青杰超，林子然，2，莫開林

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)風(fēng)景園林學(xué)院,四川 成都 611130;2.四川師范大學(xué)附屬中學(xué),四川 成都 611100；3.四川省林業(yè)科學(xué)研究院，四川 成都 610081)

金銀花又名忍冬，為忍冬科忍冬屬植物，是常用的一種中藥材。金銀花初開時(shí)為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因而得名金銀花。金銀花的主要有效成分包括有機(jī)酸類、黃酮類化合物、環(huán)烯醚萜苷類、三萜皂苷類、揮發(fā)油、棕櫚酸乙酯和其他類成分[1-2]。金銀花具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)的特點(diǎn)[3]，可有效降低綠膿桿菌感染小鼠的死亡率[4]。金銀花還具有抗內(nèi)毒素、抗炎解熱、抗病毒、抗氧化、增強(qiáng)免疫、利膽保肝的作用[2，5]。蒲公英為菊科蒲公英屬多年生草本植物，富含黃酮類，多糖、多酚、植物甾醇類、色素類、三萜類、揮發(fā)油類等活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌消炎、抵制腫瘤、提高免疫力、保肝、促進(jìn)胃腸動(dòng)力、調(diào)節(jié)腸道菌群等功能特性[6][7]。金銀花和蒲公英都是傳統(tǒng)的中藥材，也是常用的藥食兩用植物。兩種植物除用于臨床治療之外，還具有明顯的提高免疫力、抗氧化、美容養(yǎng)顏等保健作用，可應(yīng)用于食品、美容、保健等產(chǎn)品。植物抑菌作用在生鮮食品保鮮中有著很好的應(yīng)用前景[6]。添加蒲公英的飲料可不額外添加防腐劑，用于生產(chǎn)新型保健飲料更加健康營(yíng)養(yǎng)[8]。

對(duì)于中藥材抗菌、抗氧化、防曬等保健功能的研究，對(duì)于傳統(tǒng)中藥材的綜合開發(fā)利用具有重要意義。對(duì)藥食兩用中藥材保健功能的驗(yàn)證，可促進(jìn)藥食兩用中藥材在食品、美容、保健行業(yè)中的應(yīng)用，提高中藥材的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，促進(jìn)中藥材的發(fā)展。本文對(duì)金銀花和蒲公英兩種中藥材的抗菌、抗氧化、抗輻射效果進(jìn)行了試驗(yàn)分析，以期為促進(jìn)金銀花和蒲公英的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

金銀花，蒲公英均購自藥店?；瘜W(xué)試劑均為分析純。金銀花和蒲公英材料購回后用植物材料粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎后用于化學(xué)成分的提取試驗(yàn)。供試菌種分別為霉菌類和細(xì)菌類兩大類，其中霉菌分為黑曲霉、黃曲霉；細(xì)菌分為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 提取物的制備

稱取粉碎后的紅苞鳳梨葉10 g，按料液比1∶25 加入75%乙醇溶液于具塞三角瓶中，在70 ℃恒溫水浴鍋中震蕩浸提1 h，然后 4 000 r·min-1離心5 min，用8層紗布過濾，取清液用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至膏狀，再用蒸餾水溶解定容至10 mL，其濃度為 1 000 g·L-1(指1 mL 提取液相當(dāng)于1 g 紅苞鳳梨葉干樣品)，最后置于4 ℃冰箱中保存待用。

1.2.2 抗菌試驗(yàn)

1.2.2.1 菌種活化及菌懸液的制備

將4 種供試菌種接入相應(yīng)的搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，細(xì)菌活化18 h，霉菌活化40 h，然后再將活化后的菌種轉(zhuǎn)接到相對(duì)應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。用接種環(huán)分別刮取一定量已活化好的菌種于9 mL無菌生理鹽水中，充分搖勻，再用10 倍稀釋法將菌懸液稀釋至含菌量為107 CFU·mL-1的實(shí)驗(yàn)用菌懸液。

1.2.2.2 提取物抑菌活性的測(cè)定

將15 mL 經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，靜置冷卻，待凝后加入0.1 mL 菌懸液于平板上，用無菌玻璃涂布棒將菌液涂布均勻，制成帶菌平板。然后用無菌打孔器打出直徑為6 mm 的孔，在每個(gè)孔加入80 μL 紅苞鳳梨葉乙醇提取液，以無菌蒸餾水做空白對(duì)照，每孔平行1 次。細(xì)菌于36 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，霉菌于27 ℃培養(yǎng)48 h。觀察菌落生長(zhǎng)情況，采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑。

