鄧麗娟，萬子昱，駱淑媛

(武漢東湖學院 生命科學與化學學院，湖北 武漢 430212)

1 引言

菊花為菊科菊屬多年生草本植物，以其獨有的食用、藥用和觀賞價值成為如今的研究熱點[1～3]。但是菊花的傳統(tǒng)繁殖方式存在生長繁殖周期長、繁殖系數低、易受季節(jié)氣候多變的影響等弊端[4，5]。因此，利用組織培養(yǎng)技術進行菊花的快速繁殖已經得到廣泛應用。在菊花的組織培養(yǎng)研究過程中，雖然諸多學者已對此做了大量的工作，但是依然存在著外植體內生菌污染、愈傷組織褐化、不定芽玻璃化、無菌苗優(yōu)良品種生根較難等問題[6～8]。本研究以菊花花瓣為外植體，就激素對菊花的誘導及分化培養(yǎng)的影響展開了初步研究，以期為菊花的產業(yè)化生產提供參考。

2 材料與方法

2.1 材料

采用菊花作為實驗材料。

2.2 試劑

母液濃度為1.0 g/L的6-BA、NAA及MS基本培養(yǎng)基配制所需試劑。

2.3 方法

2.3.1 誘導培養(yǎng)

取菊花花瓣，用自來水沖洗3～5次后，用70%乙醇浸泡10～15 s，無菌水清洗3～5次，再用2%次氯酸鈉溶液(加1滴Tween-80)浸泡3 min，最后用無菌水洗4～6次。將花瓣切割成0.5 cm×0.5 cm小塊，接種到含不同激素濃度的誘導培養(yǎng)基上，于25±1 ℃，光照強度為3000 lx的光照培養(yǎng)箱中，每天光照培養(yǎng)12 h。

2.3.2 分化培養(yǎng)

將愈傷組織接種于不同的分化培養(yǎng)基中，于25±1 ℃，光照強度為3000 lx的光照培養(yǎng)箱中，每天光照培養(yǎng)12 h。

2.3.3 生根培養(yǎng)

將分化培養(yǎng)得到的無根小苗，從中選取2～3 cm高，長勢相近，健壯的無根小苗轉移到生根培養(yǎng)基上，于25±1 ℃，光照強度為3000 lx的光照培養(yǎng)箱中，每天光照培養(yǎng)12 h。

3 結果與討論

3.1 激素對愈傷組織誘導的影響

將菊花花瓣接種到含不同激素含量的MS培養(yǎng)基中進行誘導培養(yǎng)，實驗結果表明：在接種菊花花瓣5 d后，各處理組相繼出現愈傷組織萌動，愈傷組織誘導率達到 62.5%以上，其中在含1.0～1.5 mg/L6-BA，0.3～0.5 mg/LNAA的MS培養(yǎng)基中，愈傷組織誘導率最高(表1，圖1)；在MS+1.0 mg/L6-BA+0.3 mg/L NAA培養(yǎng)基中，愈傷組織最先出現萌動，并且在進行分化培養(yǎng)前已有萌芽趨勢。因此，初步確定菊花花瓣誘導培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA。

表1 不同激素濃度對愈傷組織誘導培養(yǎng)的影響

3.2 激素對菊花愈傷組織分化培養(yǎng)的影響

將愈傷組織接種到含有不同激素濃度的分化培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)，實驗結果表明：在所有的處理組中，愈傷組織均出現萌芽趨勢(圖2)。其中，在含1.5 mg/L 6-BA和0.05 mg/LNAA的MS培養(yǎng)基中，愈傷組織的分化率最高，達100%(表2)。

圖1 菊花花瓣誘導培養(yǎng)21 d表2 不同激素濃度對分化培養(yǎng)的影響

注： -：表示幼苗生長狀況良好，無玻璃化現象；+：表示幼苗出現玻璃化現象

圖2 菊花花瓣愈傷組織分化培養(yǎng)第7 d

3.3 生根培養(yǎng)情況

將無根菊花苗植株接種到添加了0.3 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)9 d后，大部分無菌苗相繼長出主根；28 d后，小苗主根數繼續(xù)增多，主根變長，莖稈變粗，植株生長狀態(tài)良好，生根率達100%(圖3)。

4 結論

本研究以菊花花瓣為外植體進行離體培養(yǎng)，實驗結果表明：菊花花瓣誘導培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/LNAA，分化培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L6-BA+0.05 mg/LNAA，接種到生根培養(yǎng)基MS+NAA 0.3 mg/L中培養(yǎng)，生根率可達100%。

圖3 菊花苗生根培養(yǎng)28 d