孟祥文

【摘要】 本文依據(jù)JJG 861-2007《酶標分析儀》檢定規(guī)程和JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》，分析了可能影響酶標分析儀吸光度示值誤差測量結(jié)果的各不確定度分量的主要來源，給出了不確定度的評定過程。

【關(guān)鍵詞】 酶標分析儀;吸光度;不確定度

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2019.01.007

Abstract： According to the verification regulation of JJG 861-2007 ELISA Analytical Instruments and JJF 1059.1-2012 Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement，the main sources of uncertainty which may affect the absorbance measurement result of the ELISA analytical iInstruments were analyzed，and the evaluation process of uncertainty was given in this paper.

Key words： ELISA analytical instruments;absorbance;uncertainty

1 測量過程

在酶標分析儀檢定規(guī)程規(guī)定條件下，儀器開機預熱后，依次設置儀器波長為405 nm、450 nm、492 nm、620 nm，然后將吸光度標稱值為1.0 A的光譜中性濾光片平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，連續(xù)測量3次，得到吸光度示值平均值，該平均值與相應波長下的吸光度標準值之差，即為吸光度的示值誤差。

2 數(shù)學模型

3 各輸入量的標準不確定度評定

3.1 輸入量[A]的標準不確定度[u（A）]評定

輸入量[A]的不確定度主要來源于酶標分析儀的示值不穩(wěn)定性，可以在重復性試驗條件下，通過連續(xù)測量獲得，采用A類方法評定。也可以根據(jù)檢定規(guī)程中規(guī)定的示值穩(wěn)定性要求，采用B類方法評定。現(xiàn)在分別用上述兩種方法進行不確定度分析。

1）以上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的型號為ST-360的酶標分析儀為例，設置儀器波長為492 nm，選擇吸光度標稱值1.0 A的光譜中性濾光片，連續(xù)測量3次，得到數(shù)據(jù)如下：1.033、1.031、1.032，采用極差法計算實驗標準差。測量次數(shù)[n=3]時，極差系數(shù)C為1.69，計算實驗標準差為：

另外任意選擇3臺相同類型的酶標分析儀，每臺分別在波長405 nm、450 nm、492 nm、620 nm條件下，測定吸光度標稱值為1.0 A的光譜中性濾光片，連續(xù)測定3次，共得到12組測量列，每組測量列分別按上述方法計算單次實驗標準差，所得結(jié)果見表1。

合并樣本標準偏差為：

實際測量時是在重復性條件下，連續(xù)測量3次，以3次測得的算術(shù)平均值為測量結(jié)果，則測量重復性引入的標準不確定度分量為：

自由度為：

2）JJG 861-2007《酶標分析儀》檢定規(guī)程中所規(guī)定的示值穩(wěn)定性應不大于±0.005 A，假設在該范圍內(nèi)均勻分布，則由示值穩(wěn)定性引入的標準不確定度為：

3.2 輸入量[As]的標準不確定度[u（As）]評定

輸入量[As]的標準不確定度主要由光譜中性濾光片的定值不確定度及其年變化量所引入，屬于B類標準不確定度。

3.2.1 光譜中性濾光片的定值不確定度[u（As1）]

根據(jù)光譜中性濾光片校準證書給出的吸光度定值的擴展不確定度為0.011 A，包含因子[k=2]，則標準不確定度為：

3.2.2 光譜中性濾光片的年變化量[引入的不確定度][u（As2）]

根據(jù)相關(guān)資料，光譜中性濾光片的年變化量為0.004 A，取均勻分布，則標準不確定度為：

3.2.3 輸入量As的標準不確定度[u（As）]

由于以上二項分量相互獨立不相關(guān)，將其合成，得到輸入量[As]的標準不確定度為：

4 合成標準不確定度

輸入量[A]與輸入量[As]相互獨立不相關(guān)，故合成標準不確定度為：

5 擴展不確定度

取包含因子[k=2]，則擴展不確定度為：

6 測量不確定度報告

酶標分析儀吸光度示值誤差測量結(jié)果的擴展不確定度為：

7 結(jié)語

綜上所述，在酶標分析儀吸光度示值誤差檢定時，其測量結(jié)果的不確定度主要來源于儀器示值穩(wěn)定性、標準器定值不確定度以及標準器年變化量，其中標準器定值不確定度的影響最大。

【參考文獻】

[1] 測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1-2012[S].

[2] 倪育才.實用測量不確定度評定（第5版）[M].北京：中國質(zhì)檢出版社，2016.

[3] 董艷華.酶標分析儀示值誤差測量結(jié)果的不確定度評定[J].計量與測試技術(shù)，2012（1）：40+43.