.1 mg)、5 (2.9 mg).采用相同的方法從組分IE1f中得到化合物3 (4.1 mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末; EI-MSm/z488 [M]+; UV(MeOH)λmax(logε) 268(4.68), 272(4.66) nm; IR(KBr)νmax3 439, 2 932, 1 688, 1 641, 1 454, 1 387, 1 036 cm-1;1H NMR(CD3OD,300 MHz)δ5.30(1H,br s,H-12), 3.93(1H,d,J=11.2 Hz,H-3), 2.57(1H,m,H-2), 2.50(1H,s,H-18), 1.35(3H,s,29-CH3), 1.20(3H,s,27-CH3)， 0.99(6H,s,23,26-CH3), 0.93(3H,d,J=6.3 Hz,30-CH3), 0.87(3H,s,24-CH3), 0.79(3H,s,25-CH3);13C NMR(CD3OD,75 MHz)δ182.5(s,C -28), 140.2(s,C -13), 129.5(d,C -12), 80.2(d,C -2), 73.7(s,C -19), 67.3(d,C -3), 55.2(d,C -18), 49.4(d,C -5), 48.3(d,C -9), 43.2(d,C -20), 42.9(s,C -14), 42.6(t,C -1), 41.4(s,C -4), 39.6(s,C -10), 39.5(s,C -8), 39.2(t,C -22), 34.2(t,C -7), 29.7(t,C -15), 29.4(q,C -23), 27.4(t,C -11), 27.2(q,C -27), 26.7(t,C -16), 25.0(q,C -29), 24.8(t,C -6), 22.6(q,C -24), 19.4(t,C -21), 17.7(q,C -25), 16.9(q,C -30), 16.8(q,C -26).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為野鴉椿酸，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示.

化合物2：白色粉末;(-)-ESI-MSm/z373[M-H]-; UV(MeOH)λmax(logε) 218(4.63), 229(4.57), 251(4.99), 280(4.80) nm; IR(KBr)νmax3 346, 1 449, 1 028 cm-1;1H NMR(CD3OD,500 MHz)δ7.05(2H,t,J=2.4 Hz,H-2′,2″), 6.86(2H,t,J=8.1 Hz,H-6′,6″), 6.78(2H,dd,J=8.1,2.4 Hz,H-5′,5″), 4.84(1H,s,H-2), 4.68(1H,s,H-6), 4.46(1H,t,J=2.4 Hz,H-4a), 4.04(1H,d,J=9.2 Hz,H-8a), 3.87(3H,s,3′-OCH3), 3.86(3H,s,3″-OCH3), 3.85(1H,s,H-8b), 3.76(1H,dd,J=9.1,6.2 Hz,H-4b), 3.04(1H,m,H-5);13C NMR(CD3OD,125 MHz) δ 149.3(s,C -3″), 148.9(s,C -3′), 147.7(s,C -4″), 147.6(s,C -4′), 133.8(s,C -1′), 129.2(s,C -1″), 121.7(d,C -6″), 120.7(d,C -6′), 116.2(d,C -5″), 115.8(d,C -5′), 112.9(d,C -2″), 111.5(d,C -2′), 92.9(s,C -1), 89.5(d,C -6), 88.0(d,C -2), 76.2(t,C -8), 72.2(t,C -4), 62.6(d,C -5), 56.5(q,C -OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為1-羥基松脂素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示.

