王迪霖，郎韞哲，袁 見，陳昕昀，李 坤，王俐君，王 ?。?，徐 穎＊＊

（1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 上海 201203；2. 上海中醫(yī)藥大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院 上海 201203）

阿爾茨海默癥（Alzheimer's disease，AD）又稱老年癡呆，是一種進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，多發(fā)于老年人?；颊咧饕R床表現(xiàn)為記憶力逐漸減退、認(rèn)知功能發(fā)生障礙、行為異常和社交障礙等[1]。近年來(lái)，我國(guó)AD 的發(fā)病率與死亡率日益上升，也得到了社會(huì)的廣泛關(guān)注。

目前AD 的發(fā)生機(jī)制并不十分清楚，國(guó)際上也存在眾多假說(shuō)，如淀粉樣蛋白假說(shuō)、Tau 假說(shuō)、神經(jīng)炎癥假說(shuō)、神經(jīng)元丟失等假說(shuō)。其主要病理特征為大腦中Aβ 聚集形成的老年斑、過(guò)度磷酸化的tau 蛋白聚集而成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)（NFTs）、長(zhǎng)期炎性反應(yīng)以及神經(jīng)元死亡等[2,3]。

而中醫(yī)對(duì)AD 的治療方法更側(cè)重于從整體出發(fā)，并且中藥具有多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)、多環(huán)節(jié)、多途徑作用在研究老年癡呆疾病方面表現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[4]。建立在唐代孫思邈《備急千金要方》中益智健腦之代表方“開心散”基礎(chǔ)上的“調(diào)心補(bǔ)腎方”方藥組成包括黨參、石菖蒲、遠(yuǎn)志、茯苓、丹參、肉蓯蓉、枸杞子。具有安神解郁、提高記憶力、增強(qiáng)免疫力的作用。

我們利用Presenilin1/2 條件性雙基因敲除（presenilin1/2 conditional double knockout mice, PS cDKO）小鼠作為AD 模式小鼠，從行為學(xué)與生化指標(biāo)評(píng)價(jià)“調(diào)心補(bǔ)腎方”對(duì)PS cDKO 小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，為進(jìn)一步探索功效物質(zhì)基礎(chǔ)與新藥開發(fā)提供方向。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)PS cDKO 及其同窩野生型小鼠，共60 只，3-3.5月齡，體重27±5 g，雌雄各半，在上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，溫度控制在21±2℃，濕度45%-65%，12 h︰12 h 明暗交替。實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)相關(guān)規(guī)則進(jìn)行，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批號(hào)：SZY 201707015）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、藥物及主要試劑

行為學(xué)記錄儀（荷蘭Noldus Information Technology公司，型號(hào)：EthoVision XT），電泳儀（美國(guó)BIO RAD，型號(hào)：BR90518）；全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)（上海天能公司，型號(hào)：Tanon-4200SF）；熒光可視顯微鏡（德國(guó)Carl Zeiss，型號(hào)：Axio Imager 2）；RIPA 裂解液（批號(hào)：090717170930）購(gòu)自碧云天生物技術(shù)公司；脫脂奶粉（批號(hào)：6A310420）購(gòu)自Amresco 公司；BSA（批號(hào)：6531010160）購(gòu)自Genview 公司；ECL 顯影液（批號(hào)：SD246946）購(gòu)自Thermo Scientific 公司；DAB（貨號(hào)：D5637-5 G）購(gòu)自Sigma-Aldrich 公司；Triton X-100（批號(hào)：20121211）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；孵辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液（批號(hào)：K187712C）購(gòu)自中杉金橋公司。調(diào)心補(bǔ)腎方購(gòu)自上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，為配方顆粒（黨參1.2 g、石菖蒲1.2 g、遠(yuǎn)志1.2 g、茯苓1.2 g、丹參1.2 g、枸杞子1.2 g、肉蓯蓉1.2 g）。

使用的抗體信息如下：

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組與治療方法

60 只3～3.5 月齡的SPF 級(jí)PS cDKO 小鼠及其同窩野生型小鼠按照隨機(jī)分為3 組：野生型組（WT，n=20）、PS cDKO 組（cDKO，n= 20）及PS cDKO 加藥組（cDKO+TXBSF，n=20）；根據(jù)“人與動(dòng)物體表面積換算 法”，cDKO + TXBSF 組 食 用 含 有TXBSF（17913 ppm）的飼料，其余兩組食用普通飼料。60 d 后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，之后進(jìn)行腦組織取材，通過(guò)Western blot 等方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

