王艷豐，張丁華，朱金鳳，趙秀敏

（河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院牧業(yè)工程學(xué)院，河南 中牟 451450）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起豬的一種急性、高度傳染性、高致死性腸道傳染病，臨床特征為嘔吐、腹瀉和脫水[1]。不同年齡的豬均易感，但對仔豬危害最大，病死率最高。即使豬耐過存活，但康復(fù)后生長緩慢，飼料報(bào)酬降低，飼養(yǎng)成本增加，經(jīng)濟(jì)效益下降[2]。自2010年10月以來，由于PEDV變異株的出現(xiàn)，PED在我國一直大面積暴發(fā)。2013年以后，PED暴發(fā)導(dǎo)致美國豬場每年損失9億至18億美元，韓國40%的豬場受到影響，給生產(chǎn)者造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

目前，對PED尚無有效治療藥物，但采取抗病毒、防止細(xì)菌繼發(fā)感染、補(bǔ)液、止嘔及修復(fù)腸黏膜等措施，可有效減少該病引起的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)對自然感染PED的患豬采用不同治療方案進(jìn)行對比試驗(yàn)，并對治療效果進(jìn)行比較分析，以期篩選出有效治療PED的方案。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

2017年11 月至2018年3月，安陽市（AY）、開封市(KF)、周口市（ZK）、新鄉(xiāng)市（XX）4個(gè)豬場的339頭2～28日齡患病哺乳仔豬，臨床表現(xiàn)為水樣腹瀉、嘔吐和脫水等。

1.2 試驗(yàn)藥物

1）豬白細(xì)胞干擾素；2）中藥復(fù)方口服液（由白頭翁、黃連、黃柏、秦皮、葛根、黃芩、白術(shù)、黨參、茯苓等組成，按一定比例混合、煎煮3次，取上清液過濾后，制成生藥規(guī)格為1.0 g/mL）；3）復(fù)方乙酰甲喹（5%乙酰甲喹、慶大霉素、0.5%阿托品）。

1.3 疾病診斷

1.3.1 病理學(xué)診斷

尸體消瘦，嚴(yán)重脫水，眼窩凹陷，皮膚干燥，彈性降低。小腸壁菲薄，透明，內(nèi)有大量黃色液體，腸黏膜脫落，腸系膜淋巴結(jié)腫大或出血。胃內(nèi)含有灰白色凝乳塊，胃黏膜充血或出血。有的病例腎臟有少量針尖狀出血點(diǎn)，肝臟有灰白色壞死點(diǎn)。不同發(fā)病豬場病變存在一定差異。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

1）PEDV抗原檢測：采用韓國某公司生產(chǎn)的PEDV抗原檢測卡，按使用說明書進(jìn)行檢測，5～10 min內(nèi)判定結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AY、KF、ZK和XX豬場在對照線區(qū)（C）和檢測線區(qū)（T）各出現(xiàn)1條紫紅色線，故判定有PEDV感染。2）核酸檢測：經(jīng)PCR檢測除4個(gè)豬場均為PEDV陽性外，AY、ZK豬場PCV2陽性，KF豬場PRV為陽性。3）細(xì)菌分離鑒定：無菌取病死豬的肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)等組織，劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊血瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24～48 h，觀察菌落在各培養(yǎng)基的生長情況，挑取培養(yǎng)物涂片，革蘭染色鏡檢，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AY、ZK豬場有大腸桿菌混合感染。

經(jīng)病理學(xué)診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷，AY、ZK豬場為PEDV與PCV2、大腸桿菌混合感染，XX豬場為PEDV感染，KF豬場為PEDV與PRV混合感染。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

每個(gè)豬場選取典型病例隨機(jī)分成3組，分別是干擾素組（Ⅰ組）、中藥組（Ⅱ組）、抗生素組（Ⅲ組）。同一豬場各組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致，各試驗(yàn)組隔離飼養(yǎng)，用藥及處理情況見表1。

1.5 療效評價(jià)指標(biāo)

1）治愈：用藥物治療后臨床癥狀完全消失，精神及飲食恢復(fù)正常為治愈，統(tǒng)計(jì)治愈數(shù)計(jì)算治愈率。2）顯效：用藥物治療后臨床癥狀明顯減輕，精神及飲食恢復(fù)好轉(zhuǎn)的為治療顯效，統(tǒng)計(jì)顯效數(shù)計(jì)算顯效率。3)有效：為治愈率與顯效率之和。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 4個(gè)地區(qū)豬場3種治療方案對PED療效對比

停藥3 d內(nèi)觀察臨床癥狀，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)、治愈數(shù)、有效數(shù)等指標(biāo)并計(jì)算，結(jié)果見表2。

從表2可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組的治愈率分別為50.0%～66.7%、56.0%～ 82.1%、40.0%～ 50.0%，有效率分別為66.7%～80.0%、72.0%～92.9%、52.0%～70.0%，以Ⅱ組治愈率和有效率最高，其次是Ⅰ組，最后是Ⅲ組。不同治療方案在同一豬場治愈率和有效率不同，如AY豬場3組治愈率分別為66.7%、80.0%和50.0%；同一治療方案在不同地區(qū)的治愈率和有效率也不同，如Ⅱ組在4個(gè)地區(qū)的治愈率分別為80.0%、56.0%、73.3%和82.1%，說明治療效果會受諸多因素的影響。

