段春建 王立萍 王青曉

鹽酸大觀霉素是氨基環(huán)醇類廣譜抗生素，對(duì)革蘭氏陽性菌和陰性菌均有抗菌作用。大觀霉素可以形成硫酸鹽或鹽酸鹽，20世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)其鹽酸鹽在較小的溶劑體積中更易溶解，且肌肉注射吸收更好，因此目前藥用的是鹽酸大觀霉素。

鹽酸大觀霉素制劑僅有注射用鹽酸大觀霉素，規(guī)格為2g，為無菌原料直接分裝?！吨袊幍洹?015年版（Chp 2015）二部收載原料及其制劑，美國藥典（USP 40）和日本藥典（JP 17）收載原料和注射劑，英國藥典2017（BP 2017）和歐洲藥典（EP 9.0）只收載原料。

注射用鹽酸大觀霉素臨床上用附帶的苯甲醇注射液配制成混懸液，進(jìn)行臀部肌肉注射。大觀霉素與鹽酸形成鹽酸大觀霉素，成鹽的不完全會(huì)影響其溶解和吸收，進(jìn)而影響其有效性。本研究建立了離子色譜法測定注射用鹽酸大觀霉素中氯離子的含量，進(jìn)而確定其成鹽比例。

一、儀器與試藥

Dionex ICS-5000離子色譜儀（美國Thermo公司），抑制型電導(dǎo)檢測器（陰離子抑制器ASRS300 4 mm）（美國Thermo公司）；Dionex Chromeleon色譜工作站；Sartorius BP211D電子天平（Sartorius公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

0.1024 mol/L鹽酸滴定液（河南省食品藥品檢驗(yàn)所），硫酸滴定液（河南省食品藥品檢驗(yàn)所），溴化鉀、硝酸鉀、亞硝酸鈉、草酸銨、氟化鈉，均為分析純?cè)噭?/p>

29批注射用鹽酸大觀霉素來源于2016年國家評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)樣品，涉及生產(chǎn)企業(yè)4個(gè)，分別以數(shù)字1～4表示。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.色譜條件

色譜柱為Dionex IonPac AS11-HC色譜柱（250mm×4mm，5μm），預(yù)柱為Dionex IonPac AS11-HC色譜柱（50mm×4mm，5μm）。 以 15mmol/L的氫氧化鉀溶液為淋洗液，等度洗脫，流速1.5mL/min；柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL，抑制電流為58mA，自循環(huán)模式。

圖1 混合離子溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.溶液制備

對(duì)照品溶液：精密量取1.0 mL鹽酸滴定液至25 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，制成含鹽酸約0.15 mg/mL的溶液。

供試品溶液：精密稱取注射用鹽酸大觀霉素約10 mg，置10 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中氯離子含量（以HCl計(jì)）。

三、結(jié)果討論

1.專屬性試驗(yàn)

取空白溶劑20 μL進(jìn)樣并記錄色譜圖。結(jié)果空白溶劑對(duì)測定無干擾。

分別取溴化鉀、硝酸鉀、亞硝酸鈉、草酸銨、氟化鈉、鹽酸滴定液、硫酸滴定液各適量，配制成各約0.15mg/mL的混合溶液，按色譜條件測定。結(jié)果各離子均可與氯離子較好分離，該法專屬性良好。見圖1～2。

2.線性關(guān)系

精密量取鹽酸滴定液適量，加水稀釋為鹽酸濃度為0.36mg/mL、0.29 mg/mL、0.15mg/mL、72.62μg/mL、36.31μg/mL、18.16μg/mL、7.26μg/mL、3.63μg/mL的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，以氯離子峰面積A為縱坐標(biāo)，鹽酸濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程A=584.94C-223.59（r=0.999）。結(jié)果表明，鹽酸濃度在3.63～363.11μg/mL范圍內(nèi)與氯離子峰面積的線性關(guān)系良好。

3.精密度與重復(fù)性試驗(yàn)

取含量測定對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，氯離子峰面積的RSD為0.2%。結(jié)果表明該方法精密度良好。

取同一批次供試品（批號(hào)160301），平行配制6份供試品溶液，分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖。計(jì)算鹽酸含量的RSD為0.4%，表明樣品的重復(fù)性良好。

4.檢測限與定量限

逐級(jí)稀釋對(duì)照品溶液，以信噪比（S/N）3∶1計(jì)，氯離子（以HCl計(jì)）的檢測限為2.5ng；以信噪比（S/N）10∶1計(jì)，氯離子（以HCl計(jì)）的定量限為5.4ng。

5.穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品（批號(hào)160301），配制供試品溶液，分別于0h、1h、2h、4h、8h、12h和24h進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，以氯離子峰面積為指標(biāo)考察溶液穩(wěn)定性。氯離子峰面積的RSD為0.2%，表明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

6.回收率試驗(yàn)

按樣品加標(biāo)回收法測定準(zhǔn)確度。稱取供試品（批號(hào)160301）約12.5mg，置25mL容量瓶中，精密加入鹽酸滴定液0.4mL、0.5mL、0.6mL，用水稀釋至刻度。每個(gè)濃度的溶液配制各三份，分別進(jìn)樣20μL，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.5% （n=9），RSD為0.9% （n=9），見表1。

7.樣品測定

對(duì)4家企業(yè)29批次注射用鹽酸大觀霉素樣品進(jìn)行氯離子含量測定（以HCl計(jì)），平均含量為14.8%。

四、結(jié)論

鹽酸大觀霉素為二鹽酸鹽五水合物，分子式為C14H24N2O72HCl·5H2O，結(jié)晶水的理論含量為18.2%，氯離子（以HCl計(jì)）的理論含量為14.7%。本研究測定29批次樣品中氯離子的平均含量為14.8%，與理論值相符。早期大觀霉素晶體是硫酸鹽形式，20世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)其鹽酸鹽在較小的溶劑體積中更易溶解，且肌肉注射吸收更好。本品為棒狀晶體結(jié)構(gòu)，成鹽比例穩(wěn)定，也利于本品的質(zhì)量穩(wěn)定。通過本實(shí)驗(yàn)的研究，可以有效控制注射用鹽酸大觀霉素中鹽酸的含量，并確定其成鹽比例