長(zhǎng)寬高分別為為38 cm×38 cm×25 cm 的曠場(chǎng)箱頂部開放，內(nèi)面呈白色。設(shè)置寬9 cm 設(shè)置為邊緣區(qū)域。頂部正上方放置攝像頭。實(shí)驗(yàn)前用手安撫小鼠，實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠輕輕放入曠場(chǎng)箱的正中間任其自由活動(dòng)，由電腦和攝像頭記錄數(shù)據(jù)，15 min后取出小鼠。用75%的酒精棉球清除小鼠殘留的糞便及尿液，待酒精揮發(fā)后進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。

1.2.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

選取WT、PS cDKO、cDKO+TXBSF 組小鼠識(shí)別編號(hào)后從同側(cè)放入高架十字迷宮，面向開放臂。觀察小鼠是否進(jìn)入封閉區(qū)，時(shí)間為5 min。記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果待分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%的酒精棉球清除小鼠殘留的糞便及尿液，待酒精揮發(fā)后進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。

1.2.4 Y迷宮實(shí)驗(yàn)

Y 迷宮三個(gè)臂呈120°角水平布置，三個(gè)臂長(zhǎng)寬高分別為30 cm × 6 cm × 15 cm。選取WT、PS cDKO、cDKO + TXBSF 組小鼠識(shí)別編號(hào)后放入Y 迷宮中，一側(cè)用擋板檔起。所有小鼠從同側(cè)放入，任其自由活動(dòng)8 min。1 h 后撤去擋板，重復(fù)以上步驟記錄小鼠對(duì)于原閉合區(qū)的敏感程度并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果待分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%的酒精棉球清除小鼠殘留的糞便及尿液，待酒精揮發(fā)后進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。

1.2.5 恐懼實(shí)驗(yàn)

實(shí) 驗(yàn) 分 為：taining，contextual，cued 三 個(gè) 階 段。Training 階段：將小鼠置于恐懼實(shí)驗(yàn)箱中，另其自由活動(dòng)3 min，接下來(lái)給予持續(xù)28 s和75 db的聲音刺激，后給予2 s 的0.45 mA 的電刺激小鼠足底。記錄30 s 中小鼠除呼吸以外無(wú)任何活動(dòng)的僵直時(shí)間（freezing time）。Contextual階段：位于training階段的24 h后，將小鼠放入相同的恐懼實(shí)驗(yàn)箱中，不給予任何聲刺激及電刺激，記錄其在4 min 的內(nèi)除呼吸以外的僵直狀態(tài)時(shí)間。Cued 階段：位于Contextual 階段的1 h 后，將小鼠放入另外一個(gè)環(huán)境不同的恐懼箱中，不給予任何刺激，觀察記錄其在3 min 內(nèi)的僵直時(shí)間，再給予與Training 階段相同的聲音刺激后記錄3 min 中小鼠的僵直時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%的酒精棉球清除小鼠殘留的糞便及尿液，待酒精揮發(fā)后進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。

1.2.6 Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá)

各組小鼠用20%水合氯醛麻醉后快速斷頭取腦，用預(yù)冷的PBS 沖洗一遍后，快速剝離出海馬組織，將其置于凍存管放于液氮中，后放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

在使用時(shí)，取出組織標(biāo)本50 mg-80 mg，加入400 ul 的裂解液，研磨60 s 后提取出總蛋白，12000 rpm 離心15 min 后，取上清液即為總蛋白。采用BCA 法進(jìn)行蛋白定量，制成1 mg·mL-1蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，在-20℃下保存。將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用0.01 M PBS 梯度稀釋后，每個(gè)濃度取20 μl 加入到96 孔板中，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣本也使用同樣方法稀釋50倍，毎孔20 μl總體積，每組做三個(gè)復(fù)孔。各孔加入200 μl BCA 工作液，37℃隔水式恒溫培養(yǎng)箱放置30 min，使用酶標(biāo)儀562 nm 測(cè)定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品蛋白濃度。將樣品與5×Loading buffer 按比例混合均勻后并變性，室溫冷卻后進(jìn)行上樣，上樣量為10 μl/40 μg 蛋白。將各不同組別的蛋白樣品加入到電泳槽中相應(yīng)泳道電泳，先后用60 V 及80 V 恒壓電泳各0.5 h 后用100 V 恒壓直至溴酚蘭遷移至分離膠底部后停止，取出凝膠并放置在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。其后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，將凝膠切成適當(dāng)大小，NC 膜、濾紙和海綿墊均浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。于110 V 恒壓轉(zhuǎn)膜2 h，后將蛋白轉(zhuǎn)至NC 膜上。經(jīng)過(guò)封閉及一抗、二抗孵育及顯色后，在膜上滴加混勻的ECL 顯色劑，用凝膠成像儀采集圖像并讀取數(shù)據(jù)。用Image J 軟件分析目的蛋白光密度與內(nèi)參蛋白的光密度。