2.2 3種治療方案對PED總體療效對比結(jié)果見表3

從表3可以看出，3種治療方案對PED有著不同的治療效果，其中以Ⅱ組治愈率和有效率最高，分別為72.9%和85.4%，死亡率最低，說明中藥復(fù)方口服液對PED具有良好的治療效果。從治愈率來看，Ⅰ組與Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），Ⅱ組與Ⅲ組相比差異極顯著（P＜0.01），Ⅰ組、Ⅱ組之間差異不顯著（P＞0.05）；從有效率來看，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），Ⅰ組、Ⅱ組之間差異不顯著（P＞0.05），說明中藥復(fù)方治療PED效果最好，顯著優(yōu)于抗生素組，同時(shí)表明干擾素也可用于PED的治療。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

表2 4個(gè)地區(qū)豬場3種治療方案對PED療效對比

表3 3種治療方案對PED總體療效對比（）

表3 3種治療方案對PED總體療效對比（）

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著（P＞0.05），不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），不同大寫字母表示差異極顯著（P＜0.01)。

Ⅰ組 60.3a 14.4 74.6a 25.4Ⅲ組 44.9Bb 17.5 62.4b 37.6

3 小結(jié)與討論

自2010年10月以來，我國10多個(gè)省市暴發(fā)PED，對養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。特別是PEDV變異株的出現(xiàn)，與傳統(tǒng)毒株(2012年前)的基因相比存在較大變異，使得現(xiàn)有的疫苗毒株CV777保護(hù)力不佳。目前用于治療PED的主要有生物制劑、藥物、植物提取物、小分子制劑和抑制劑等[3]，其中以中藥、干擾素臨床試驗(yàn)應(yīng)用報(bào)道較多。

干擾素（IFN）是受體細(xì)胞分泌的一種廣譜抗病毒糖蛋白，通過激活細(xì)胞中多種功能基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)各信號傳導(dǎo)通路的協(xié)同作用，從而發(fā)揮抗病毒、抗細(xì)菌、抗寄生蟲、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能，具有明顯的種屬特異性[4]。本次試驗(yàn)顯示IFN對PED的治愈率為50.0%～66.7%（平均為60.3%），與趙永旭等[5]報(bào)道的治愈率50%～70%接近，且在不同豬場使用效果差異較大，治愈率為37.5%～70.0%，但低于韓國英等[6]報(bào)道的治愈率92%，分析原因可能是與其人工感染后用藥較早，而自然病例存在感染程度、混合感染、感染日齡及繼發(fā)感染等影響因素有關(guān)。IFN對嚴(yán)重病例治療效果不佳，原因可能是仔豬PED感染嚴(yán)重時(shí)，腸道損傷較為嚴(yán)重，大量腹瀉導(dǎo)致機(jī)體脫水和酸中毒，僅用IFN不能緩解脫水和酸中毒癥狀。同時(shí)，IFN必須在病毒感染早期(此時(shí)體內(nèi)病毒尚未廣泛散布和引起嚴(yán)重病變)使用才能奏效，且需要反復(fù)多次使用。

中獸醫(yī)辨證認(rèn)為PED屬于濕熱毒邪內(nèi)蘊(yùn)所致。濕熱上蒸，故精神沉郁；胃失和降，故嘔吐；濕熱犯脾，故食欲減退；濕熱下迫，水濕不能分利，腸道傳導(dǎo)失職，故瀉如注，糞便腥臭，尿短少。治宜芳香化濁、健胃醒脾、除濕止瀉、補(bǔ)中益氣和清熱解毒[7]。中藥復(fù)方口服液由白頭翁散加味（葛根、黃芩、白術(shù)、黨參、茯苓等）而成。朱買勛等[8]研究發(fā)現(xiàn)由白術(shù)、茯苓、黃芪、黃芩等組成的復(fù)方，能明顯抑制PEDV的致病變作用，直接滅活作用和復(fù)制抑制試驗(yàn)效果比較明顯，細(xì)胞保護(hù)率均超50%。本次試驗(yàn)中藥口服液對PED治愈率為56.0%～82.1%（平均為72.9%），高于劉衍芬等[9]、尹寶英[10]報(bào)道的治愈率為50%和52%～54%，分析原因可能是與其未采取止嘔、補(bǔ)液等對癥治療措施有關(guān)，但低于楊云喬等[11]報(bào)道的治愈率86.7%。作用機(jī)制可能與中藥可以加速組織修復(fù)、減輕炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫，以及保護(hù)線粒體、穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)、調(diào)整酶活性和抗繼發(fā)感染有關(guān)[12]。

試驗(yàn)結(jié)果表明，IFN和中藥復(fù)方口服液均可作為治療PED的方法，其中以中藥復(fù)方效果較好。但兩者在治療時(shí)都必須配合止嘔、補(bǔ)液、減緩腸蠕動(dòng)及修復(fù)腸黏膜等治療措施，且治療時(shí)間越早，療效越好。但同一種治療方案在不同地區(qū)的不同豬場治療效果存在差異，主要與發(fā)病日齡、感染程度、治療時(shí)間、混合感染、療程，以及是否采取對癥治療措施等因素有關(guān)。

4 結(jié)論

中藥復(fù)方口服液由白頭翁、黃連、黃柏、秦皮、葛根、黃芩、白術(shù)、黨參、茯苓、石榴皮等組成，具有清熱解毒、涼血止痢、除濕止瀉等功效，對PED具有一定的治療效果。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，推薦中藥復(fù)方口服液按3～5 mL/頭或0.75 mL/kg體重，灌服，2次/d，連用5 d，對PED有良好的治療效果。同時(shí)，IFN作為具有廣譜抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，在感染早期治療亦有一定的效果。