化合物3： 白色粉末; ESI-MSm/z3 350[M+H]+; UV(MeOH)λmax(logε) 235(5.00) nm; IR(KBr)νmax3 366, 2 928, 1 728, 1 647, 1 456, 1 398, 1 020 cm-1;1H NMR(CDCl3,500 MHz)δ6.19(1H,s,H-17), 5.43(1H,s,H-17), 4.88(1H,br s,H-14), 4.36(1H,dd,J=12.2,4.1 Hz,H-7), 3.21(1H,dd,J=11.6,4.8 Hz,H-3), 3.09(1H,br s,H-13), 1.08(3H,s,20-CH3), 1.05(3H,s,18-CH3), 0.84(3H,s,19-CH3);13C NMR(CDCl3,125 MHz)δ208.1(s,C -15), 147.7(s,C -16), 118.3(t,C -17), 78.6(d,C -3), 75.4(d,C -14), 75.1(d,C -7), 61.9(s,C -8), 54.2(d,C -9), 52.7(d,C -5), 46.2(d,C -13), 39.8(s,C -4), 38.9(s,C -10), 38.0(t,C -1), 31.2(t,C -12), 28.6(q,C -18), 27.9(t,C -6), 27.4(t,C -2), 18.3(q,C -20), 17.8(t,C -11), 15.9(q,C -19).以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[7]的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為川藏香茶菜甲素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示.

化合物4： 白色粉末; (-)-ESI-MSm/z367[M+Cl]-; UV(MeOH)λmax(logε) 230(4.04) nm; IR(KBr)νmax3 325, 2 938, 1 726, 1 703, 1 649, 1 458, 1 387, 1 256, 1 092 cm-1;1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ6.19(1H,s,H-17a), 5.44(1H,s,H-17b), 5.30(1H,br s,—OH), 4.85(1H,s,H-14a), 4.38(1H,br d,J=11.6 Hz,H-7b), 3.11(1H,br s,H-13a), 1.15(3H,s,20-CH3), 1.09(6H,s,18,19-CH3);13C NMR(CDCl3,75 MHz) δ 216.8(s,C -3), 207.7(s,C -15), 147.4(s,C -16), 118.6(t,C -17), 75.0(d,C -14), 74.4(d,C -7), 61.8(s,C -8), 52.9(d,C -9), 51.8(d,C -5), 46.9(s,C -4), 46.1(d,C -13), 39.0(s,C -10), 38.3(t,C -1), 33.8(t,C -2), 30.9(t,C -12), 29.2(t,C -6), 27.9(q,C -18), 21.1(q,C -19), 18.5(q,C -20), 18.3(t,C -11).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為蘭萼香茶菜甲素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示.

化合物5： 白色粉末; ESI-MSm/z195.4 [M+H]+, 217.3 [M+Na]+; UV(MeOH)λmax(logε) 216(3.85), 243(3.43), 328(3.99) nm；1H NMR(CD3OD,300 MHz)δ7.54(1H,d,J=15.9 Hz,H-3), 7.03(1H,d,J=1.9 Hz,H-2′), 6.94(1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′), 6.77(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′), 6.26(1H,d,J=15.9 Hz,H-2), 3.76(3H,s,—OCH3);13C NMR(CD3OD,75 MHz) δ 169.9(s,C -1), 149.7(s,C -4′), 147.1(d,C -3), 147.0(s,C -3′), 127.8(s,C -1′), 123.1(d,C -6′), 116.6(d,C -5′), 115.3(d,C -2), 115.0(d,C -2′), 52.1(q,—OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為咖啡酸甲酯，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示.

圖1 5種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)

4 活性實(shí)驗(yàn)

以酪氨酸為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)5個(gè)化合物分別進(jìn)行酪氨酸酶抑制活性實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明，化合物3和化合物5對(duì)酪氨酸酶的抑制活性相對(duì)較好，其抑制率分別為51.5%和55.0%.

5 結(jié)論

本文在長(zhǎng)白山區(qū)尾葉香茶菜的干燥葉子中，經(jīng)提取分離得到了5種化合物:野鴉椿酸(1)、1-羥基松脂素(2)、川藏香茶菜甲素(3)、蘭萼香茶菜甲素(4)、咖啡酸甲酯(5).其中化合物3和5對(duì)酪氨酸酶具有一定的抑制作用，且化合物5為首次在香茶菜屬植物中分離得到.本研究結(jié)果可為開(kāi)發(fā)和利用長(zhǎng)白山區(qū)尾葉香茶菜的藥用資源提供參考.