1.2.7 免疫組化染色方法

小鼠用麻醉后進(jìn)行4%多聚甲醛心臟灌注后取腦，用4%多聚甲醛后固定和蔗糖溶液梯度脫水后進(jìn)行OCT 包埋，保存于-80℃。包埋后用冰凍切片機(jī)將腦組織切成20 μm厚的冠狀面腦片。將挑選好的腦片用PBS 溶液洗10 min 后，用PBS、甲醇和3% H2O2的混合液（比例為5∶4∶1）孵育30 min。接下來(lái)用0.1%Triton X-100（溶于PBS）孵育10 min 透膜。用PBS 洗3次（每次10min）后用1% BSA 室溫封閉2 h，之后孵一抗4℃過(guò)夜。PBS 洗3 次（每次10 min）后孵二抗，孵育2 h。PBS 洗3次（每次10 min）后孵辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育15 min。PBS 洗3 次（每次10 min）后用0.05% DAB 孵育，待腦片顯色后用PBS 洗3次后貼片，過(guò)夜晾干。用二甲苯透明和乙醇梯度脫水，中性樹膠封片，最后用顯微鏡觀察，在高倍鏡下拍攝小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)。

圖1 TXBSF對(duì)PS cDKO小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響

圖2 TXBSF 對(duì)PS cDKO小鼠焦慮樣行為的影響

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均使用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean ± SEM）表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0 軟件分析，多組間的比較采用了One-way ANOVA 分析方法，多項(xiàng)間比較用LSD檢驗(yàn)，使用Graphpad Prism 7 制圖。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 TXBSF不影響PS cDKO小鼠運(yùn)動(dòng)能力

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要是反應(yīng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力和緊張焦慮狀況。由圖1 可知，PS cDKO 小鼠的運(yùn)動(dòng)距離比WT 組小鼠明顯增加（P＜0.05），而cDKO +TXBSF 小鼠的運(yùn)動(dòng)距離與PS cDKO 小鼠沒有顯著性差異，說(shuō)明TXBSF 并不會(huì)影響PS cDKO 小鼠的自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力；同時(shí)，3組小鼠在邊緣區(qū)域的時(shí)間百分比并沒有顯著性差異。

2.2 TXBSF改善PS cDKO小鼠的焦慮樣行為

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)試動(dòng)物進(jìn)入開放臂及封閉臂的次數(shù)及時(shí)間，以及在開放臂和封閉臂探索的時(shí)間占總測(cè)試時(shí)間的百分比對(duì)小鼠的焦慮狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)。由圖2可知，PS cDKO組小鼠較WT小鼠在開放臂逗留的頻率是降低的（P＜0.01），時(shí)間相比是增高的（P＜0.001），cDKO + TXBSF 組的小鼠較PS cDKO組小鼠在開放臂逗留的頻率是增加的（P＜0.01），時(shí)間是減少的（P＜0.05），并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明TXBSF能改善PS cDKO小鼠的焦慮樣行為。

2.3 TXBSF改善PS cDKO小鼠的空間記憶障礙

Y 迷宮主要用于研究嚙齒類動(dòng)物空間工作記憶，其完全是利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境探索的天性，由于動(dòng)物每次轉(zhuǎn)換探索方向時(shí)都需要記住前一次探索過(guò)的方向，因此Y 型迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛴行У販y(cè)定動(dòng)物的空間工作能力。由圖3可知，PS cDKO小鼠較WT組小鼠在閉合臂逗留的頻率和時(shí)間相比是降低的（P＜0.01），而cDKO+TXBSF 小鼠在閉合臂逗留的時(shí)間和頻率較PS cDKO 小鼠是增加的（P＜0.01），并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明TXBSF 能改善PS cDKO 小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。