1.2.3 抗氧化活性試驗(yàn)

抗氧化活性珠測(cè)定采用DPPH法[9]，將蒲公英與金銀花提取物配制成1 000 μg·mL-1的乙醇溶液用于測(cè)定；配置100 ug·mL-1的Vc溶液作為對(duì)照。在25 mg·ml-1DPPH甲醇溶液中加入0.1 ml樣品溶液，混勻后置于暗處反應(yīng)0.5 h后，在515 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光值A(chǔ)?？瞻子眉状即鏄悠窚y(cè)得吸光值A(chǔ)0。重復(fù)3次。清除率(%)=[(A0-A)/ A0]×100。

1.2.4 防曬活性試驗(yàn)

分別配制100 μg·mL-1的蒲公英、金銀花乙醇提取物和各萃取物、40 μg·mL-1抗壞血栓溶液，利用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定提取液在200～400 nm范圍的紫外吸收值，分別計(jì)算各種溶液在UVC(200 nm～280 nm)區(qū)的；UVB(280 nm～320 nm)區(qū)的；UVA(320 nm～400 nm)區(qū)的平均吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 抑菌活性分析

將金銀花和蒲公英提取物添加到培養(yǎng)基中對(duì)6種待試菌種進(jìn)行抑菌活性測(cè)試，抑菌效果如表1：金銀花及蒲公英對(duì)不同菌種的抑菌效果對(duì)照表所示。

表1金銀花、蒲公英對(duì)不同菌種的抑菌效果數(shù)據(jù)

菌種金銀花提取液抑菌圈直徑d(mm)蒲公英提取液抑菌圈直徑d(mm)黑曲霉11.1019.70黃曲霉7.736.45大腸桿菌8.0811.85金黃色葡萄球菌7.0014.85沙門氏菌13.0019.25銅綠假單胞菌6.406.15無菌蒸餾水6.006.00

由表1可知，金銀花提取液對(duì)沙門氏菌的抗菌作用最強(qiáng)；對(duì)銅綠假單胞菌、黃曲霉和金黃色葡萄球菌的抗菌作用不明顯；對(duì)大腸桿菌有一定的抗菌能力。蒲公英提取液對(duì)黑曲霉的抗菌作用最強(qiáng)；對(duì)黃曲霉和銅綠假單胞菌的抗菌作用不明顯?？傮w來說，蒲公英的抗菌能力要強(qiáng)于金銀花，尤其是對(duì)黑曲霉、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的抗菌能力，均高于金銀花提取液；對(duì)于黃曲霉和銅綠假單胞菌來說，兩種提取液的抗菌能力均不理想。

2.2 抗氧化活性分析

DPPH·清除能力是評(píng)價(jià)生物活性成分清除自由基能力最廣泛使用的方法之一 (李倩倩等，2018)。以Vc為對(duì)照，測(cè)定了金銀花和蒲公英的抗氧化活性，結(jié)果如圖1所示。金銀花和蒲公英都對(duì)DPPH·自由基具有較強(qiáng)的清除能力， DPPH·自由基清除率分別為84.2%和94.5%。蒲公英的抗氧化活性高于金銀花。

圖1 蒲公英和金銀花的DPPH·自由基清除率

圖2 蒲公英和金銀花的紫外吸收率

2.3 抗曬活性

金銀花和蒲公英提取物的紫外線吸收數(shù)據(jù)如圖2和表2所示。金銀花對(duì)波段位200 nm～400 nm的紫外線的吸收能力要強(qiáng)于蒲公英。在UVA(320 nm～400 nm)段，金銀花的吸光度明顯高于蒲公英；在UVB(280～320 nm)和UVC(200 nm～280 nm)段金銀花的吸光度略高于蒲公英。

表2金銀花、蒲公英提取物紫外線吸收數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

本文通過對(duì)金銀花和蒲公英的75%乙醇提取物從抗菌性、抗紫外線性和抗氧化性三方面進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)。首先，兩者均對(duì)黃曲霉和銅綠假單胞菌的抗菌能力不明顯，對(duì)黑曲霉、大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的抗菌性而言，蒲公英要優(yōu)于金銀花；其次，蒲公英提取液的對(duì)自由基的清除率要高于金銀花提取液10.3%；最后，金銀花提取液線(UVA、UVB、UVC波段)的吸收能力要普遍高于蒲公英提取液。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以對(duì)以金銀花和蒲公英為主要成分的抗菌藥物、防腐劑、食品添加劑、抗氧化劑、防曬產(chǎn)品的開發(fā)提供一定的參考價(jià)值。