2.4 TXBSF改善PS cDKO小鼠聯(lián)合記憶能力

恐懼實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)與小鼠的聯(lián)合記憶能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Training 階段3 組小鼠的僵直時(shí)間百分比均較低。Contextual 階段及Cued 階段，PS cDKO 小鼠的僵直時(shí)間百分明顯低于WT 組（P＜0.001），且cDKO+ TXBSF 小鼠的僵直時(shí)間百分比PS cDKO 小鼠高（P＜0.05）(圖4）。由此說(shuō)明，TXBSF 可以改善PS cDKO小鼠的聯(lián)合記憶能力。

圖3 TXBSF對(duì)PS cDKO小鼠空間記憶障礙的影響

圖4 TXBSF對(duì)PScDKO小鼠聯(lián)合記憶能力的影響

2.5 TXBSF 降低PS cDKO 小鼠海馬組織中促炎癥因子iNOS和COX-2蛋白表達(dá)

Western blot 的檢測(cè)結(jié)果顯示，海馬組織促炎癥因子誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）和環(huán)氧合酶2（cycloxygenase-2, COX-2）的蛋白表達(dá)水平在PS cDKO 小鼠較WT 小鼠是升高的（P＜0.001），而cDKO + TXBSF 小鼠較PS cDKO 小鼠是降低的（P＜0.01，P＜0.05，），TXBSF 降低了PS cDKO 小鼠海馬組織中促炎癥因子iNOS 和COX-2 的蛋白水平（圖5）。

圖5 TXBSF對(duì)PS cDKO小鼠海馬組織中iNOS和COX-2表達(dá)的影響

2.6 TXBSF 提高PS cDKO 小鼠海馬組織中突觸蛋白MAP2和PSD95的表達(dá)

與神經(jīng)元突觸功能相關(guān)的微管相關(guān)蛋白2（microtubule-associated protein 2, MAP2）以及突觸后致密蛋白95（Postsynaptic dlensity 95, PSD95）在PS cDKO 小鼠海馬中的表達(dá)較WT小鼠水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.001），而此兩種蛋白表達(dá)在cDKO + TXBSF 小鼠較PS cDKO 小鼠是升高的，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.001）（圖6）。表明TXBSF 改善PS cDKO 小鼠海馬組織神經(jīng)元和突觸損傷。

圖6 TXBSF對(duì)PS cDKO小鼠海馬組織中MAP2和PSD95蛋白表達(dá)的影響

2.7 TXBSF 阻止PS cDKO 小鼠海馬CA3 區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活

采用Iba1 抗體進(jìn)行DAB 免疫染色觀察3 組小鼠海馬CA3 區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)變化（圖7)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與WT 小鼠相比，PS cDKO 小鼠海馬CA3 區(qū)的小膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的激活狀態(tài)，出現(xiàn)胞體增大，突起回縮的阿米巴樣變化；然而cDKO + TXBSF 小鼠CA3區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活現(xiàn)象得到明顯改善。

圖7 TXBSF對(duì)PS cDKO小鼠海馬CA3區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響

3 討論

阿爾茨海默癥作為如今最受關(guān)注的神經(jīng)退行性疾病之一，近年來(lái)發(fā)病率與死亡率逐年上升。該癥患者會(huì)出現(xiàn)一定的學(xué)習(xí)記憶功能障礙。我們使用PS cDKO 小鼠作為AD 模型，從行為學(xué)與生化指標(biāo)評(píng)價(jià)“調(diào)心補(bǔ)腎方”對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的影響。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)通過(guò)攝像頭記錄的小鼠總運(yùn)動(dòng)距離與平均速度來(lái)判斷它們的自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力，記錄小鼠在邊緣區(qū)域的時(shí)間百分比來(lái)評(píng)價(jià)它們焦慮狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力的一種經(jīng)典行為學(xué)方法[5,6]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：PS cDKO小鼠較WT小鼠運(yùn)動(dòng)能力高，而TXBSF 不會(huì)影響小鼠的運(yùn)動(dòng)能力。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)試小鼠進(jìn)入開放臂及封閉臂的次數(shù)及時(shí)間以檢測(cè)小鼠的焦慮狀態(tài)及學(xué)習(xí)記憶能力[7]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PS cDKO 小鼠較WT 小鼠焦慮，TXBSF 能改善這一焦慮癥狀。同時(shí)PS cDKO 小鼠在開放臂逗留時(shí)間低于WT及cDKO+TXBSF 小鼠，說(shuō)明TXBSF 能改善PS cDKO 小鼠的焦慮樣行為。Y迷宮實(shí)驗(yàn)根據(jù)小鼠傾向于探索新異空間的天性，檢測(cè)小鼠對(duì)新異臂的空間記憶能力[8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PS cDKO 組小鼠在閉合臂的逗留頻率及時(shí)間比均比WT小鼠低，而TXBSF 治療之后，閉合臂逗留頻率及時(shí)間比明顯增加。說(shuō)明TXBSF 能改善PS cDKO 小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。條件性恐懼實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小鼠海馬-杏仁核依賴的恐懼記憶能力。在Contextual 階段與Cued 階段，cDKO + TXBSF 組的僵直時(shí)間百分比PS cDKO 組明顯增高且，說(shuō)明TXBSF 可以改善小鼠的對(duì)恐懼性時(shí)間的記憶能力有改善作用。關(guān)于TXBSF 能改善AD 小鼠學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的行為學(xué)能力的原因，我們推測(cè)是因?yàn)槠湔{(diào)節(jié)了小鼠腦組織中某些反映神經(jīng)元或突觸功能相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；并根據(jù)以前研究報(bào)道，PS cDKO小鼠腦內(nèi)神經(jīng)炎癥反應(yīng)明顯，我們進(jìn)一步推測(cè)TXBSF 可能通過(guò)抑制PS cDKO 小鼠的神經(jīng)炎癥反應(yīng)改善神經(jīng)元突觸功能。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，促炎癥因子iNOS 可引起NO 自由基的合成，并形成可損傷細(xì)胞膜的過(guò)氧亞硝酸鹽，導(dǎo)致細(xì)胞DNA 堿基損傷，細(xì)胞死亡[9]。而COX-2 在體內(nèi)炎性環(huán)境下被誘導(dǎo)表達(dá)，廣泛參與體內(nèi)的炎癥反應(yīng)[10]。iNOS 和COX-2 引起的炎癥能間接性地對(duì)海馬神經(jīng)元產(chǎn)生損傷。炎癥反應(yīng)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞可能會(huì)引起信號(hào)通路的改變，導(dǎo)致神經(jīng)元變性[11]。更有研究證實(shí)注射COX-2 抑制劑可顯著減少海馬中的神經(jīng)炎癥，提示外周炎癥會(huì)觸發(fā)COX-2 依賴性機(jī)制，誘導(dǎo)CNS 神經(jīng)炎癥[12]。我們對(duì)小鼠海馬組織中iNOS 和COX-2 蛋白表達(dá)采用Western blot 進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，TXBSF 可以降低PS cDKO 小鼠海馬組織中iNOS 和COX-2 表達(dá)，以及明顯抑制海馬CA3 區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，故表明TXBSF 可起到抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)的作用，以減少海馬體內(nèi)神經(jīng)元的損傷，改善小鼠的記憶能力。此外TXBSF 提高PS cDKO 小鼠海馬組織中反映突觸功能的MAP2和PSD95的蛋白表達(dá)。相關(guān)研究顯示，MAP2水平降低，將導(dǎo)致微管解聚，影響軸漿運(yùn)輸，造成神經(jīng)元變性[13,14]。而PSD95 蛋白作為突觸前后的主要標(biāo)志物，在突觸的形成和神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中起著基本支架蛋白的作用，其表達(dá)含量升高意味著神經(jīng)元突觸的功能得到改善[15-17]。故根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，TXBSF 可能通過(guò)抑制PS cDKO 小鼠神經(jīng)炎癥反應(yīng)并改善神經(jīng)元和突觸損傷，從而改善PS cDKO 小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙。

4 結(jié)論

中藥方劑TXBSF 能有效改善PS cDKO AD 模型小鼠的空間和聯(lián)合學(xué)習(xí)記憶能力。TXBSF改善PS cDKO小鼠記憶障礙的作用可能是通過(guò)降低海馬神經(jīng)炎癥反應(yīng)并改善神經(jīng)元突觸功能而實(shí)現(xiàn)的。